乳酸菌的篩選及應(yīng)用課件

乳酸菌的篩選及應(yīng)用9/25/20231鄒遠強

2010年7月12日乳酸菌的分類乳酸菌的篩選乳酸菌的應(yīng)用9/25/20232第一部分、乳酸菌的分類9/25/20233一、乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌；分為18個屬，共有200多種；大部分是人體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其廣泛存在于人體的腸道中。二、乳酸菌的分類。1、乳桿菌屬（Lactobacillus）形態(tài)：細胞呈長或細長桿狀、彎曲形短桿狀,一般成鏈狀排列運動性：通常不運動，有的能夠運動,具有周生鞭毛營養(yǎng)類型：化能異氧型需氧情況：微好氧性9/25/20234形態(tài)：細胞呈球形或卵圓形，成對或成鏈排列運動性：一般不遠動營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：兼性厭氧型2、鏈球菌屬（Streptococcus）9/25/20235形態(tài)：細胞球形或豆狀，成對或成鏈排列運行性：不運動營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：兼性厭氧型3、明串珠菌屬（Leuconostoc）9/25/20236形態(tài)：細胞呈多樣形態(tài)：Y字形、

V字形、彎曲狀、勺形，典形形態(tài)為分叉桿菌運行性：不運動營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：專性厭氧4、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium

）9/25/20237形態(tài)：細胞球形，成對或四聯(lián)狀排列運行性：不運動營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：兼性厭氧5、片球菌屬（Pediococcus）9/25/20238第二部分、乳酸菌的篩選9/25/20239一、乳酸菌的分布乳酸菌絕大多數(shù)都是厭氧菌或兼性厭氧的化能營養(yǎng)菌。生長繁殖于厭氧或微好氧、礦物質(zhì)和有機營養(yǎng)物豐富的環(huán)境中。具體如下：與動物相關(guān)分布：乳汁、消化道、糞便等；與植物相關(guān)分布：花蜜、樹液、植物殘骸、果實損傷部位等；發(fā)酵食品：泡菜、醬油、發(fā)酵肉制品等；乳酸飲料：酸奶等。（一）溶鈣圈法利用一些產(chǎn)酸類細菌在含CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生

CaCO3溶解圈，從而篩選出這些產(chǎn)酸類細菌，可用于乳酸菌的篩選。其中培養(yǎng)基中加入CaCO3的作用是：①鑒別能產(chǎn)生酸的細菌；②中和產(chǎn)生的酸，以維持培養(yǎng)基的PH。9/25/202310二、篩選方法1、乳酸菌篩選培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）9/25/202311配方（1L）:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，K2HPO4

2.0g，檸檬酸三銨2.0g，乙酸鈉5.0g，葡萄糖

20.0g，吐溫80

1.0mL，MgSO4·7H2O

0.5g，MnSO4·4H2O0.25g配制：調(diào)PH至6.2～6.4；稱取20g

CaCO3加入到100mL蒸餾水中，制成CaCO3乳濁液；將MRS培養(yǎng)基和CaCO3乳濁液分開滅菌；倒平板前，待培養(yǎng)基融化冷卻后，平板上加入一定量的CaCO3乳濁液，晾干了以后再接種。樣品預處理→梯度稀釋至10-6→選擇合適的稀釋度涂布→37℃培養(yǎng)48h→挑選產(chǎn)生溶鈣圈的菌落反復在MRS培養(yǎng)基上劃線→挑起單菌落染色，經(jīng)鏡檢確認為純種→挑選革蘭氏陽性單菌落→試管穿刺4℃冰箱保存。9/25/2023122、篩選過程（二）溴甲酚綠指示劑法9/25/2023131、培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基（含溴甲酚綠酒精溶液）2、篩選過程：同上，不同之處是稀釋涂布后長出菌落，挑取使溴甲酚綠變色的菌落。（三）幾種乳酸菌篩選舉例1、嗜熱鏈球菌樣品來源：市售酸奶培養(yǎng)基：

M17改良培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：42℃需氧情況：兼性厭氧篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離9/25/2023142、保加利亞乳桿菌9/25/202315樣品來源：市售酸奶培養(yǎng)基：牛肉浸膏1.5％，酵母浸膏0.5％，葡萄糖

3.0％，檸檬酸三銨0.2％，七水硫酸鎂0.02％，瓊脂1.5％，pH5.1。培養(yǎng)溫度：42℃需氧情況：兼性厭氧篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法樣品來源：嬰兒新鮮糞便培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基、NPNL培養(yǎng)基、TYP培養(yǎng)基、PTYG培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：37℃需氧情況：嚴格厭氧篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法9/25/2023163、雙歧桿菌第三部分、乳酸菌的應(yīng)用9/25/202317一、乳酸菌的生理功能①維持腸道菌群的微生態(tài)平衡；②增強機體免疫功能；③預防和抑制腫瘤發(fā)生；④提高營養(yǎng)利用率、促進營養(yǎng)吸收；⑤控制內(nèi)毒素、降低膽固醇；⑥延緩機體衰老。二、乳酸菌的應(yīng)用1、乳酸菌在食品、飲料中的應(yīng)用（1）酸奶；（2）乳酸飲料；（3）釀造調(diào)味品中的應(yīng)用；（4）功能性食品的開發(fā)；（5）防腐、保鮮；（6）肉制品加工；（7）腌漬物等。9/25/2023182、乳酸菌在醫(yī)藥中的應(yīng)用（1）乳酸菌素；（2）γ-氨基丁酸(GABA)9/25/2023193、開發(fā)可降解的聚乳酸塑料9/25/202320（1）聚乳酸（PLA）簡介9/25/202321聚乳酸是以微生物發(fā)酵產(chǎn)物乳酸為單體用化學合成方法聚合而成的一種高分子材料，它無毒、無刺激性。聚乳酸制品廢棄后在土壤或水中，30天內(nèi)會在

微生物、水、酸和堿的作用下徹底分解成CO2和H2O，不會對環(huán)境產(chǎn)生污染，因而是一種完全可生物降解

的材料。（2）聚乳酸的生產(chǎn)過程；目前聚乳酸的生產(chǎn)和制備主要有：①直接聚合法②間接法；③聚合法。9/25/202322（3）聚乳酸的應(yīng)用9/25/202323①醫(yī)用領(lǐng)域：如生產(chǎn)一次性輸液用具、免拆型手術(shù)縫合線、骨科用固定件及手術(shù)器件、醫(yī)用支架、生物導管等；②包裝材料：目前，各種包裝材料是聚乳酸最大、最有潛力的應(yīng)用市場。適合于加工一次性飯盒以及其他食品、飲料等外包裝材料等；③纖維：聚乳酸纖維是由聚乳酸經(jīng)常規(guī)紡絲工藝制得的生物合成纖維，可制成復絲、單絲、短纖維、針織物、非織造布等，還可用作建筑材料、農(nóng)業(yè)用材等。PLA作為一個新型的醫(yī)用、生物可降解塑料在我國有廣闊的市場發(fā)展前景。生物降解塑料大多數(shù)是天然高分子與常用塑料復合體系，或基于天然高分子(主要是淀粉、纖維素)的改