基本培養(yǎng)方法課件

一、培養(yǎng)操作前注意1.培養(yǎng)用物品的滅菌消毒（寫出物品清單）。2.操作臺消毒（各物品布局合理進(jìn)行紫外線消毒30分鐘）。3.洗手和著裝（原則上與外科手術(shù)相同）。4.火焰消毒（酒精燈使用、金屬器械、吸過培養(yǎng)液的吸管）。一、培養(yǎng)操作前注意二、培養(yǎng)操作中注意：動作準(zhǔn)確敏捷有序；培養(yǎng)用液開口后應(yīng)45度傾斜，不再重復(fù)使用的應(yīng)立即封口；一個吸管只能吸一種液體；不能面向操作臺講話或咳嗽。二、培養(yǎng)操作中注意：基本的培養(yǎng)方法懸滴培養(yǎng)方法：基本的培養(yǎng)方法懸滴培養(yǎng)用的凹載玻片單位：mm懸滴培養(yǎng)用的凹載玻片單位：mm（一）單蓋玻片培養(yǎng)方法（一）單蓋玻片培養(yǎng)方法左圖；凹載玻片支架右圖：單蓋玻片培養(yǎng)法操作圖解1、胚胎浸出液2、血漿3、心肌塊4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣壓7熱溶石蠟密封a為正確操作b錯誤操作左圖；右圖：單蓋玻片培養(yǎng)法操作圖解1、胚胎浸出液2、血漿38、將密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)9、培養(yǎng)7-8個小時，組織塊向外生長，培養(yǎng)24小時在組織塊外周形成生長暈（一圈薄而透明的細(xì)胞圈），48小時候生長減慢甚至停止。需要重新加入雞胚浸出液。8、將密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)蓋玻片法再培養(yǎng)1、2、眼科刀切除生長暈3方型培養(yǎng)物切為兩到四片4、5培養(yǎng)物漂洗6、7、再培養(yǎng)此方法易污染蓋玻片法再培養(yǎng)1、2、眼科刀切除生長暈3方型培養(yǎng)物切為（二）雙蓋玻片懸滴培養(yǎng)法（二）雙蓋玻片懸滴培養(yǎng)法

雙蓋玻片圖解：1、載體蓋玻片2、帶培養(yǎng)物蓋玻片雙蓋玻片圖解：與單蓋玻片不同之處：1、載體蓋玻片加一滴消毒純水貼到帶有組織塊的另一面。2、再培養(yǎng)時：直接取下帶培養(yǎng)物的蓋玻片漂洗，換一張新的載體蓋玻片,可減少污染。與單蓋玻片不同之處：二、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)方法20世紀(jì)50年代Carrel設(shè)計了卡氏瓶Earle設(shè)計了T-培養(yǎng)瓶二、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)方法用血漿固定組織塊的培養(yǎng)方法用血漿固定組織塊的培養(yǎng)方法圖:卡氏瓶培養(yǎng)組織塊1.消毒卡氏瓶2.火焰略燒瓶口3.取少量血漿加入瓶底4.再加等量胚胎浸出液5.接種組織塊7.上蓋8.消毒9加入培養(yǎng)液10.通氣圖:卡氏瓶培養(yǎng)組織塊1.消毒卡氏瓶2用透明紙固定組織塊的培養(yǎng)方法用透明紙固定組織塊的培養(yǎng)方法圖:內(nèi)放有孔透明紙的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)a.一個T培養(yǎng)瓶內(nèi)放有有孔透明紙b.卡氏瓶接種后圖解1.有孔透明紙2.組織塊3.培養(yǎng)液圖:內(nèi)放有孔透明紙的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)a.一個T培養(yǎng)瓶內(nèi)放有旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法：與前兩種培養(yǎng)方法不同之處：細(xì)胞或組織塊交替與培養(yǎng)液和空氣直接接觸，有利于細(xì)胞的生長。旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法：旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)方法用具a.簡易旋轉(zhuǎn)鼓，可放入培養(yǎng)箱內(nèi)b.帶旋轉(zhuǎn)鼓裝置的培養(yǎng)箱c.培養(yǎng)用的旋轉(zhuǎn)管1.示血漿的高度2.示接種組織間間距3.示加培養(yǎng)液4.示可放旋轉(zhuǎn)鼓內(nèi)培養(yǎng)d.放旋轉(zhuǎn)管的支架.(1.接種組織塊時用2.觀察時用)旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)方法用具a.簡易旋轉(zhuǎn)鼓，可放入培養(yǎng)箱內(nèi)b.帶旋四.灌注小室培養(yǎng)法優(yōu)點1.連續(xù)觀察活細(xì)胞的動態(tài)變化2.研究理化性質(zhì)對培養(yǎng)細(xì)胞的影響和作用3.活細(xì)胞的反應(yīng).四.灌注小室培養(yǎng)法不銹鋼培養(yǎng)小室圖A中央切面圖B側(cè)面圖(mm)不銹鋼培養(yǎng)小室圖A中央切面圖B側(cè)面圖(mm)灌注小室及灌注系統(tǒng)示意圖A.排液瓶B.受液瓶C.不銹鋼灌注小室D.扁錐型小孔道E、F、J.2號注射針頭G、H.塑料導(dǎo)管I玻璃導(dǎo)管K、L.14號注射針頭(塞以棉花)灌注小室及灌注系統(tǒng)示意圖A.排液瓶B.受液瓶C.不銹鋼五.培養(yǎng)板培養(yǎng)方法無菌條件下操作，在超凈工作臺下進(jìn)行五.培養(yǎng)板培養(yǎng)方法無菌條件下操作，基本培養(yǎng)方法課件培養(yǎng)過程：1、取材并制備擬用于培養(yǎng)的細(xì)胞懸液2、接種細(xì)胞，取下培養(yǎng)板的蓋子，用吸管吸取一定量的細(xì)胞懸液，加到培養(yǎng)板的各孔內(nèi)3、給培養(yǎng)板各孔補加足夠的培養(yǎng)液4、加蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（貼壁能力弱的細(xì)胞在接種后放置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5小時，使細(xì)胞黏附牢靠后再補加充足的營養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)）5、每隔2-3天換液，換液時先將舊的培養(yǎng)液吸出，加入平衡鹽溶液洗滌，吸出平衡鹽溶液，再加入新的培養(yǎng)液。蓋上蓋子繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程：1、取材并制備擬用于培養(yǎng)的細(xì)胞懸液六、轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)六、轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)基本培養(yǎng)方法課件基本培養(yǎng)方法