蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)_第1頁
蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)_第2頁
蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)_第3頁
蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)_第4頁
蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)_第5頁
已閱讀5頁,還剩27頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

實驗二、蛋白質(zhì)

等電點測定及沉淀反響1.

一、實驗?zāi)康?、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2、學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法3、加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。4、了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。5、了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。

2.二、實驗原理蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在以下平衡:3.蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿度影響。當(dāng)溶液的PH到達一定數(shù)值時,蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等,在電場中,蛋白質(zhì)既不向陰極移動,也不向陽極移動,此時溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點。不同蛋白質(zhì)各有特異的等電點。在等電點時,蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化,可利用此種性質(zhì)的變化測定各種蛋白質(zhì)的等電點。最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH值。4.本實驗通過觀察不同pH溶液中的溶解度以測定酪蛋白的等電點。用醋酸與醋酸鈉〔醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中〕配制各種不同pH值的緩沖液。向諸緩沖溶液中參加酪蛋白后,沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的pH值即為酪蛋白的等電點。5.在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于外表生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒,在一定的理化因素影響下,蛋白質(zhì)顆??梢蚴ル姾珊兔撍恋?。6.蛋白質(zhì)的沉淀反響可分為兩類。7.可逆的沉淀反響此時蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化,除去引起沉淀的因素后,蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來的溶劑中,并保持其天然性質(zhì)而不變性。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇〔或丙酮〕短時間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白質(zhì)時,常利用此類反響。8.不可逆沉淀反響

此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變,蛋白質(zhì)常變性而沉淀,不再溶于原來溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固,蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機酸的反響都屬于此類。9.蛋白質(zhì)變性后,有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在〔如電荷〕,并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀,而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。10.三、試劑器材1、實驗材料:

雞蛋清牛乳2、儀器設(shè)備:水浴鍋溫度計錐形瓶100mL容量瓶吸管試管及試管架

11.0.4%酪蛋白乙酸鈉溶液取0.4g酪蛋白,加少量水在乳缽中仔細(xì)地研磨,將所得的蛋白質(zhì)懸膠液移入200mL錐形瓶內(nèi),用少量40—50℃的溫水洗滌乳缽,將洗滌液也移入錐形瓶內(nèi)。參加10mL1mol/L醋酸鈉溶液。把錐形瓶放到50℃水浴中,并小心地旋轉(zhuǎn)錐形瓶,直到酪蛋白完全溶解為止。將錐形瓶內(nèi)的溶液全部移到100mL容量瓶內(nèi),加水至刻度,塞緊玻塞,混勻。3、試劑12.1.00mol/L醋酸溶液100mL0.10mol/L醋酸溶液300mL0.01mol/L醋酸溶液50mL蛋白質(zhì)溶液500mL5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液〔新鮮雞蛋清:水=1:9〕13.pH4.7醋酸-醋酸鈉的緩沖溶液;3%硝酸銀溶液;5%三氯乙酸溶液;95%乙醇;飽和硫酸銨溶液;硫酸銨結(jié)晶粉末;0.1M鹽酸溶液;0.1M氫氧化鈉溶液;0.05M碳酸鈉溶液;0.1M醋酸溶液;甲基紅溶液14.四、實驗操作〔一〕酪蛋白等電點的測定〔1〕取同樣規(guī)格的試管4支,按下表順序分別精確地參加各試劑,然后混勻。試管號蒸餾水mL0.01M醋酸mL0.1M醋酸mL1.0M醋酸mL18.40.6-—28.7-0.3—38.0-1.0—47.4--1.615.〔2〕向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL,加一管,搖勻一管。此時1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后,再觀察其混濁度。最混濁〔有顆粒沉淀〕的一管pH即為酪蛋白的等電點。16.〔二〕蛋白質(zhì)沉淀實驗17.1.蛋白質(zhì)的鹽析:無機鹽〔硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等〕的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同,析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出,而清蛋白那么在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀,當(dāng)降低其鹽類濃度時,又能再溶解,故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。18.加5%卵清蛋白溶液5ml于試管中,再加等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置數(shù)分鐘那么析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀,加少量水,觀察是否溶解,為什么?將管中內(nèi)容物過濾,向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止,此時析出的沉淀為清蛋白。取出局部清蛋白,加少量蒸餾水,觀察沉淀的再溶解。19.2.重金屬離子沉淀蛋白質(zhì):重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管,參加蛋白質(zhì)溶液2ml,再加3%硝酸銀溶液1~2滴,振蕩試管,有沉淀產(chǎn)生。放置片刻,傾去上清液,向沉淀中參加少量的水,沉淀是否溶解?為什么?20.3.有機酸沉淀蛋白質(zhì):取1支試管,參加蛋白質(zhì)溶液2ml,再加1ml5%三氯乙酸溶液,振蕩試管,觀察沉淀的生成。放置片刻,傾出上清液,向沉淀中參加少量水,觀察沉淀是否溶解。21.4.有機溶劑沉淀蛋白質(zhì):取1支試管,參加2ml蛋白質(zhì)溶液,再參加2ml95%乙醇?;靹颍^察沉淀的生成。22.5.乙醇引起的變性與沉淀:

取3支試管,編號。依下表順序參加試劑:

試劑

mL

管號

5%卵清蛋白0.1M氫氧化鈉0.1M鹽酸95%乙醇

pH4.7緩沖液

11112111311123.振搖混勻后,觀察各管有何變化。放置片刻,向各管內(nèi)加水8ml,然后在第2、3號管中各加一滴甲基紅,再分別用0.1M醋酸溶液及0.05M碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1M鹽酸溶液數(shù)滴,觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。24.

五、實驗結(jié)果管號pH值混濁度

解釋現(xiàn)象1234〔一〕蛋白質(zhì)等電點測定25.〔二〕蛋白質(zhì)的鹽析26.1.蛋白質(zhì)的鹽析

現(xiàn)象

解釋蛋白質(zhì)溶液中加硫酸銨溶液

加水上清液中加硫酸銨粉末

加水27.2.重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)

現(xiàn)象解釋蛋白質(zhì)溶液中加硝酸銀

沉淀中加水

28.3.有機酸沉淀蛋白質(zhì)

現(xiàn)象解釋蛋白質(zhì)溶液中加三氯乙酸

沉淀中加水

29.4.有機溶劑沉淀蛋白質(zhì)現(xiàn)象解釋

30.5.乙醇引起的變性與沉淀管號

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論