宮腔內(nèi)人工授精過程中精子的臨床妊娠率

宮腔內(nèi)人工授精過程中精子的臨床妊娠率

男性不育是全世界范圍內(nèi)的一個(gè)重要問題。據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查,15.0%的育齡夫婦存在不育問題,其中有50%由男性不育引起。在現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)中,人工授精技術(shù)日漸成熟,且應(yīng)用非常廣泛,宮腔內(nèi)人工授精(intrauterineinsemination,IUI)是治療不孕癥較早使用的手段之一,至今已得到廣泛開展,但由于IUI的妊娠率較低,本文回顧性分析了我院2009年1月1日~8月31日330周期IUI的結(jié)果,比較了處理后A、B級(jí)精子總數(shù)、精子正常形態(tài)率與IUI臨床妊娠率的關(guān)系。報(bào)告如下:1材料和方法1.1妊娠合并妊娠合并妊娠合并心臟病放置藥物的篩選回顧中信湘雅生殖與遺傳?？漆t(yī)院2009年1月1日~8月31日330周期IUI的資料,妊娠周期均使用促排卵藥物,進(jìn)行嚴(yán)格的篩選,選擇女方年齡<35歲、各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)正常、輸卵管至少有一條通暢的不孕夫婦。1.2方法1.2.1精的采集和檢測(cè)受檢者禁欲3~7d,在本中心取精室通過手淫方法采集精液后置于干凈的一次性取精杯中,然后立即在37℃恒溫箱里靜置,待其完全液化后進(jìn)行檢測(cè)。1.2.2雙向法液-液(1)單層法(精液A+B<10×106):取2mL70%SpermGrad沿管壁緩緩加入一支15mL離心管底部;將混有2.5mLF-10的已液化的精液沿管壁緩慢加入液體表面,注意應(yīng)保持其與70%SpermGrad液之間的界面清晰;室溫下1200r/min離心20min;棄上清液,留試管底部約0.3mL液體,將其轉(zhuǎn)移至裝有4.5mLF-10和0.5mL血清的離心管內(nèi),充分混勻,再以1200r/min離心10min;棄上清液,留取試管底部0.5mL液體,充分混勻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)取其中10μL鏡檢。(2)雙層法(精液A+B≥10×106):取1.5mL90%SpermGrad液加入到一支15mL離心管底部,再沿管壁緩慢加入1.5mL45%SpermGrad液,注意兩液面之間應(yīng)保持清晰的界面;將混有2.5mLF-10的已液化的精液緩慢加入已配制的精子分離層中,注意保持精液與分離層的界面清晰;室溫下,以1200r/min離心20min;棄上清液,留試管底部約0.3mL液體,將其轉(zhuǎn)移至裝有4.5mLF-10和0.5mL血清的離心管內(nèi),充分混勻,再以1200r/min離心10min;棄上清液,留取試管底部0.5mL液體,充分混勻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)取其中10μL鏡檢。1.2.3采用改進(jìn)的巴氏染色方法分析了精子的形狀第四版《精氣質(zhì)量分析》1.2.4保乳手術(shù)后新生兒和陰道b超的檢測(cè)(1)IUI術(shù)前檢查:IUI患者均來自我院門診,接受IUI的婦女術(shù)前預(yù)先做婦科檢查、子宮內(nèi)膜診斷性刮宮、雙側(cè)輸卵管通水試驗(yàn)、兩個(gè)月經(jīng)周期的基礎(chǔ)體溫測(cè)定和宮頸黏液評(píng)分。如有疾病者應(yīng)先做相應(yīng)治療。(2)排卵監(jiān)測(cè):28d月經(jīng)周期者,于周期10~12d開始來院進(jìn)行排卵監(jiān)測(cè);測(cè)試基礎(chǔ)體溫并記錄;根據(jù)宮頸外口開放程度、黏液拉絲度、羊齒狀結(jié)晶、黏液量等生物體征評(píng)估排卵期;采用陰道B超,監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育;血清E2及尿LH峰測(cè)定。(3)IUI操作:實(shí)施IUI的婦女在排卵前后進(jìn)行授精,授精后均臥床0.5h。1.3統(tǒng)計(jì)處理原始數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組率的比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性。2uiiii法測(cè)定患者骨料階段10規(guī)治療周期中排卵前后兩次授精A、B級(jí)精子總數(shù)均≥(20×106)、(10×106)~(20×106)和(5×106)~(10×106)、<(5×106)相比,差異有顯著性(P<0.05),按照衛(wèi)生部176號(hào)文件“衛(wèi)生部關(guān)于修訂人類輔助生殖技術(shù)與人類精子庫(kù)相關(guān)技術(shù)規(guī)范、基本標(biāo)準(zhǔn)和倫理”,IUI應(yīng)達(dá)到15%的臨床妊娠率,以A、B級(jí)精子總數(shù)(10×106)對(duì)表二分組。2.1不同妊娠率患者臨床妊娠情況對(duì)比治療周期中排卵前后兩次授精A、B級(jí)精子總數(shù)均≥(10×106)和均<(10×106)相比,其臨床妊娠率分別為21.6%和9.0%,差異有顯著性(P<0.05),見表1;若排卵前授精≥10×106,排卵后<10×106,其臨床妊娠率為15.1%,與上述兩組相比差異亦有顯著性的(P<0.05),見表1。2.2子宮內(nèi)人工繁殖的影響精子正常形態(tài)率<6%與精子正常形態(tài)率6%~10%、≥10%相比,其臨床妊娠率差異有顯著性(P<0.05),見表2。3妊娠率與精子的關(guān)系IUI是將精液經(jīng)體外處理后獲得一定數(shù)目的高活動(dòng)力的精子,再用非性交的方式將這些精子經(jīng)導(dǎo)管注入排卵期的女方子宮腔內(nèi),讓精子和卵子自然結(jié)合以獲得妊娠的一種輔助生殖技術(shù),符合正常的生殖生理過程,具有經(jīng)濟(jì)、創(chuàng)傷小、操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。IUI的適應(yīng)證有:(1)男性因少精、弱精、精液液化異常、性功能障礙、生殖器畸形等所致的不育;(2)女性因?qū)m頸黏液分泌異常、生殖道畸形及心理因素導(dǎo)致性交不能等不孕;(3)免疫性不育;(4)原因不明的不育。宮腔內(nèi)人工授精有利于精子獲能,并且避免了不良的宮頸因素對(duì)精子游動(dòng)的影響,縮短了精子游動(dòng)的距離,從而增加了受孕的機(jī)會(huì)。對(duì)不育癥(少精、弱精)患者來說,從精液中回收一定數(shù)量活動(dòng)力強(qiáng)的精子是IUI獲得妊娠的重要環(huán)節(jié)。通過對(duì)精液處理去除精漿中不利于授精的因素,減少或去除精漿內(nèi)的前列腺素、免疫活性細(xì)胞、抗精子抗體、細(xì)菌與碎片,減少精液的黏稠性,促進(jìn)精子獲能,改善精子授精能力,富集較高活力的精子達(dá)到符合要求的精子密度,以高于自然受精條件下精子的密度使精子和卵子在輸卵管中得以直接相遇,增加受孕率。因此,經(jīng)體外處理的精液的質(zhì)量與妊娠率有密切關(guān)系。影響IUI成功的因素很多,男性精液參數(shù)是重要因素,一般認(rèn)為,要想達(dá)到預(yù)期的IUI妊娠率,精液處理后活動(dòng)精子總數(shù)(posttotalmotilesperm,PTMS)必須達(dá)到一定的數(shù)量,但到底數(shù)值為多少,各文獻(xiàn)報(bào)道不一致,目前多數(shù)文獻(xiàn)認(rèn)為PTMS>10×106/mL時(shí),可以獲得較高的IUI臨床妊娠率?！度祟愝o助生殖技術(shù)規(guī)范》規(guī)定,人工授精的注入精子數(shù)應(yīng)大于1000萬。為了探討在IUI過程中,處理后A、B級(jí)精子總數(shù)、精子正常形態(tài)率與IUI臨床妊娠率的關(guān)系,便于將來更好向病人提供有益的咨詢和作出合理的選擇,本研究回顧了我院生殖中心2009年1月1日~8月31日330周期IUI的資料,比較了處理后A、B級(jí)精子總數(shù)、精子正常形態(tài)率對(duì)IUI臨床妊娠率的影響。將治療的330周期分成4組:PTMS<5×106/mL,5×106/mL≤PTMS<10×106/mL,10×106/mL≤PTMS<20×106/mL和PTMS≥20×106/mL。各組妊娠率分別是7.1%、11.5%、19.4%和22.2%,前兩組與后兩組間差異具有顯著性(P<0.05),顯然只有當(dāng)PTMS≥10×106/mL時(shí),患者才有可能獲得較為理想的妊娠率。卵子必須與精子適時(shí)結(jié)合才可授精,IUI的時(shí)機(jī)是妊娠率高低的基本條件。一般排卵發(fā)生在注射HCG36h左右,卵子從卵泡排出后只能生存24h,且大多數(shù)排卵時(shí)間并不同步,會(huì)持續(xù)幾個(gè)小時(shí),授精時(shí)間只有16~18h,第1次授精可以提供高活動(dòng)力的精子給最先排出的卵,而第2次授精則可以給隨后排出的卵子增加活動(dòng)精子,從而提高妊娠率。本研究對(duì)兩次授精的研究結(jié)果表明:治療周期中排卵前后兩次授精A、B級(jí)精子總數(shù)均≥(10×106)和均<(10×106)相比,其臨床妊娠率分別為21.6%和9.0%,差異有顯著性(P<0.05);若排卵前授精≥(10×106),排卵后<(10×106),其臨床妊娠率為15.1%,與上述兩組相比差異亦有顯著性(P<0.05)。精液常規(guī)分析(包括精子密度、精子活動(dòng)率、精子活動(dòng)力等)是臨床上評(píng)價(jià)男性生育能力的主要檢查項(xiàng)目,人類精液常規(guī)受各種因素的影響,變化較大。目前尚無一種方法可以確切地評(píng)價(jià)男性生育能力,臨床上往往采用一組精液檢測(cè)結(jié)果綜合分析而作出判斷。精子形態(tài)學(xué)分析是近年來才在我國(guó)逐漸被重視的用于評(píng)價(jià)男性生育力的檢測(cè)指標(biāo)之一,精子形態(tài)的分類最初由MACLEOD等于1951年提出,此后眾多的研究者提出了多種對(duì)精子形態(tài)的分類方法,一直以來,精子形態(tài)在男性不育癥中所起的作用很有爭(zhēng)議,部分學(xué)者認(rèn)為精子形態(tài)對(duì)預(yù)測(cè)IU的妊娠率有意義[7,8,9,10,11,12,13],本研究結(jié)果表明:精子正常形態(tài)率<6%與精子正常形態(tài)率6%~10%、≥10%相比,其IUI臨床妊娠率差異有顯著性(P<0.05)。IUI較為經(jīng)濟(jì)、更符合正常生殖生理,當(dāng)原發(fā)性男性不育病因治療無效時(shí),通常先嘗試IUI治療,但與IVF-ET和ICSI相比,后者的適用范圍更廣,獲得的妊娠率也更高。因此,如能事先對(duì)就診的不孕夫婦進(jìn)行篩查,使通過IUI受孕機(jī)會(huì)較小的病例,直接求助療效更為可靠的其他輔助生殖技術(shù),就可以避免不必要的IUI治療對(duì)患者造成身體、精神和經(jīng)濟(jì)上的損害。雖然本研究調(diào)查的病例數(shù)非常有限。本組也沒有調(diào)研女性因素對(duì)妊娠率的影響,而據(jù)報(bào)道這些參數(shù)均與IUI妊娠率有一定的關(guān)系,這都有待于在將來的工作中做進(jìn)一步研究。筆者認(rèn)為注入活動(dòng)精子數(shù)與IUI臨床妊娠率密切相關(guān),用于宮腔內(nèi)人工授精的精液需要有(10×106)以上的A、B級(jí)精子總數(shù),且排卵前授精和排卵后授精有相似的重要性,根據(jù)我院IUI精液處理的回收率,單層法50%~70%,雙層法15%~40%,上游法10%~30%,精液處理前應(yīng)有相應(yīng)的活動(dòng)精子總數(shù);用于宮腔內(nèi)人工授精的精液精子正常形態(tài)率≥6%可獲得較高的臨床妊娠率。取液化精液0.5mL,加入生理鹽水1.0mL,5000r/min、3min離心兩次去除精漿,用生理鹽水調(diào)整精子密度至(40~60)×106/mL,取20μL于清潔的載玻片上,均勻涂片后待其自然干燥,采用WHO第四版所推薦的改良巴氏染色方法進(jìn)行染色,油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)或以上精子的形態(tài),求出每份精液樣本的正常精子形態(tài)百分率。改良巴氏染色的正常形態(tài)精子標(biāo)準(zhǔn)是只有頭、頸、中段和尾部都正常的精子才認(rèn)為是正常,按此標(biāo)準(zhǔn)即頭部橢圓形,精子頭部長(zhǎng)度為4.0~5.0μm,