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目的基因的功能驗證減弱該基因在細胞內的作用基因敲除RNAi增強該基因在細胞中的作用基因的過量表達目的基因的功能驗證基于同源重組的方法目的基因的功能驗證針對單細胞微生物小鼠目的基因的功能驗證正負雙向篩選法正選擇標記抗生素抗性基因負選擇標記致死基因tk將無毒的核酸類似物(GANC)轉變?yōu)槎拘晕镔|目的基因的功能驗證完全基因敲除的弊端基因完全失活,對于看家基因來說,該基因缺失的突變往往具有致死效應,突變體不易存活改進:條件基因敲除,實現(xiàn)基因敲除在空間和時間上的可控性目的基因的功能驗證空間上的可控(組織特異性敲除)loxP位點:一段34堿基的特定DNA序列,具有方向性Cre重組酶:介導loxP位點發(fā)生重組的酶目的基因的功能驗證Cre-LoxP系統(tǒng)的基因敲除目的基因的功能驗證構建條件基因打靶小鼠:將靶基因兩端錨定上同向的LoxP位點構建組織特異性Cre轉基因鼠將上述兩小鼠雜交,得到組織特異性基因敲除小鼠目的基因的功能驗證時間上的可控性用可誘導的啟動子調控Cre重組酶的表達加入誘導物之后,啟動子才具有活性目的基因的功能驗證針對DNA上的靶位點,根據(jù)其兩側序列設計兩個鋅指蛋白分子
目的基因的功能驗證CRISPR-Cas9在CRISPR/Cas系統(tǒng)里,短片段的外源DNA分子轉錄為crRNA,與tracrRNA結合,介導了序列特異性的切割作用,最后在Cas蛋白的作用下使靶標基因發(fā)生突變目的基因的功能驗證反義RNA是指與mRNA互補的RNA分子,可直接與mRNA形成雙鏈RNA。由于核糖體不能翻譯雙鏈RNA,所以反義RNA可抑制該mRNA的翻譯。目的基因的功能驗證如何操作??1.向細胞內轉化雙鏈RNA分子(轉化上的難度,不能穩(wěn)定遺傳)2.向細胞內轉化DNA分子,轉錄后成為雙鏈RNA3.將2個DNA分子(分別編碼靶基因的正義鏈和反義鏈),分別轉入細胞4.較繁瑣,如何只通過轉化1個DNA分子,就能實現(xiàn)RNAi?目的基因的功能驗證基因的過量表達(overexpression)通過強啟動子的驅動,使某一功能基因高于正常生理水平表達,通過檢測基因過表達后對某一性狀和表型造成的影響,來推測基因的功能。單細胞多細胞在特定組織中的定時表達目的基因的功能驗證頭部驅
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