微生物的菌種保藏技術(shù)-微生物育種技術(shù)

模塊九菌種的自然選育（二）NaturalBreedingofBacteria(2)菌種的篩選流程初篩文獻(xiàn)調(diào)研設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案較優(yōu)化3-5株單株純種培養(yǎng)復(fù)篩采樣增殖培養(yǎng)平皿分離菌種鑒定一、采樣1、采樣對象以采集土壤為主，也可以是植物、腐敗物品和某些水域等。

一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細(xì)菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤和沼澤地中，酵母和霉菌較多，如一些野果生長區(qū)和果園內(nèi)。2、采土方式選好適當(dāng)?shù)攸c(diǎn)后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標(biāo)記，記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件等，以備查考。為了使土樣中微生物的數(shù)量和類型盡少變化，應(yīng)便及時(shí)分離。二、增殖培養(yǎng)指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，人為地提供一些特定的環(huán)境條件，使特定微生物旺盛生長，使其在數(shù)量上占優(yōu)勢，更利于分離出該特定微生物，稱為增殖培養(yǎng)也叫富集培養(yǎng)。方法：1、控制一定的養(yǎng)分；如：為目的菌株提供唯一氮源或碳源2、控制一定的培養(yǎng)條件。如：控制PH●細(xì)菌和放線菌要求pH7.0～7.5●霉菌和酵母菌要求pH4.5～6三、培養(yǎng)分離盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)，因此還必須分離純化。在這—步，增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進(jìn)一步應(yīng)用，而且控制得細(xì)一點(diǎn)。純種分離的方法有稀釋分離法、劃線分離法。1.稀釋平皿分離法a.傾注平皿分離法b.涂布平皿分離法2.平皿劃線分離法a.分區(qū)劃線分離法b.連續(xù)劃線分離法2、控制培養(yǎng)基的酸堿度如：要分離耐高滲透壓酵母菌，在采用含40%葡萄糖的培養(yǎng)基時(shí)，PH控制2.0~4.0，幾乎分離出的酵母菌全都是耐高滲透壓的。純種分離時(shí)培養(yǎng)條件的控制措施：1、營養(yǎng)成分的控制如：若要分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，可以用淀粉作唯一碳源。3、添加抑制劑如分離放線菌時(shí)，加10%的酚，可抑制細(xì)菌和霉菌4、熱處理根據(jù)芽孢對熱的耐性而淘汰不產(chǎn)芽孢的細(xì)菌和其他微生物。6、通氣條件的控制5、控制培養(yǎng)溫度純種分離時(shí)培養(yǎng)條件的控制措施：四、生產(chǎn)能力的檢測篩選分初篩和復(fù)篩。初篩以迅速篩出大量的達(dá)到初步要求的分離菌落為目的，以量為主。復(fù)篩則是精選，以質(zhì)為主，也就是以精確度為主。因此在具體方法上就有差異.1、初篩平板篩選如，水解酶產(chǎn)生菌的篩選：將酶的作用底物加在培養(yǎng)基中，接種后適溫培養(yǎng)，根據(jù)菌落周圍是否產(chǎn)生水解圈篩選出水解酶產(chǎn)生菌。初篩可以在平皿上直接以菌落的代謝產(chǎn)物與某些染料或基質(zhì)的作用形成的變色圈或透明圈的大小來挑取參加復(fù)篩者，而將大量的菌落淘汰。用剛果紅染色法鑒定篩選降解纖維素的菌株，羧甲基纖維素鈉作培養(yǎng)物2、復(fù)篩采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶進(jìn)行小型發(fā)酵試驗(yàn)，以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。搖床復(fù)篩五、毒性試驗(yàn)自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒的，將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當(dāng)十分當(dāng)心，尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種，更應(yīng)慎重。要根據(jù)國家規(guī)定，進(jìn)行毒性試驗(yàn)。六、菌種鑒定經(jīng)典分類鑒定方法形態(tài)特征、生理生化特征、血清學(xué)試驗(yàn)等?，F(xiàn)代分類鑒定方法遺傳特性、細(xì)胞化學(xué)組分、計(jì)算機(jī)數(shù)值分析。增殖培養(yǎng)的概念采樣的特點(diǎn)純種培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件的控制要點(diǎn)初篩與復(fù)篩的區(qū)別小結(jié)請?jiān)O(shè)計(jì)淀粉酶生產(chǎn)菌的篩選方案。作業(yè)項(xiàng)目九菌種的自然選育（一）NaturalBreedingofBacteria課程目標(biāo)菌種選育種子培養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)產(chǎn)物分離純化成品培養(yǎng)基的優(yōu)化滅菌課程目標(biāo)工業(yè)菌種的育種是運(yùn)用遺傳學(xué)原理和技術(shù)對某個(gè)用于特定生物技術(shù)目的的菌株進(jìn)行的多方位的改造。通過改造，可使現(xiàn)存的優(yōu)良性狀強(qiáng)化，或去除不良性狀或增加新的性狀。菌種選育改良的具體目標(biāo)

?改變生物代謝途徑，提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量?提高目標(biāo)產(chǎn)物的純度，減少副產(chǎn)物微生物與人類關(guān)系經(jīng)驗(yàn)育種定向育種提問：生產(chǎn)菌從來源分為哪幾類？野生型菌種、突變菌、基因工程菌微生物與人類關(guān)系誘變育種自然選育菌種選育基因工程育種雜交育種定向育種經(jīng)驗(yàn)育種微生物與人類關(guān)系一、野生型菌株的來源非人工誘變1.從大自然中分離篩選的菌種2.從自發(fā)突變的菌種中篩選的菌種。菌種的自發(fā)突變的兩種可能：菌種衰退，生產(chǎn)性能下降；菌種代謝更加旺盛，生產(chǎn)性能提高。自然選育：不經(jīng)過人工誘變處理，而直接進(jìn)行篩選的育種方法微生物與人類關(guān)系二、分離的原則原則：依照生產(chǎn)的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準(zhǔn)確地篩選出目的菌種。如，在篩選分泌某種特定成分的微生物時(shí)，根據(jù)所需物質(zhì)的特性和微生物的性質(zhì)制定篩選方案實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進(jìn)行分離純化。微生物與人類關(guān)系三、新菌分離的步驟1.案例篩選能降解石油的菌株時(shí)，方法是在受石油污染的土壤或水域中取樣，配置以石油為唯一碳源的合成培養(yǎng)基，篩選出仍能快速生長的菌株，獲得性能優(yōu)異的單菌落。2.請根據(jù)上述案例歸納菌種篩選的步驟微生物與人類關(guān)系平板分離確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境（有針對性的采集樣品）確定特定的增殖條件確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的定性或半定量檢出法調(diào)查研究及查閱充分的資料設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案采樣增殖培養(yǎng)人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢。微生物與人類關(guān)系較優(yōu)化3-5株原種斜面篩選