溴敵隆對(duì)小鼠免疫反應(yīng)的初步研究

溴敵隆對(duì)小鼠免疫反應(yīng)的初步研究

rattusnivivet主要生活在山區(qū)和山區(qū)的各種林區(qū)和灌木叢中，也生活在農(nóng)田和雜草的中間。它可以在洞穴、倒木和樹上筑巢，并在中國(guó)北方廣泛分布。此外，社大鼠的習(xí)性非常多樣。主要以谷物、植物種子、水果和草籽為食。它對(duì)中國(guó)的農(nóng)業(yè)和林業(yè)行業(yè)造成了重大影響，并傳播了許多疾病，成為鼠病預(yù)防體系中的主要研究對(duì)象。但是,對(duì)社鼠的研究目前僅限于生理、生態(tài)、染色體核型及體外寄生蟲等方面,對(duì)抗凝血?jiǎng)缡髣┟舾行缘难芯繄?bào)道極為少見。為此,本研究于2009年6—9月進(jìn)行了社鼠對(duì)溴敵隆的敏感性測(cè)定,旨在為將來進(jìn)行抗藥性檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1溴敵隆毒種的制備溴敵隆原粉由農(nóng)業(yè)部藥檢所提供,純度達(dá)99%。毒餌的配制參照濕潤(rùn)法:用精確度0.0001g的天平稱取原藥,先用少量無(wú)水乙醇水浴溶解,待完全溶解后加入適量溫水混合,倒入一定量的誘餌(小麥),并充分混勻,平鋪于盤中,在鼓風(fēng)干燥箱中50℃烘干,即得濃度為0.0005%的溴敵隆毒餌。1.2電子天平法樣品處理試驗(yàn)器材包括:不銹鋼鼠籠(ZH-B3),飲水瓶(250mL),餌料盒(70mm×40mm×30mm),培養(yǎng)皿(Φ90mm),電子天平(精確至0.0001g和0.01g),鑷子,解剖剪等。1.3誘捕生境調(diào)查以隰縣下李鄉(xiāng)為社鼠捕獲區(qū)。根據(jù)以往調(diào)查及主要農(nóng)田害鼠的生態(tài)特性,誘捕生境主要選在果園、荒草坡、退耕還林地、耕地、溝底等。社鼠的捕獲采用籠捕法。社鼠的飼養(yǎng)以小麥、水果為餌料,室內(nèi)單籠飼養(yǎng)觀察1周,選取健康、無(wú)外傷、無(wú)孕的成年鼠供試。1.4單次吃毒種試驗(yàn)采用無(wú)選擇性攝食試驗(yàn)方法,先供給試鼠無(wú)毒餌2d,每天稱耗餌量,并更換新餌,第2天食餌量少于全部試鼠平均攝餌量1/5者被淘汰。隨后,按體質(zhì)量大小(雌雄分開)隨機(jī)分成5組,雌雄各1/2,分別飼喂毒餌1,2,3,4,6d,每天稱耗餌量,并更換新餌,第1天吃毒餌太少(不及試驗(yàn)前1d毒餌消耗量的1/10)者被淘汰。食毒期結(jié)束后,存活鼠移至干凈飼養(yǎng)籠正常飼養(yǎng)觀察,試驗(yàn)總期限為30d。每天觀察,記錄出血癥狀(出血及部位)及死亡日期。死亡鼠,沒有外出血癥狀或內(nèi)出血病變者被淘汰。1.5死亡率的關(guān)系采用Bliss法,先將雌雄鼠分開計(jì)算食毒期與對(duì)應(yīng)死亡率的關(guān)系,然后性別之間對(duì)藥物敏感性進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),如果無(wú)顯著性差異則將數(shù)據(jù)合并,求得回歸方程和LFP50,LFP95,LFP99及其95%置信限。2結(jié)果與分析2.1食毒期對(duì)溴敵隆的敏感性試鼠共53只,其中雌鼠27只,雄鼠26只,測(cè)定結(jié)果列于表1。供毒第2天開始出現(xiàn)死鼠,最后1只死于第15天,死亡高峰為開始攻毒后5~8d。試驗(yàn)最低食毒期為1d,雌鼠死亡率為20%,雄鼠死亡率為0;最高食毒期為6d,雌鼠死亡率為100%,雄鼠死亡率為80%。通過食毒期與其對(duì)應(yīng)死亡率之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知,雌雄鼠對(duì)溴敵隆的敏感性無(wú)顯著差異(Pb>0.05,PLFP50>0.05,表2)。故將雌雄鼠數(shù)據(jù)合并,統(tǒng)計(jì)出敏感基數(shù),得到LFP50,LFP95,LFP99及其95%置信限(表3)。2.2食毒試驗(yàn)效果最敏感的個(gè)體為1d食毒期組的雌鼠,體質(zhì)量41.8g,食毒第2天死亡,致死劑量為0.51mg/kg;而最耐藥的個(gè)體是4d食毒期組的雄鼠,體質(zhì)量91.0g,存活劑量1.84mg/kg,其劑量為最敏感個(gè)體致死劑量的3.6倍。2.3死亡時(shí)間在53只試驗(yàn)鼠中,死亡26只,存活27只,死亡時(shí)間為2~15d,死亡高峰時(shí)間為5~8d,平均死亡時(shí)間為6.85d。2.4出血部位及患兒出血死亡鼠全部解剖觀察出血病變,符合抗凝血?jiǎng)⑹髣┑亩纠碜饔?死亡鼠主要以內(nèi)出血為主,占到總死亡鼠的85%,出血病變部位主要是脾、肝、胃、腎、心臟等,其次可見腸出血及睪丸充血現(xiàn)象,外出血以鼻、口為主,亦有少數(shù)四肢充血情況。個(gè)別存活鼠在觀察期曾出現(xiàn)站立不穩(wěn)、走路搖擺等中毒癥狀,隨后又逐漸恢復(fù)正常。3溴敵隆毒種根據(jù)表3中的LFP50,LFP95,LFP99以及95%置信限區(qū)間,并按WHO新修訂的用LFP99取整天數(shù)作為抗藥性檢驗(yàn)食毒期,故山西隰縣下李鄉(xiāng)的社鼠對(duì)0.0005%溴敵隆毒餌食毒