基于析因設計分析的補氣生血方劑對小鼠的補血作用

基于析因設計分析的補氣生血方劑對小鼠的補血作用

當歸補血湯是缺血性生血的代表。在制備中，黃鼠尾（5）強調(diào)脾臟和肺的氣，以資氣生物的來源作為君主藥物。當歸（1）。二者配伍,陽生陰長,氣旺血生。然補氣之藥非黃芪一物,尚有人參、西洋參、黨參等;補血之品亦非當歸一味,另有熟地黃、阿膠、白芍等。那么,補氣生血之方劑,黃芪與當歸的配伍是否屬最佳?可否由其他補氣藥加上補血藥替代?本文運用析因設計法將不同補氣藥與補血藥組成72個補氣生血方劑,觀察以上藥對對失血性血虛模型小鼠外周血象的影響,并與補氣生血代表方當歸補血湯進行對照,尋求發(fā)揮最佳藥效的方劑配伍。1材料表面1.1特效藥1.2制備生藥濃度10.7gml-1稱取補氣藥15g,補血藥3g,加蒸餾水浸泡1h,然后加200mL和100mL蒸餾水煮沸2次,每次1h,合并水煎液,濃縮至生藥質(zhì)量濃度0.6g·mL-1。與阿膠配伍的藥對,先煎補氣藥,阿膠烊化后加入煎煮好的藥液中。1.3動物小白鼠,昆明種,體重18~22g,清潔級。均由江西中醫(yī)學院動物中心提供,合格證號SCXK-2005-0001。1.4設備2方法2.1立法中補氣藥與補血藥配比的確定除上表中的72個組外,另設空白對照組和模型對照組,本文各補氣生血方劑按當歸補血湯的經(jīng)典配比,即補氣藥與補血藥按5∶1配比組成,根據(jù)體表面積法換算成動物所用的劑量。2.2小鼠血象值的測定取296只小鼠,分為空白組、模型組、各給藥組,每組4只,雌雄各半。造模前各組小鼠眼眶采血,用血球分析儀測定正常血象值。然后每只小鼠眼眶放血0.5mL,造成血虛模型。從造模當天起,各給藥組ig給與相應的藥物,每組給藥量均為12g·kg-1,0.2mL/只?？瞻捉M和模型組給予等量的生理鹽水,連續(xù)10d,測定造模后第1,4,7,10天的外周血液指標變化。2.3析因設計材料實驗數(shù)據(jù)運用SPSS15.0軟件處理。本實驗運用析因設計安排試驗,測定了造模后不同時間點的外周血象值,因此取第4,7,10d的紅細胞(RBC),血紅蛋白(HGB),紅細胞壓積(HCT)值進行析因設計重復測量資料的統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗得總體方差相等,符合分析條件。3結(jié)果3.1補氣藥對rbc結(jié)果見表2,不同時間點血虛小鼠RBC,HGB,HCT的差異有統(tǒng)計學意義。補氣藥各水平對RBC,HGB,HCT的影響有統(tǒng)計學意義,補血藥各水平對RBC的影響沒有統(tǒng)計學意義,補氣藥與補血藥不存在交互作用。補氣藥的不同對補氣生血方劑作用的影響大于補血藥。3.2hct的作用結(jié)果見表3。邊際均數(shù)為補氣藥各水平和補血藥各水平對RBC,HGB,HCT作用重復測量中所有測定值的均值。黃芪、黨參、扁豆有升高RBC,HGB,HCT的作用,與模型組相比有統(tǒng)計學意義。補血藥中當歸、阿膠、何首烏、白芍有升高RBC的作用,與模型組相比有統(tǒng)計學意義。3.3不同通過配方的治療結(jié)果見表4。表中列出補氣生血方劑作用較好的補氣生血方劑的邊際均數(shù)。黨參熟地黃、黃芪阿膠、黃芪當歸、黃芪熟地黃、黃芪何首烏等補血作用較好,與模型相比有明顯差異,這幾組方劑之間作用大小沒有差異。結(jié)合表2中結(jié)果,黃芪在補氣藥中效果最好,當歸在補血藥中效果最好,因此確定黃芪當歸為最佳配伍。4不同補氣藥配伍對血藥濃度的影響《脾胃論》中說:“血不自生,須得生陽氣之藥,血自旺矣?！薄稖夭l辯》中說:“血虛者,補其氣而血自生?！币虼?血虛者補血時,已加入補氣之品,以助生化,或者重補氣以生血;如因大失血而致血虛者,尤以補氣以顧脫,使氣旺則血生。失血性血虛小鼠模型類似大失血而致血虛。重復測量資料是指同一觀察對象在不同時間點上多次測量同一指標所得到的資料,對于同一觀察對象而言,多次測量值之間可能存在相關性。本實驗運用析因設計法,將不同的補氣藥和補血藥組成的方劑進行研究,測定了不同時間點的外周血象變化,綜合不同時間點的RBC,HGB,HCT數(shù)據(jù)進行全面分析。本文通過析因設計發(fā)現(xiàn)失血性血虛小鼠補氣藥中黃芪效果最好,除黃芪外,補氣藥黨參、扁豆、人參、靈芝在與補血藥配伍時也有很好的升高RBC,HGB,HCT的作用,補血藥中當歸效果最好。黃芪當歸配伍方劑作用與模型組相比有明顯差異,因此綜合結(jié)果確定黃芪當歸為最佳配伍,與經(jīng)典名方當歸補血湯相符。在補氣生血方劑中,補氣藥對結(jié)果的影響大于補血藥,各補血藥之間作用沒有明顯差異,在與不同補氣藥配伍是就會產(chǎn)生明顯的差異。分析原因為在補氣藥與補血藥配伍時,補氣藥的量大,補血藥的量小,重補氣以生血,因此補血藥之間的作用差異沒有明顯的表現(xiàn)。析因分析法是一種多因素設計,其試驗組數(shù)是因素水平數(shù)的乘積。以中醫(yī)理論為指導,按不同治法或君、臣、佐、使的配伍關系,或藥物性味的不同,或按“藥對”關系可以進行拆方分析。該方法最大的優(yōu)勢是在中醫(yī)理論指導下進行分組,結(jié)合統(tǒng)計學方法進行實驗,大大地減少了工作量。但對于多水平的實驗設計,實驗組數(shù)仍然過于龐大。本實驗2個因素,第1個因素有12水平,第2個因素有6個水平,全部的組合共有12×6=72種,因而該方法難于適合于現(xiàn)代組方特別是大組方的研究。補氣藥:人參、西洋參、黨參、太子參黃芪、白術、山藥、扁豆、甘草、大棗、刺五加、靈芝補血藥:當歸、熟地黃、何首烏、白芍、阿膠、龍眼肉。均購自北京鶴元堂醫(yī)藥科技有限公司,以上藥材均由江西中醫(yī)學院付小梅副教授鑒定。血球分析儀Sysmex-2000iV(SysmexCorporation,日本)。在本實驗中,