靈芝液體發(fā)酵天然培養(yǎng)基響應(yīng)面優(yōu)化研究

摘要靈芝是我國醫(yī)藥寶庫中一種珍貴滋補中藥材，具有很好的保健作用及很高的藥用價值。液體深層發(fā)酵技術(shù)是一種具有較大開發(fā)利用前景的靈芝生產(chǎn)方法。本實驗利用液體深層發(fā)酵技術(shù)，與傳統(tǒng)的半合成培養(yǎng)基進行對比，觀察靈芝菌絲生長狀況及多糖含量的變化，設(shè)計了一種選用可食用原料按比例配制的液體天然培養(yǎng)基。結(jié)果表明：液體天然培養(yǎng)基配比為蔗糖40g/L，豆粉26g/L，鈣鎂片1.60g/L，氯化鉀0.50g/L，靈芝菌絲生長旺盛，靈芝生物量為16.0g/L，胞外多糖含量為1.91g/L。關(guān)鍵詞：靈芝；液體深層發(fā)酵；液體天然培養(yǎng)基；多糖

AbstractGanodermalucidumisakindofprecioustonicChineseherbalmedicine,Chinesemedicineithasverygoodhealthcarefunctionandmedicinalliquidsubmergedfermentationtechnologyofhighhavegreaterdevelopmentandutilizationprospectofganodermalucidumisakindofproductionmethodofthisexperimentusingliquidsubmergedfermentationtechnology,comparedwiththetraditionalsemisyntheticmedium,thenobservethechangesofganodermalucidumhyphagrowthandpolysaccharidecontent,designakindofnaturalediblerawmaterialsaccordingtotheproportionoftheliquidculturemedium.Theresultsshowedthat:theproportionofliquidnaturalmediumwassucrose40g/L,soybeanpowder26g/L,calciumandmagnesiumtablets1.60g/L,potassiumchloride0.50g/L,thegrowthofganodermalucidummyceliumwasvigorous,thebiomassofganodermalucidumwas16.0g/L,andthecontentofextracellularpolysaccharidewas1.91g/LKeywords：Ganodermalucidum;Liquidfermentation;Liquidnaturalmedium;polysaccharide目錄1引言 21.1靈芝概述 21.2靈芝保健功能及價值 21.3靈芝主要活性成分 31.3.1靈芝多糖 31.3.2三萜類化合物 31.3.3靈芝蛋白質(zhì)和氨基酸 31.4靈芝液體深層發(fā)酵 41.5研究背景及意義 42材料和方法 52.1材料、藥品和儀器 52.1.1菌種 52.1.2主要試劑 52.1.3主要儀器設(shè)備 52.2方法 52.2.1菌種活化 52.2.2液體培養(yǎng)基 62.2.3種子培養(yǎng)及液體發(fā)酵 62.2.4單因素試驗 62.2.5響應(yīng)面設(shè)計 62.3發(fā)酵參數(shù)測定方法 72.3.1生物量測定－－干重法 72.3.2胞外多糖的測定 73結(jié)果與分析 73.1單因素試驗 73.1.1不同濃度的豆粉對靈芝生物量的影響效果 73.1.2不同濃度的鈣鎂片對靈芝生物量的影響效果 83.1.3不同濃度的氯化鉀對靈芝生物量的影響效果 93.2響應(yīng)面設(shè)計 93.3響應(yīng)面分析 103.3.1響應(yīng)面分析 103.3.2響應(yīng)面結(jié)果驗證 154討論 15致謝 17參考文獻 18靈芝液體發(fā)酵天然培養(yǎng)基響應(yīng)面優(yōu)化研究1引言1.1靈芝概述靈芝(Ganodermalucidum)屬于真菌界（Eumycota）,擔子菌門(Basidiomycota),擔子菌綱(Basidiomycetes),非褶菌目(Aphyllophorales)，靈芝科(Ganodermataceae)，靈芝屬(Ganoderma)真菌[1]。靈芝的化學組成復雜，目前通過分離得到的化合物有150多種，可將其分為多糖類、三萜類、氨基酸蛋白質(zhì)類、核苷類、微量元素、生物堿類、油脂類等10大類[2]。靈芝普遍分布于全世界各地，如今已有250多個種被記錄，主要生長在氣候濕熱地區(qū)。我國的靈芝真菌資源分布較為廣泛，主要散布于北京、浙江、福建、江蘇、江西、河北、山東、湖北、湖南、廣東、廣西、河南、云南、四川、陜西、西藏、臺灣等地[3]。1.2靈芝保健功能及價值靈芝是非常珍貴的藥用真菌，在我國有長達兩千多年的藥用歷史，素有靈丹妙藥之美譽?，F(xiàn)代醫(yī)學研究已經(jīng)表明：靈芝具有提高機體免疫力,降血脂、降血壓、降血糖，增強心臟活力,保護肝臟,抗氧化及抗衰老等作用[4－7],廣泛應(yīng)用于免疫治療神經(jīng)衰弱、慢性肝炎、支氣管炎、高血壓、胃潰瘍、糖尿病及腫瘤等[8]。同時，靈芝作為一種藥食同源的菌類，具有很高的營養(yǎng)食用價值。早在兩千多年前，中國就有針對食用靈芝的記載，李時珍[9]在《本草綱目》一書中也指出：“昔四酷采芝，群仙服食，則芝菌屬可食者，故移入菜部”，并在隨后的幾千年發(fā)展中賦予了靈芝飲食文化極其豐富的文化內(nèi)涵。靈芝除了傳統(tǒng)的煲湯、煎水等食用方法外，隨著人們對靈芝認識的不斷加深和科技的不斷發(fā)展，靈芝的食用方法也有了更多的創(chuàng)新。如目前最有開發(fā)前景的功能性食品是將靈芝多糖加入啤酒、茶、咖啡中從而完善其原有風味。種類豐富的靈芝產(chǎn)品不僅極大地開辟了靈芝食品市場，而且已經(jīng)投入生產(chǎn)的靈芝制劑也均取得了一定的臨床療效[10]。1.3靈芝主要活性成分1.3.1靈芝多糖靈芝多糖約有200多種，大多為雜多糖[12，13]，包含了胞內(nèi)多糖和胞外多糖[14]，是靈芝提取物中最關(guān)鍵的藥效成分之一[11],它主要來源于菌絲體、子實體、靈芝發(fā)酵胞外液以及孢子粉。靈芝多糖的藥理作用包括免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老[51]、降血糖、抗糖尿病及其并發(fā)癥、抗炎、抗菌等[15－17]。由此，靈芝多糖引起了國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注和藥科技工作者的重視。1.3.2三萜類化合物三萜類化合物是一種特殊的化學成分，在靈芝中占比較高。目前，主要是從靈芝子實體、菌絲體以及孢子粉中分離而得。對其結(jié)構(gòu)進行分析[18]，主要包含靈芝酸、靈芝醇、靈芝醛等等，其中以靈芝酸為最主要的活性物質(zhì)[31]。三萜類化合物具有止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒保肝、抗HIV、抵抗過敏、降低血壓、降膽固醇和預(yù)防齲齒等多種保健作用[19]。1.3.3靈芝蛋白質(zhì)和氨基酸靈芝蛋白質(zhì)是除了多糖和三萜類物質(zhì)外，另一種重要的活性物質(zhì)[20]。如今，靈芝蛋白質(zhì)的研究越來越受到人們的重視，各項報道表明其結(jié)構(gòu)和生物活性的研究均獲得了重大進展。靈芝中主要包括糖蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白、酶、凝集素等多種蛋白質(zhì)[18]，在抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗癌作用上療效顯著[23]。靈芝中還含有多種人體所必需的氨基酸[30]，具有很高的營養(yǎng)食用價值。1.4靈芝液體深層發(fā)酵20世紀40年代末期，食用菌液體深層發(fā)酵的研究出現(xiàn)在人們的視野中。最早對液體深層培養(yǎng)進行研究的是1948年在美國的Humfeld等應(yīng)用深層發(fā)酵培養(yǎng)蘑菇菌絲體，而后,液體深層發(fā)酵技術(shù)就成為了食用菌培養(yǎng)中較為主要的一項技術(shù)。上海植物生理研究所陳美幸等人于1960年進行香菇深層發(fā)酵研究是我國較早對深層發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用[22]。與傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法相比較，食用菌液體深層發(fā)酵技術(shù)具備更為明顯的優(yōu)勢。PH、氧氣飽和度、溫度和碳氮比等是與菌絲細胞生長息息相關(guān)的重要因素，在液體深層培養(yǎng)中不僅可以將生長環(huán)境調(diào)節(jié)成菌絲細胞最適宜的狀態(tài)，使其能在短時間內(nèi)產(chǎn)生豐富的菌絲體。液體深層發(fā)酵技術(shù)可使食用菌生產(chǎn)菌絲的生長環(huán)境無差異，進而縮短周期，促進產(chǎn)量的增加和保證質(zhì)量的穩(wěn)定，可以實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。研究還表明，液體深層發(fā)酵培養(yǎng)所獲得的菌絲體,其營養(yǎng)成分與子實體、菌核營養(yǎng)成分相當[21]。因此，食用菌液體深層發(fā)酵技術(shù)值得進行更為深入的研究與開發(fā)。1.5研究背景及意義[25－28]，但是傳統(tǒng)的靈芝深層發(fā)酵培養(yǎng)基多是人工合成的，其中可能添加某些提高產(chǎn)量的化學藥品，所以這些培養(yǎng)基需要投入較高成本，且安全性較難保證，營養(yǎng)單一，不合適用作食品開發(fā)的原材料和產(chǎn)品，因此，深層發(fā)酵的濾液往往被廢棄，限制了靈芝功能性飲品的發(fā)展。經(jīng)測定,濾液營養(yǎng)十分豐富,含有各種未被利用的營養(yǎng)活性物質(zhì)，這些物質(zhì)功能活性高，值得被進一步利用[24]。本實驗設(shè)計了一種選用可食用原料按比例配制的液體天然培養(yǎng)基，不添加任何化學藥品來培養(yǎng)靈芝，發(fā)酵后的菌絲體烘干制成菌粉或用于提取活性成分應(yīng)用于醫(yī)藥和保健品行業(yè)，同時由于培養(yǎng)基中添加的成分均可食用，發(fā)酵液可通過精深加工處理制成飲料,風味獨特,具有很高的營養(yǎng)食用價值，為研發(fā)新型飲料、進一步開辟食用菌資源有一定的現(xiàn)實意義。2材料和方法2.1材料、藥品和儀器2.1.1菌種靈芝菌種34號，寧德師范學院生命科學學院微生物工程實驗室提供。2.1.2主要試劑瓊脂；葡萄糖；蔗糖；酵母粉；玉米粉；豆粉；磷酸二氫鉀；硫酸鎂；鈣鎂片；氯化鉀；5%苯酚；濃硫酸；95%乙醇；實驗用水均為去離子水。2.1.3主要儀器設(shè)備表2-1主要儀器設(shè)備儀器或設(shè)備名稱型號生產(chǎn)廠家鼓風干燥箱DHG-9023A上海飛越實驗儀器有限公司紫外可見分光光度計UV-5800PC上海元析儀器有限公司恒溫培養(yǎng)搖床THZ-103B上海一恒科學儀器有限公司離心機TDZ5-WS上海盧湘儀器有限公司手提式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-SG46-280S上海三申醫(yī)療器械有限公司雙人單面凈化工作臺SW-CJ-2D上海滬凈醫(yī)療器械有限公司電子天平Y(jié)P802N上海精密科學儀器有限公司移液槍Ppetman系列法國吉爾森多功能電磁爐C21-RK2101上海元山電器工業(yè)有限公司恒溫水浴鍋HH-4常州億通分析儀器制造有限公司2.2方法2.2.1菌種活化配制PDA培養(yǎng)基，分裝到150ml玻璃試管內(nèi)，121℃高壓滅菌20分鐘，擺斜面冷卻至室溫。在超凈工作臺上將靈芝菌絲塊接種至PDA培養(yǎng)基，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天，待菌絲鋪滿斜面2/3，菌絲茁壯致密，將其放入4℃冰箱保藏，即為斜面菌種。2.2.2液體培養(yǎng)基PDB培養(yǎng)基：將馬鈴薯切塊，稱取200g，加入1L去離子水煮沸直至玻璃棒可輕易戳碎馬鈴薯，用紗布過濾后加入20g葡萄糖攪拌至完全融化，倒入容量瓶中定容至1L。用量筒分別取80ml裝至250ml錐形瓶中，然后121℃高壓滅菌2h后取出，冷卻至室溫待用。2.2.3種子培養(yǎng)及液體發(fā)酵將PDB培養(yǎng)基與菌種置于超凈工作臺上紫外滅菌45分鐘左右后，將菌種接種到PDB培養(yǎng)基中，然后置于恒溫培養(yǎng)搖床中（28℃，160rpm）培養(yǎng)4-5天。培養(yǎng)期間，觀察生長情況。4-5天后，菌絲體生長良好，大小均勻，發(fā)酵液透明不渾濁，則可將菌種從PDB培養(yǎng)基中接種到半合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基中，然后置于恒溫培養(yǎng)搖床中（28℃，160rpm）培養(yǎng)4-5天。培養(yǎng)期間，觀察靈芝菌絲體生長狀況和發(fā)酵液情況。2.2.4單因素試驗豆粉濃度優(yōu)化培養(yǎng)基：4%蔗糖+（0.3%～2.5%）豆粉+0.1%磷酸二氫鉀+0.05%硫酸鎂+1L去離子水，PH自然。鈣鎂片濃度優(yōu)化培養(yǎng)基：4%蔗糖+2.1%豆粉+0.1%磷酸二氫鉀+（0.032%～0.192%）鈣鎂片+1L去離子水，PH自然。氯化鉀濃度優(yōu)化培養(yǎng)基：4%蔗糖+2.1%豆粉+（0.0125%～0.075%）氯化鉀+0.128%鈣鎂片+1L去離子水，PH自然。在確定液體天然培養(yǎng)基的碳源為蔗糖，氮源為豆粉時進行培養(yǎng)基優(yōu)化。首先對豆粉的濃度進行優(yōu)化，選取豆粉濃度選取3g/L～25g/L；在確定最優(yōu)豆粉濃度后，對鈣鎂片的濃度進行優(yōu)化，其濃度選取0.32g/L～1.92g/L；確定最優(yōu)鈣鎂片濃度后，對氯化鉀的濃度進行優(yōu)化，濃度選取0.125g/L～0.75g/L.2.2.5響應(yīng)面設(shè)計Box-Behnken設(shè)計適用于多個要素的優(yōu)化試驗。本實驗以蔗糖、豆粉、鈣鎂片、氯化鉀作為自變量（X1、X2、X3、X4），靈芝生物量作為響應(yīng)，運用Design-Expert軟件對試驗結(jié)果進行響應(yīng)面分析。表2-2自變量濃度范圍設(shè)計自變量（g/L）最低濃度（g/L）均值濃度（g/L）最高濃度（g/L）蔗糖濃度254055豆粉濃度162126鈣鎂片濃度0.961.281.60氯化鉀濃度0.380.500.622.3發(fā)酵參數(shù)測定方法2.3.1生物量測定－－干重法用四層紗布分別過濾半合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基，收集發(fā)酵液和菌絲體。其中，菌絲體用無菌水清洗3次以上，放鼓風干燥箱中65℃烘干至恒重（時長24h），在電子天平上稱量菌絲體干重。2.3.2胞外多糖的測定3結(jié)果與分析3.1單因素試驗3.1.1不同濃度的豆粉對靈芝生物量的影響效果圖3-1不同濃度的豆粉對靈芝生物量的影響效果，由圖3-1可知，隨著豆粉濃度不斷升高，靈芝生物量呈先增加后減少的趨勢，當豆粉濃度達到21g/L時，靈芝生物量最多，可達14.75g/L，且上升趨勢較大。3.1.2不同濃度的鈣鎂片對靈芝生物量的影響效果圖3-2不同濃度的鈣鎂片對靈芝生物量的影響效果蔗糖濃度為40g/L，豆粉濃度為21g/L時，磷酸二氫鉀濃度為1g/L，由圖3-2可知，隨著鈣鎂片濃度不斷升高，靈芝生物量呈先增加后減少再增加的趨勢，當鈣鎂片濃度為1.28g/L時，靈芝生物量最高，可達17.25g/L。雖然當鈣鎂片濃度進一步提高至1.92g/L后仍有上升，考慮到成本問題，選擇鈣鎂片濃度為1.28g/L作為合適配比。3.1.3不同濃度的氯化鉀對靈芝生物量的影響效果圖3-3不同濃度的氯化鉀對靈芝生物量的影響效果蔗糖濃度為40g/L，豆粉濃度為21g/L時，鈣鎂片濃度為1.28g/L，由圖3-3可知，隨氯化鉀濃度不斷升高，靈芝生物量呈先減少后增加再減少的趨勢，當氯化鉀濃度達到0.5g/L時，靈芝生物量最多，可達15.63g/L。3.2響應(yīng)面設(shè)計Box-Behnken試驗設(shè)計及結(jié)果見表3-4表3-4BBD試驗設(shè)計及結(jié)果序號蔗糖濃度（g/L）豆粉濃度（g/L）鈣鎂片濃度（g/L）氯化鉀濃度（g/L）生物量（g/L）140.0021.001.280.5013.125255.0021.001.280.6214.375

325.00

26.001.280.5012.375440.0026.000.960.5015.250

525.0021.001.280.6213.625640.0016.000.960.5012.000

725.0021.001.280.3813.500855.0021.000.960.5012.500

940.0016.001.280.6212.750

1040.0026.001.280.3814.0001155.0016.001.280.5011.375

1240.0026.001.600.5016.000

1340.00

26.001.280.6215.6251455.0026.001.280.5014.125

1540.0021.001.600.3813.500

1625.0016.001.280.5011.8751740.0016.001.280.3812.625

1855.0021.001.600.5013.7501940.0016.001.600.5012.7502040.0021.001.600.6213.5002125.0021.000.960.5013.500

2240.0021.000.960.6212.625

序號蔗糖濃度（g/L）豆粉濃度（g/L）鈣鎂片濃度（g/L）氯化鉀濃度（g/L）生物量（g/L）2340.0021.000.960.3814.250

2455.0021.001.280.3812.750

2525.0021.001.600.5014.1253.3響應(yīng)面分析3.3.1響應(yīng)面分析圖3-5由三維分析圖可知，蔗糖濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨豆粉濃度的升高而增加。豆粉濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨蔗糖濃度的升高先增加后減少。圖3-6豆粉與鈣鎂片交互作用的響應(yīng)面圖3-3所示，豆粉與鈣鎂片的等高線不呈橢圓形，交互作用顯著，由三維分析圖可知，鈣鎂片濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨豆粉濃度的升高而增加。豆粉濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨鈣鎂片濃度的升高而增加。圖3-7鈣鎂片與氯化鉀交互作用的響應(yīng)面圖3-4所示，鈣鎂片與氯化鉀的等高線不呈橢圓形，交互作用顯著，由三維分析圖可知，鈣鎂片濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨氯化鉀濃度的升高而增加。氯化鉀濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨鈣鎂片濃度的升高而增加。圖3-8蔗糖與氯化鉀交互作用的響應(yīng)面圖3-5所示，蔗糖與氯化鉀的等高線不呈橢圓形，交互作用顯著，由三維分析圖可知，蔗糖濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨氯化鉀濃度的升高而增加。氯化鉀濃度固定時，靈芝菌絲體生物量隨蔗糖濃度的升高先增加后減少。3.3.2響應(yīng)面結(jié)果驗證運用Design-Expert軟件預(yù)測最佳培養(yǎng)基的配方為蔗糖40g/L，豆粉26g/L，鈣鎂片1.60g/L，氯化鉀0.50g/L，生物量可達14.8506g/L。在此預(yù)測下進行發(fā)酵試驗，所得實際生物量為16.0g/L，與預(yù)測值較為接近。4討論傳統(tǒng)上，靈芝主要來源于野外采集或人工栽培，但其所需培養(yǎng)空間大，生長周期較長，勞動強度大，生產(chǎn)效率低，又容易受環(huán)境、氣候等因素影響，產(chǎn)量與質(zhì)量難以把控。目前，隨著液體深層發(fā)酵技術(shù)被不斷開發(fā)，其技術(shù)具有占地少、原料廣泛、工藝簡單、周期短效率高、副產(chǎn)物少等優(yōu)點；同時利用深層發(fā)酵技術(shù)可以在短時間內(nèi)培養(yǎng)出大量的菌絲體，大大縮短生產(chǎn)原種和栽培種的時間。利用液體深層發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)靈芝，更大程度地發(fā)揮了靈芝的營養(yǎng)價值，因此靈芝液體深層發(fā)酵法已成為靈芝研究的重要內(nèi)容，具有極大的發(fā)展前景。目前，液體深層發(fā)酵技術(shù)的研究主要集中在菌株的選用、培養(yǎng)基的篩選和培養(yǎng)條件的優(yōu)化上,這大大改良了靈芝液體深層發(fā)酵技術(shù)。但仍存在著一些問題：大多數(shù)液體深層發(fā)酵采用合成或半合成培養(yǎng)基，其中添加大量金屬離子如Mg2+、K+等以及其他化學藥品，導致發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液不能被有效利用，造成浪費，不利于功能性飲品的開發(fā)。本實驗通過改良傳統(tǒng)培養(yǎng)基成分，選用均可食用成分設(shè)計液體天然培養(yǎng)基，結(jié)果表明：液體天然培養(yǎng)基配比為蔗糖40g/L，豆粉26g/L，鈣鎂片1.60g/L，氯化鉀0.50g/L，相比于半合成培養(yǎng)基，其靈芝菌絲生長狀況較好，菌絲體生物量可達16.0g/L，提高了11.31%，胞外多糖含量為1.91g/L，提高了24.03%。本研究選擇蔗糖作為碳源、豆粉作為氮源配制發(fā)酵培養(yǎng)基，并添加鈣鎂片和氯化鉀作為靈芝生長所需的金屬離子來源，提高了活性成分的產(chǎn)量。此外，就利用發(fā)酵液的角度而言，發(fā)酵液營養(yǎng)十分豐富,含有各種未被利用的營養(yǎng)活性物質(zhì)，但半合成培養(yǎng)基所含化學試劑成分較多，安全性差，造成發(fā)酵液難以再次利用；而天然培養(yǎng)基中的組分均是可食用的，這就解決了發(fā)酵液的浪費問題。就培養(yǎng)基來源、成本預(yù)算的角度而言，蔗糖、豆粉、鈣鎂片及氯化鉀來源廣泛、價格低廉，適用于食用菌及其代謝產(chǎn)物的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。參考文獻崔曉瑩.靈芝中的三萜類化合物（靈芝酸）的提取條件優(yōu)化及其結(jié)構(gòu)分析[D].東北師范大學,2007.陳玉,劉流,牛艷芬.靈芝化學成分的研究[J].中南民族大學學報(自然科學版),2016,35(02):10-14.[2]李欽艷,陳逸湘,鐘瑩瑩.靈芝主要活性成分及其功能的研究進展(綜述)[J].食藥用菌,2015,23(02):86-91.華蓉,楊珍福,張?zhí)?神奇的藥用真菌——靈芝[J].云南科技管理,2015,28(06):35-37.任奕.靈芝液體深層發(fā)酵的影響因素研究進展[J].農(nóng)業(yè)科技與裝備,2018(06):55-56+61.AmenYhiyaM,ZhuQinchang,TranHai-Bang,AfifiMohamedS,HalimAhmedF,AshourAhmed,MiraAmira,ShimizuKuniyoshi.LucidumolC,anewcytotoxiclanostanoidtriterpenefromGanodermalingzhiagainsthumancancercells.[J].Journalofnaturalmedicines,2016,70(3).Yong-MingYan,Xin-LongWang,Li-LiZhou,Feng-JiaoZhou,RongLi,YuanTian,Zhi-LiZuo,PingFang,ArthurC.K.Chung,Fan-FanHou,Yong-XianCheng.LingzhilactonesfromGanodermalingzhiameliorateadriamycin-inducednephropathyinmice[J].JournalofEthnopharmacology,2015,176.LiangGuo,JianhuiXie,YuanyuanRuan,LeiZhou,HaiyanZhu,XiaojingYun,YanJiang,LongLü,KangliChen,ZhihuiMin,YumeiWen,JianxinGu.CharacterizationandimmunostimulatoryactivityofapolysaccharidefromthesporesofGanodermalucidum[J].InternationalImmunopharmacology,2009,9(10).才曉玲,何偉,楊國琴.靈芝多糖生物活性研究進展[J].食用菌,2018,40(03):1-4.華敏.中國靈芝飲食的歷史變遷與發(fā)展展望[J].南寧職業(yè)技術(shù)學院學報，2009,14(06):6-9.[10]肖智杰,王進軍,連賓.靈芝產(chǎn)品的研究與開發(fā)現(xiàn)狀[J].食品科學,2006(12):837-842.[11]JieLiu,KuniyoshiShimizu,FumikoKonishi,KiyoshiNoda,ShoichiroKumamoto,KenjiKurashiki,RyuichiroKondo.Anti-androgenicactivitiesofthetriterpenoidsfractionofGanodermalucidum[J].FoodChemistry,2006,100(4).[12]張匯,聶少平,艾連中,夏永軍,熊智強,王光強.靈芝多糖的結(jié)構(gòu)及其表征方法研究進展[J/OL].中國食品學報:1-12[2020-01-05]./kcms/detail/11.4528.TS.20191223.1203.006.html.[13]劉良琴.靈芝多糖的提取純化、結(jié)構(gòu)表征及靈芝茶的質(zhì)量控制研究[D].貴州師范大學,2017.[14]張華斌,石松生,陳春美.靈芝多糖抗腫瘤免疫機制的研究進展[J].醫(yī)學綜述,2016,22(02):259-262.[15]王穎,魏佳韻,吳思佳,章春豪,王興亞.靈芝多糖結(jié)構(gòu)特征及藥理作用的研究進展[J].中成藥,2019,41(03):627-635.[16]QiaoDing,ShaopingNie,JielunHu,XinyanZong,QiqiongLi,MingyongXie.InvitroandinvivogastrointestinaldigestionandfermentationofthepolysaccharidefromGanod