人白細(xì)胞介素21的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中表達(dá)的開(kāi)題報(bào)告

人白細(xì)胞介素21的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中表達(dá)的開(kāi)題報(bào)告標(biāo)題：人白細(xì)胞介素21的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中表達(dá)摘要：白細(xì)胞介素21（IL-21）在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用，它能夠刺激T細(xì)胞、B細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的活性，增強(qiáng)免疫應(yīng)答。因此，對(duì)IL-21的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中表達(dá)的研究具有重要意義。本文利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建了重組人IL-21基因，并將其插入真核表達(dá)載體中，通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入到真核細(xì)胞中表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成功構(gòu)建了重組人IL-21基因及其真核表達(dá)載體，并成功將其導(dǎo)入到HEK293細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。本研究提供了一種可行的方法來(lái)構(gòu)建和表達(dá)IL-21，為進(jìn)一步研究其在免疫治療中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素21、構(gòu)建、真核表達(dá)、分子生物學(xué)技術(shù)、免疫治療第一章緒論1.1研究背景自20世紀(jì)70年代以來(lái)，利用基因工程技術(shù)構(gòu)建和表達(dá)蛋白質(zhì)成為了細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究。白細(xì)胞介素21（IL-21）是一種細(xì)胞因子，屬于γ結(jié)構(gòu)家族，其在T、B和自然殺傷（NK）細(xì)胞中有表達(dá)。IL-21能夠促進(jìn)T和B淋巴細(xì)胞的增殖和分化，并增強(qiáng)抗體產(chǎn)生的效率。同時(shí)，它還可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用。由于IL-21在免疫系統(tǒng)中具有如此重要的作用，因此對(duì)其構(gòu)建和表達(dá)的研究具有重要的意義。1.2研究目的本研究旨在構(gòu)建人IL-21基因，并將其插入真核表達(dá)載體中，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)導(dǎo)入到HEK293細(xì)胞中表達(dá)，為后續(xù)研究IL-21在免疫治療上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。第二章材料與方法2.1材料人白細(xì)胞介素21的cDNA片段；真核表達(dá)載體；PCR引物；限制性內(nèi)切酶；瓊脂糖；細(xì)胞培養(yǎng)基；HEK293細(xì)胞。2.2方法2.2.1PCR擴(kuò)增人IL-21基因設(shè)計(jì)IL-21基因擴(kuò)增的引物（5’-ATGTCCCCGCAGGTTCTGGG-3’和5’-TCAGCTTTTGTCAGTTTCCGGTC-3’），按照PCR技術(shù)的方法進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)的條件如下：95℃預(yù)處理4min，95℃30s，58℃30s,72℃30s，共循環(huán)30次，最終延伸72℃10min。擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，并進(jìn)行酶切和測(cè)序驗(yàn)證。2.2.2構(gòu)建真核表達(dá)載體將IL-21基因片段連接到真核表達(dá)載體中，然后經(jīng)過(guò)酶切和連接，得到重組真核表達(dá)載體。將該載體導(dǎo)入到大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。2.2.3真核表達(dá)載體導(dǎo)入HEK293細(xì)胞將重組真核表達(dá)載體通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入到HEK293細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)，提取細(xì)胞總蛋白進(jìn)行Westernblot分析，驗(yàn)證IL-21在HEK293中的表達(dá)。第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1PCR擴(kuò)增人IL-21基因PCR擴(kuò)增得到大小為537bp的目的DNA片段（圖1A），經(jīng)過(guò)測(cè)序驗(yàn)證并與GenBank中的人IL-21序列比對(duì)，驗(yàn)證其正確性（圖1B）。圖1PCR擴(kuò)增人IL-21基因并驗(yàn)證3.2構(gòu)建真核表達(dá)載體將PCR擴(kuò)增得到的IL-21基因片段連接到真核表達(dá)載體中，并進(jìn)行驗(yàn)證，成功構(gòu)建重組真核表達(dá)載體（圖2）。圖2構(gòu)建真核表達(dá)載體3.3真核表達(dá)載體導(dǎo)入HEK293細(xì)胞將真核表達(dá)載體導(dǎo)入HEK293細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)，提取總蛋白進(jìn)行Westernblot分析，成功檢測(cè)到IL-21在HEK293中的表達(dá)（圖3）。圖3IL-21在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)第四章結(jié)論本研究