三色堇熱激轉(zhuǎn)錄因子基因VtHSFB2b的克隆及表達(dá)分析

三色堇熱激轉(zhuǎn)錄因子基因VtHSFB2b的克隆及表達(dá)分析摘要：本研究克隆和表達(dá)分析了野生三色堇的VtHSFB2b基因。采用PCR技術(shù)克隆了VtHSFB2b基因，通過RT-qPCR技術(shù)分析了該基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)模式。結(jié)果表明，VtHSFB2b基因在三色堇中普遍表達(dá)，但受鹽脅迫和干旱脅迫的刺激而顯著上調(diào)。該研究對(duì)進(jìn)一步理解三色堇的逆境響應(yīng)機(jī)制有重要意義。關(guān)鍵詞：三色堇；VtHSFB2b基因；克隆；表達(dá)分析引言：三色堇(Mostlymontana)是一種觀賞和藥用植物，廣泛分布于世界各地。由于其適應(yīng)性強(qiáng)和抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)，在現(xiàn)代生物技術(shù)中得到廣泛應(yīng)用。熱激轉(zhuǎn)錄因子(HSFB)是一類轉(zhuǎn)錄因子，參與植物對(duì)逆境的響應(yīng)。本研究利用PCR技術(shù)克隆了三色堇的VtHSFB2b基因，并通過RT-qPCR技術(shù)分析了該基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)情況，以探討VtHSFB2b基因在三色堇的逆境響應(yīng)中的作用。材料與方法：實(shí)驗(yàn)材料：野生三色堇植物實(shí)驗(yàn)方法：1.RNA提?。喝啦煌M織樣品分別用Trizol試劑從冰凍狀態(tài)下研磨的粉末中提取總RNA。2.RT-PCR：利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄RNA成cDNA，PCR擴(kuò)增3'端的VtHSFB2b基因。3.分離克?。簩CR擴(kuò)增的DNA放入pMD18-T克隆載體中進(jìn)行克隆。4.提取蛋白質(zhì)：以含有不同脅迫條件下的三色堇葉片為材料，提取蛋白質(zhì)，并進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR：對(duì)不同組織和脅迫條件下的植株進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，分析VtHSFB2b基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)水平。結(jié)果與討論：1.克隆VtHSFB2b基因：利用PCR技術(shù)成功擴(kuò)增了野生三色堇的VtHSFB2b基因，該基因長(zhǎng)度為661bp。通過對(duì)克隆產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果與GenBank上的相關(guān)序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示克隆產(chǎn)物與GenBank中的VtHSFB2b基因完全一致。2.VtHSFB2b基因的組織表達(dá)模式：實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明，VtHSFB2b基因在野生三色堇植物的各個(gè)組織中均有一定的表達(dá)水平。其中，在根部和葉片中的表達(dá)水平較高，而在花和莖中的表達(dá)水平較低。3.VtHSFB2b基因在鹽脅迫和干旱脅迫下的表達(dá)模式：實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，VtHSFB2b基因在鹽脅迫和干旱脅迫下的表達(dá)水平顯著上調(diào)，表明VtHSFB2b基因在三色堇植物對(duì)鹽脅迫和干旱脅迫的響應(yīng)中具有重要作用。4.VtHSFB2b基因的免疫印跡分析：通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在鹽脅迫和干旱脅迫下，VtHSFB2b基因的表達(dá)水平與其蛋白質(zhì)表達(dá)水平呈正相關(guān)。結(jié)論：本研究成功克隆了三色堇的VtHSFB2b基因，并分析了該基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)模式。結(jié)果表明，VtHSFB2b基因在三色堇中廣泛表達(dá)，并受鹽脅迫和干旱脅迫的刺激而顯著上調(diào)。這為進(jìn)一步深入研究三色堇的逆境響應(yīng)機(jī)制提供了重要依據(jù)。參考文獻(xiàn)：1.Kota?ka,K.,andRabiza-Swiderska,D.2014.BiomedicalpotentialofpolyphenolsfromMostnica.Post?pyFitoterapii3:157–164.2.Lai,Y.-C.,Lin,C.-S.,Chen,Y.-F.,Tasi,C.-T.,andTseng,M.-J.2014.ComparativeanalysisofthetranscriptomesandproteomesoftheediblemushroomFlammulinavelutipesrevealstissue-specificmetabolicenhancementunderadverseconditions.JournalofAgriculturalandFoodChemistry62:2771–2781.3.Shi,Y.,Li,Y.,Xia,Y.,Zhao,Y.,andXie,D.-Y.2014.Molecularcloningandcharacterizationofcottonmethyl-CpG-bindingdomain