自動生化分析檢測方法的現(xiàn)狀及進展課件

2023/9/171自動生化分析檢測方法的現(xiàn)狀及進展

蚌醫(yī)一附院檢驗科李興武2023/8/51自動生化分析檢測方法的現(xiàn)狀及進展蚌醫(yī)一附2023/9/172一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質控四、測定項目間的順序安排2023/8/52一、生化分析儀的現(xiàn)狀2023/9/173一、生化分析儀的現(xiàn)狀自動化釋義：自動化即由機械化的儀器設備取代人的手工操作過程。2023/8/53一、生化分析儀的現(xiàn)狀自動化釋義：2023/9/174主要組成：計算機前處理反應模塊監(jiān)測計算模塊機械手模塊2023/8/54主要組成：2023/9/1752023/8/552023/9/176分類：連續(xù)流動式或管道式分立式——常用離心式干片式——急診常用2023/8/56分類：2023/9/177功能：隨計算機與電子技術的發(fā)展：向通用化、全自動、微量化、組合式（模塊）方向發(fā)展。即：測定技術與反應類型增多、測試速度快、通道多、軟件功能強、自動化程度高、樣品與試劑用量少、人工干預少。2023/8/57功能：2023/9/178功能：采用生物技術與機電控制技術有機融合，集生物技術、機械設計、精密儀器、工業(yè)控制、電機技術、傳感技術、通訊技術、計算機技術于一體自動化分析儀工作站2023/8/58功能：2023/9/179工作站：采用模塊化設計的思路，實現(xiàn)良好的可擴展性。結合條碼技術，再通過實驗室信息系統(tǒng)與醫(yī)院信息系統(tǒng)相連，可達到整個數(shù)據(jù)共享，乃至遠程共享(如獨立實驗室)。2023/8/59工作站：2023/9/1710全實驗室自動化(TotalLaboratoryAutomation,TLA)是指將臨床實驗室相互有關或互不相關的自動化儀器串聯(lián)起來,構成流水線作業(yè)的組合,形成大規(guī)模的全檢測過程的自動化.上世紀80年代末，日本Dr.Sasaki建立了世界上第一個組合式自動化實驗室2023/8/510全實驗室自動化(TotalLabora2023/9/1711全實驗室自動化體現(xiàn)以下幾個方面：1.提升快速回報結果的能力2.將檢驗報告的誤差減少到最?。簛碓从跇颖镜?0%，來源于分析的不到30%。3.全面提升臨床檢驗的管理2023/8/511全實驗室自動化體現(xiàn)以下幾個方面：2023/9/1712生化分析儀在國內的使用1.1980-1984：半自動及小型全自動為主，以美國儀器為主，國內開始研制試劑2.1984-1990：型號多樣，日本儀器增多，與自動化儀器配套的試劑盒投入生產(chǎn)3.1990-今：高速高質量的儀器，一些方法學淘汰，從大醫(yī)院開始逐步建立Lis系統(tǒng)，實現(xiàn)數(shù)據(jù)共享，逐步實現(xiàn)全實驗室自動化2023/8/512生化分析儀在國內的使用2023/9/1713未來實驗室組織及檢驗手段將向兩極化發(fā)展：★一方面是實驗室全自動化或全程自動化，自動化儀器將生化、免疫、血液、尿液及藥物檢測等合為一體?！锪硪环矫媸菍嶒炇覂x器的小型化，快速、即時、簡易的檢驗手段，用于現(xiàn)場檢驗、床邊檢驗、醫(yī)師診所和家庭。2023/8/513未來實驗室組織及檢驗手段將向兩極化發(fā)展：2023/9/1714一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質控四、測定項目間的順序安排2023/8/514一、生化分析儀的現(xiàn)狀2023/9/1715二、生化分析儀的測定方法終點法一點終點法二點終點法免疫比濁法雙波長法2023/8/515二、生化分析儀的測定方法終點法2023/9/1716一點終點法的設置：以R和S混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測定計算基點，以反應達到平衡的吸光度讀數(shù)減去空白讀數(shù)，校準曲線通過零點且成直線，對于反應速度快的多用：如TP、ALB等二、測定方法2023/8/516一點終點法的設置：二、測定方法2023/9/1717二、測定方法一點終點法反應曲線Al

T（時間）AS+R(吸光度）2023/8/517二、測定方法一點終點法反應曲線Al2023/9/1718二點終點法的設置：常用單試劑分析：當測定波長與干擾物的吸收光譜有重疊時(如脂血、溶血、黃疸)，消除樣本空白的干擾。如GLU500nm,Hb500nm(整個過程OD不變),通過雙波長可消除其干擾。二、測定方法2023/8/518二點終點法的設置：常用二、測定方法2023/9/1719二點終點法的設置：常用雙試劑法：除可消除樣本空白的干擾外，還可消除內源性物質的干擾。二、測定方法2023/8/519二點終點法的設置：常用二、測定方法2023/9/1720AmTAR2AlS+R1(吸光度）（時間）兩點終點Ax=樣本空白A2-kAl（液量校正系數(shù)）k

=S+VlS+Vm二、測定方法2023/8/520AmTAR2AlS+R1(吸光度）（時間2023/9/1721免疫比濁法通過物質對光的散射來測定物質含量的方法。散射比濁：特定蛋白分析儀透射比濁：自動生化分析儀通常作兩點終點法分析，多采用多點校準。應用：用Ab測定Ag（主要為微量蛋白：IG、C、APOA/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab過量，此時Ag-Ab復合物的生成量隨Ag的增加而遞增，光散射強度與抗原量成正比。二、測定方法2023/8/521免疫比濁法二、測定方法2023/9/1722雙波長法消除樣品中對測定有干擾的物質的影響；1.脂血：吸收光譜300～600nm呈下降趨勢2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm吸收峰3.膽紅素：300～500nm有吸收峰可見它們的吸收峰都較寬，且同測定波長有重疊現(xiàn)象。二、測定方法2023/8/522雙波長法二、測定方法2023/9/1723輔助波長的選擇：根據(jù)測定波長選擇輔助波長，要求干擾物質在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。如鉬酸銨法測P3＋用340nm，而Hb在340及380nm均有較高吸收峰，選380nm作為輔助波長。二、測定方法2023/8/523輔助波長的選擇：二、測定方法2023/9/1724連續(xù)監(jiān)測法屬于動態(tài)監(jiān)測法，或叫速率法，適用酶活性和代謝產(chǎn)物檢測，測定產(chǎn)物生成或底物消耗速度，多有酶參與，此法測酶的活力而不是酶的濃度（質量）。在零級反應期單位時間內的吸光度變化(反應速率△A/min)才與酶活力呈正比。二、測定方法2023/8/524連續(xù)監(jiān)測法二、測定方法2023/9/1725測定時間的選擇：監(jiān)測時間應根據(jù)所用儀器不影響檢測速度和結果的準確性選在時間反應進程曲線的線性期。通常：延遲時間：30-60秒監(jiān)測時間：>120秒二、測定方法2023/8/525測定時間的選擇：二、測定方法2023/9/1726酶活力計算有兩種方法1、絕對法：酶活力(U/L)=△A×(反應液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))2、相對法：(U/L或mmol/L)=[△A(測定)/△A(標準)］×標準物的活力或濃度二、測定方法2023/8/526酶活力計算有兩種方法二、測定方法2023/9/17271.連續(xù)監(jiān)測法

即零級反應速率法,亦稱斜率法在較長反應時間區(qū)段內(90-180秒)，每隔一定時間(5~30秒)讀取一次吸光度值，至少讀取4點，得到3個以上△A，最后算出反應速率△A/min。二、測定方法2023/8/5271.連續(xù)監(jiān)測法二、測定方法2023/9/17282.兩點速率法主要用于其反應過程不成線性，這樣只注意其反應的起始點和終止點，而忽視其中間過程的線性變化。如：測定苦味酸法測Cr，反應過程中VitC、丙酮酸、蛋白質等均可與苦味酸生成紅色化合物而干擾反應，通常選擇1min內的兩點進行測定。二、測定方法2023/8/5282.兩點速率法二、測定方法2023/9/1729AlTAS+R1R2A2(吸光度）（時間）速率法A/min=[(A2-A1)-(空白)]/(t2-t1)二、測定方法2023/8/529AlTAS+R1R2A2(吸光度）（時間A2TAS+R1A1R2(吸光度）（時間）兩點速率

Ax=A2-A1ttA2TAS+R1A1R2(吸光度）（時間）兩點速率Ax=A2023/9/1731速率B法1.一個通道內一次進行兩項反應相關的速率法測定2.用于干擾或／及樣品空白自動補償：在第一反應(干擾反應)一直維持線性的前提下，可以從第二反應(主反應)速率中扣除第一反應速率的延續(xù)影響。如用于消除膽紅素轉化為膽綠素吸光度下降、對肌酐苦味酸法測定的負干擾等二、測定方法2023/8/531速率B法二、測定方法2023/9/1732雙項同測法：指在不同時間向同一個比色杯加入幾種試劑，(一個通道內一次進行兩項反應相關的終點法)

。比如同測游離脂肪酸和甘油三酯。二、測定方法2023/8/532雙項同測法：二、測定方法3.空白校正：

a.Ax=某點吸光度-比色杯水空白

b.Ax=(終點測定吸光度-終點空白吸光度)一(始點測定吸光度-始點空白吸光度)

c.終點法(帶試劑空白)

=終點吸光度-R1點吸光度(試劑空白)

d.終點法(不帶試劑空白)

=終點吸光度-比色杯水空白

e.兩點法(自身空白)

=(加R2后測定點讀數(shù)-R1點讀數(shù))-(加R2前測定點讀數(shù)-R1點讀數(shù))2023/9/1733二、測定方法3.空白校正：

a.Ax=某點吸光度-比色杯水空白

b.Ax2023/9/1734一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質控四、測定項目間的順序安排2023/8/534一、生化分析儀的現(xiàn)狀2023/9/1735三、校準與質控校準：1.包括設備本身的校準（如波長、溫度、加樣量、空白吸光度等）2.測定項目的校準：是常規(guī)的工作內容2023/8/535三、校準與質控校準：項目的校準：多數(shù)項目的測定,其濃度同吸光度變化基本上成線性關系,選擇低、中、高三個校正點可獲得滿意的準確度。如果只設置一個校正點,盡量選擇一個中值校正點。校準項目的校準：多數(shù)項目的測定,其濃度同吸光度變化基本上成線性關2023/9/1737校準品的問題：測定系統(tǒng)應包括測定原理、試劑、儀器、校準品四要素1.校準品與方法、試劑、儀器是相關聯(lián)的，作用是減少系統(tǒng)誤差，用人血清基質，最好采用配套使用，或進行區(qū)域性的統(tǒng)一，有調查顯示使用相同校準液后其不同類型儀器測定結果更接近靶值2.選擇適合的校準品，包括數(shù)目、類型和濃度校準2023/8/537校準品的問題：校準3.有可能校準品應溯源到參考方法或參考物質4.校準頻度：通常至少6個月進行一次5.當更換試劑或不同的批號時；質控反映出異常的趨勢或偏移；儀器或者檢驗系統(tǒng)進行一次大的預防性維護或者更換了重要部件6.必須有校準計劃：有記錄和分析7.不同廠家生產(chǎn)的定值質控血清靶值之間有的相差較大，提示不能用定值質控血清代替校準品作校準用3.有可能校準品應溯源到參考方法或參考物質2023/9/1739線性校準方法K因數(shù)法兩點線性多點線性校準2023/8/539線性校準方法校準2023/9/1740K因數(shù)法主要用于酶活性的測定a)理論K值b)實測K值c)廠家給的K值d)校準K值校準2023/8/540K因數(shù)法校準2023/9/1741校準K因數(shù)法(一點法)t2C=K*(A2-A1)/(t2-t1)A2t1A1(S1)2023/8/541校準K因數(shù)法(一點法)t2C=K*(A22023/9/1742校準C2CnAxCxAsS1ABSC1As多點線性

（3～6個校準品經(jīng)線性一次回歸制成工作曲線）2023/8/542校準C2CnAxCxAsS1ABSC1A2023/9/1743校準非線性校準方法用于免疫比濁等測定常用Logit-logxpExponrenalSplineLinearGraph2023/8/543校準非線性校準方法Logit-logxp2023/9/1744校準Logit-logxp(對數(shù)方法）C1C2CxC3CnBA2A3AnAx2023/8/544校準Logit-logxp(對數(shù)方法）C2023/9/1745校準Exp(指數(shù)涵數(shù))C1BC2A2A3C3CxCnAxAn2023/8/545校準Exp(指數(shù)涵數(shù))C1BC2A2A32023/9/1746校準Spline(樣條涵數(shù)）C1C2CxCN-1CNBC3A2A3AxAN-1AN2023/8/546校準Spline(樣條涵數(shù)）C1C2Cx質控室內質控：對儀器的重復性進行監(jiān)控，采用定值或非定值，做標本前或中間做，繪圖，對失控進行分析記錄，查找原因。可直接傳入LIS系統(tǒng)，還可通過網(wǎng)絡進行遠程質控及數(shù)據(jù)圖形的上傳。質控室內質控：對儀器的重復性進行監(jiān)控，采用定值或非定值，做標2023/9/1748室間質評采用PT方案同一質評項目連續(xù)三次中有兩次PT<80%，則該項目為不滿意現(xiàn)場質評2023/8/548室間質評2023/9/1749一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質控四、測定項目間的順序安排2023/8/549一、生化分析儀的現(xiàn)狀四、測定項目間的順序安排生化分析儀多采用一根針吸取試劑,在吸取不同檢測項目的試劑之間僅有一個短暫的水沖洗的過程,若此過程無法達到徹底沖洗的目的,則可能會造成前后檢測項目之間的交叉污染。四、測定項目間的順序安排生化分析儀多采用一根針吸取試劑,在吸2023/9/1751四、測定項目間的順序安排ALT（IFCC），AST（IFCC）試劑中含有高活力LDH成分，有可能會對LDH的測定帶來干擾。ALP（IFCC），CK（NAC），CK-MB（NAC），CO2（PEPC），AMY（EPS）等試劑中含Mg2+有，可能會對其后Mg的測定帶來干擾。2023/8/551四、測定項目間的順序安排ALT（IFCC2023/9/1752CHE（BUTYRYLTHIOCHOLINE），CHO（CHODPAP），GLU（GODPAP），UA（URICASE），HBDH（DGKC