自動(dòng)生化分析儀操作方法

四 血液臨床酶學(xué)診斷血清酶的總活性測(cè)定酶是由組織細(xì)胞合成的具有特別催化功能的蛋白質(zhì)，是對(duì)化學(xué)反響具有強(qiáng)化的催化性，對(duì)作用物由嚴(yán)格選擇性的生物催化劑。酶的活性是對(duì)酶的催化力氣大小的度量。酶活性的測(cè)定就是PH，離子強(qiáng)度，底物濃度等多種因素的影響，故酶的活性都是用在特定條件下，單位時(shí)間內(nèi)，酶促反響中低物的消耗量或產(chǎn)物的生成量來進(jìn)展測(cè)定。酶活性的測(cè)定承受手工或自動(dòng)生化的兩種方法進(jìn)展測(cè)定。自動(dòng)生化分為半自動(dòng)分析儀和全自動(dòng)兩種。半自動(dòng)由手工完成樣品及反響混合體遞送，局部操作由儀器自動(dòng)完成。全自動(dòng)生化則是從加樣到出結(jié)果的全過程完全由儀器自動(dòng)完成。按儀器簡(jiǎn)潔的程度及功能分類分為小型，中型，大型自動(dòng)。小型一般分為單通道，中型為多通道，2－10各工程，大型多通道的儀器可同時(shí)測(cè)10個(gè)以上工程，分析工程可自由選擇。MD－100型半自動(dòng)簡(jiǎn)介：本儀器是由美國(guó)Sysmtey生化儀器公司生產(chǎn)。該儀器承受單一通道，可連程測(cè)試20個(gè)以上的工程。該儀器主要分為計(jì)算機(jī)把握系統(tǒng)，吸樣泵，光學(xué)系統(tǒng)比色池三個(gè)局部。MD-100型半自動(dòng)操作：〈130分鐘?！?〉用專用清洗液或自配3%84消毒液清洗儀器。如儀器久未使用需翻開儀器側(cè)小門，取下吸樣泵小管，用注射器來回推入清洗液，清洗吸樣通道?！?〉進(jìn)入所測(cè)工程的界面，點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)右鍵編輯工程參數(shù)。〈4〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵進(jìn)入運(yùn)行工程。〈5〉按儀器提示的方法進(jìn)展下一步操作，依次吸取空白試劑、標(biāo)準(zhǔn)試劑、樣本試劑測(cè)試?！?〉本工程測(cè)試完畢，需用專用清洗液或自配3%84消毒液清洗?！?〉退出工程測(cè)試，在根名目下關(guān)閉電源。乳酸脫氫酶〔LDH-L〕測(cè)定a原理L-乳酸+NAD正離子——→丙酮酸+NADH+氫離子b試劑原裝診斷試劑盒c方法取確定量的R2〔Tris緩沖液PH8.9，100mmol/L;KCl100mmol/L;L-乳酸鋰52mmol/L〕R1〔NAD6.5mmol/L〕輕輕搖動(dòng)，并倒置幾次，完全溶解后，即為工作液。工作液工作液蒸餾水樣品空白管1.00ml0.02ml-------樣品管1.00ml------0.02ml混合均勻，在7℃保溫30秒鐘，讀取初始吸光度〔波長(zhǎng)340n，同時(shí)開頭計(jì)時(shí)，在準(zhǔn)確的2，3〔△A/分〕d上機(jī)操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數(shù)：點(diǎn)右鍵進(jìn)入編輯參數(shù)界面。移動(dòng)鼠標(biāo)至溫度設(shè)置處，設(shè)定溫度為371.00ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至樣品吸入量處，設(shè)定樣品吸入量為0.02ml1min30〈2〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵，進(jìn)入運(yùn)行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試空白管，再按提示吸入測(cè)定試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試樣品管?！?〉儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果，人工記錄或儀器自動(dòng)輸出結(jié)果?！?〉本工程測(cè)試完畢，點(diǎn)擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動(dòng)退出界面。計(jì)算LDH〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系數(shù)〕×1000=8095V1=反響總體積 V2=樣品體積NADH340nm=6.3留意事項(xiàng)〈1〉當(dāng)△A/0.190.3ml0.1ml4?！?〉復(fù)溶后溶液變混濁，或初始吸光度大于0.5,則不能使用。臨床意義乳酸脫氫酶總活性上升見于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、貧血、肌養(yǎng)分不良、腎病綜合癥。天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔AST/GOT〕測(cè)定a原理L-天冬氨酸+ａ-酮戊二酸——→草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+氫離子——→L-蘋果酸+NAD正離子+水b試劑原裝診斷試劑盒方法波長(zhǎng)：340nm溫度：37℃比色杯光徑：1cmR2〔TrisPH7.8,80mmol/L;L240mmol/L〕R1〔ａ-酮戊二酸12mmol/L;NADH0.18mmol/L;蘋果酸脫氫酶≥1000U/L；LDH≥5000U/L〕空白管樣品管工作液1.00ml1.00ml蒸餾水0.10ml--------樣品------0.10ml11，2，3分鐘時(shí)，分別讀取吸光度，確定每分鐘平均吸光度的變化〔△A/分。上機(jī)操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數(shù)：點(diǎn)右鍵進(jìn)入編輯參數(shù)界面。移動(dòng)鼠標(biāo)至溫度設(shè)置處，設(shè)定溫度為371.00ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至樣品吸入量處，設(shè)定樣品吸入量為0.1ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至保存處，按鍵點(diǎn)擊保存。移動(dòng)鼠標(biāo)至讀數(shù)時(shí)間處，設(shè)定讀3030〈2〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵，進(jìn)入運(yùn)行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試空白管，再按提示吸入測(cè)定試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試樣品管?！?〉儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果，人工記錄或儀器自動(dòng)輸出結(jié)果?！?〉本工程測(cè)試完畢，點(diǎn)擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動(dòng)退出界面。計(jì)算AST〔U/L〕=〔△A/分－△A/分〕×FF=V1÷〔V2×消光系數(shù)〕×1000=1746V1=反響總體積 V2=樣品體積NADH340nm=6.3留意事項(xiàng)〈11分鐘，△A/0.4003A/分0.200時(shí)，樣品用生理鹽水稀釋后重測(cè)定，結(jié)果乘稀釋倍數(shù)。〈21.000，勿用?！?〉僅用于體外診斷，內(nèi)含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽?！?2—82—80℃下存放。臨床意義GOT急性心肌炎、慢性腎盂腎炎。葡萄糖〔Glu〕測(cè)定a原理Glu+氧氣+水——→葡萄糖酸+雙氧水雙氧水+4-氨基安替吡啉+酚——→醌亞胺+水試劑原裝診斷試劑盒方法波長(zhǎng)：505nm溫度：37℃比色杯光徑：1cm10mlR1〔葡萄糖氧化酶≥13000U/L；過氧化物酶≥900U/L〕90mlR2空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管工作液1.50ml1.50ml1.50ml蒸餾水0.01ml------------標(biāo)準(zhǔn)-----0.01ml------樣品-----------0.01ml分別混勻，37℃10-15A標(biāo)準(zhǔn)和A上機(jī)操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數(shù)：點(diǎn)右鍵進(jìn)入編輯參數(shù)界面。移動(dòng)鼠標(biāo)至溫度設(shè)置處，設(shè)定溫度為371.50ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至樣品吸入量處，設(shè)定樣品吸入量為0.01ml22〈2〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵，進(jìn)入運(yùn)行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試空白管，再按提示吸入標(biāo)準(zhǔn)試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)管，接下來按提示吸入測(cè)試試劑，儀器自〈3〉儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果，人工記錄或儀器自動(dòng)輸出結(jié)果。〈4〉本工程測(cè)試完畢，點(diǎn)擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動(dòng)退出界面。計(jì)算葡萄糖濃度=AA葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液5.55mmol/L(100mg/dl)留意事項(xiàng)〈1〉樣品葡萄糖濃度超過22.2mmol/L(400mg/dl)時(shí)，樣品量可減半，改為5ul，標(biāo)準(zhǔn)量不變，重2。〈2〉僅用于體外診斷，內(nèi)含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽?！?2—82—80℃下存放。臨床意義〈1〉血糖上升見于糖尿病、應(yīng)激、臨時(shí)性高血糖癥、內(nèi)分泌紊亂、慢性肝臟疾病、馬疝痛?！?〉血糖降低見于仔豬低血糖、牛酮血癥、腎上腺皮質(zhì)功能減退、甲狀腺功能降低、進(jìn)展性肝病、嚴(yán)峻腎性糖尿病?？偟鞍住睺P〕測(cè)定a原理在堿性條件下，蛋白質(zhì)多肽鏈中的肽鍵與銅離子絡(luò)合形成紫紅色化合物。b試劑原裝診斷試劑盒c方法波長(zhǎng)：546nm溫度：25℃比色杯光徑：1cm空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管試劑1.00ml1.00ml1.00ml生理鹽水12.5ul-----------標(biāo)準(zhǔn)------12.5ul------樣品------------12.5ul10A標(biāo)準(zhǔn)和A上機(jī)操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數(shù)：點(diǎn)右鍵進(jìn)入編輯參數(shù)界面。移動(dòng)鼠標(biāo)至溫度設(shè)置處，設(shè)定溫度為371.00ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至樣品吸入量處，設(shè)定樣品吸入量為12.5μl移動(dòng)鼠標(biāo)至保存處，按鍵點(diǎn)擊保存。移動(dòng)鼠標(biāo)至讀數(shù)時(shí)間處，設(shè)定讀22〈2〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵，進(jìn)入運(yùn)行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試空白管，再按提示吸入標(biāo)準(zhǔn)試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)管，接下來按提示吸入測(cè)試試劑，儀器自〈3〉儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果，人工記錄或儀器自動(dòng)輸出結(jié)果。〈4〉本工程測(cè)試完畢，點(diǎn)擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動(dòng)退出計(jì)算總蛋白濃度=AA〔g/L〕留意事項(xiàng)〈1100g/L，可用生理鹽水稀釋樣品，再重測(cè)定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。〈225℃，測(cè)定值偏高。白蛋白〔A〕測(cè)定a原理在PH4.2環(huán)境中，溴甲酚綠在有非離子去垢劑聚氧乙烯月桂醚存在時(shí)，可與蛋白形成藍(lán)綠色復(fù)合物。試劑原裝診斷試劑盒方法波長(zhǎng)：630nm溫度：37℃比色杯光徑：1cm試劑試劑生理鹽水標(biāo)準(zhǔn)樣品空白管1.50ml5ul------------標(biāo)準(zhǔn)管1.50ml------5ul------樣品管1.50ml------------5ul5A標(biāo)準(zhǔn)和A上機(jī)操作程序〈1〉按試劑盒說明書編輯參數(shù)：點(diǎn)右鍵進(jìn)入編輯參數(shù)界面。移動(dòng)鼠標(biāo)至溫度設(shè)置處，設(shè)定溫度為371.50ml;移動(dòng)鼠標(biāo)至樣品吸入量處，設(shè)定樣品吸入量為5.00μl22〈2〉點(diǎn)擊輕軌鼠標(biāo)左鍵，進(jìn)入運(yùn)行界面，按儀器提示，先行清洗吸入空白試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試空白管，按提示吸入測(cè)試試劑，儀器自動(dòng)測(cè)試樣品管?！?〉儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果，人工記錄或儀器自動(dòng)輸出結(jié)果?！?〉本工程測(cè)試完畢，點(diǎn)擊退出鍵，儀器提示清洗，清洗完畢，儀器自動(dòng)退出界面。計(jì)算白蛋白濃度=AA〔g/L〕留意事項(xiàng)〈160g/L可用生理鹽水稀釋樣品，再重測(cè)定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)?！?〉僅用于體外診斷，內(nèi)含迭氮鈉，避開直接接觸皮膚和眼睛，切勿吞咽。〈32—82—80℃下存放。臨床意義〈1〉血清總蛋白，白蛋白及球蛋白/球蛋白比值減低者見于肝功能損害如脂肪肝、肝硬化、腎炎、惡性貧血、惡病質(zhì)?！?〉總蛋白、球蛋白上升、白蛋白/球蛋白比值下降者見于各種感染及慢性肝臟疾病?！?〉血清總蛋白上升，但白蛋白/球蛋白比值不變者見于各種緣由的腹水。血清同工酶的測(cè)定催化功能一樣而構(gòu)造不同的一類酶，稱為同工酶。同工酶具有適應(yīng)生物進(jìn)化需要、符合器官的代謝功能、協(xié)調(diào)各細(xì)胞器的代謝反響、理順病理特別代謝等功能。LDHILDH主要存在于骨骼肌、心臟、腎臟，其次是肝臟、胰腺、肺臟、腫瘤組織等，紅細(xì)胞內(nèi)含量也很豐富。5LDH1-存在與心臟、紅細(xì)胞、腦和睪丸。LDH2-存在于平滑肌、心肌、腦、腎、骨骼和甲狀腺。LDH3LDH4LDH5原理以聚丙烯酰胺作電泳介質(zhì)，經(jīng)電泳后分別后顯色，用光密度計(jì)掃描，以確定各型同工酶的相對(duì)百分率。試劑的配制⑴PH8.9Tris:6g EDTA:1.17g NaCl:1.0g 100ml,4⑵丙烯酰胺貯藏液丙烯酰胺：30g雙丙烯酰胺：0．８g 加重蒸餾水溶至100ml,4℃保存。⑶2.28％的過硫酸銨(每周配):過硫酸銨:4.0g 加水溶至100ml。⑷4％三乙醇胺⑸電泳緩沖液〔PH8.3〕Tris:0.6g甘氨酸:2.88g加水至100ml,410⑹40％的蔗糖0.1‰⑻1molDL-乳酸鈉:9.35ml60g/dl50ml。⑼NADNND：100mg10ml，4℃；保存，可用兩周。⑽0.1NaClNaCl:584mg100ml。⑾5mMMgCl2MgCl2·6H2O：100mg100ml。⑿0.5M〔PH7.4〕KH2PO468gNaOH調(diào)整PH7.450g/ml,NaOH22ml1000ml。⒀NB〔氯化硝基四氯唑藍(lán)：NBT50ml加水至50m，4℃保存。⒁PM〔酚秦甲脂硫酸鹽：1mg/m℃保存暗處。⒂7.575ml100ml。操作：〈1〉制凝膠：PH8.91.8ml1.8ml,4﹪0.8ml5.1ml,4﹪0.5ml5-7cm5cm〈240﹪1：25ul1：1于電泳槽中參與已稀釋的電泳緩沖液，上槽中參與溴酚蘭液6〈3300，電泳約1h〔點(diǎn)樣于陰極，電泳方向從陰極向陽(yáng)極。〈4〉完畢電泳后，取出凝膠：置培育皿中?！?〉染色液：1M乳酸鈉溶液：3.0ml,NAD溶液:3.0ml,0.1MNaCl溶液:3.0ml,5mMMgCl2溶液:3.0ml,0.5M7.5ml,NBT7.5ml,PMS:0.75ml,混勻于培育37℃25-30〈67.5﹪冰醋酸溶液中,24h后放入水中保存?！?〉掃描、計(jì)算。dLD1、LD2上升為主，LD1＞LD2 見于急性心肌梗死、肺梗死、腎梗死、惡性貧血。LD3、LD2，上升為主見于惡性淋巴瘤、血小板增多、肺、胰、脾壞死