第四節(jié)沙門(mén)氏菌

一大群人與動(dòng)物腸道中的寄生菌菌群菌型甚多，僅少數(shù)對(duì)人致病第三節(jié)沙門(mén)氏菌(Samonella)其中許多為人畜共患病DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美國(guó)獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國(guó)授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門(mén)菌一詞，就是為紀(jì)念他而以他的名字命名的。沙門(mén)菌（Salmonella）

大多數(shù)為人和動(dòng)物腸道正常菌群少數(shù)有致病性傷寒、副傷寒、肖氏、沙氏沙門(mén)菌——腸熱癥鼠傷寒、腸炎、鴨、豬霍亂沙門(mén)菌（動(dòng)物源）

——食物中毒、敗血癥沙門(mén)菌的種類(lèi)沙門(mén)氏菌生物學(xué)特性是一大群寄生于動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原結(jié)構(gòu)相似的革蘭氏陰性桿菌。大小0.6～1.0×2～3um，無(wú)芽胞，一般有鞭毛(雞沙門(mén)菌除外)，無(wú)莢膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧。生物學(xué)性狀-形態(tài)特征生物學(xué)性狀-培養(yǎng)特性最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，最適pH值為6.8～7.8。營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上：菌落大小一般為2～3mm，光滑、濕潤(rùn)、無(wú)色、半透明、邊緣整齊。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生物學(xué)性狀-生化特性分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣－除傷寒沙門(mén)菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣外不分解乳糖－EMB培養(yǎng)基呈無(wú)色半透明菌落多數(shù)產(chǎn)生H2S，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。明膠液化試驗(yàn)明膠是一種動(dòng)物蛋自質(zhì)，高于24℃時(shí)可液化成液體，低于20℃時(shí)凝固成固體。某些細(xì)菌能產(chǎn)生明膠液化酶(一種蛋白酶)，分解明膠后使明膠分子變小，雖低于20℃亦不再凝固。利用此特點(diǎn)，用來(lái)鑒定某些微生物，即能產(chǎn)生明膠液化酶的微生物，能使明膠液化，無(wú)此酶的微生物則不能液化明膠。尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩孛改軌蚴鼓蛩胤纸忉尫懦霭睔夂投趸?，氨溶于水使加有酚紅酸堿指示劑的營(yíng)養(yǎng)瓊脂由中性變成堿性，從而產(chǎn)生顏色變化（由黃色變成深粉紅色）硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)有些細(xì)菌能分解含硫的有機(jī)物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物，用于鑒別腸道細(xì)菌氰化鉀試驗(yàn)氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑，可與呼吸酶作用使酶失去活性，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長(zhǎng)，以此鑒別細(xì)菌。賴(lài)氨酸脫羧試驗(yàn)試驗(yàn)培養(yǎng)基中含有賴(lài)氨酸和葡萄糖，酸堿指示劑為溴甲酚紫（中性和堿性時(shí)紫色，酸性黃色），未用時(shí)為紫色。如果待測(cè)細(xì)菌將賴(lài)氨酸脫羧，則產(chǎn)生胺，為堿性，溴甲酚紫保持紫色，如果不脫羧，腸桿菌科的細(xì)菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸，溴甲酚紫變?yōu)辄S色。

賴(lài)氨酸脫羧試驗(yàn)

ONPG:鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的細(xì)菌，能使其水解，從而釋放黃色的鄰硝基酚ONPG試驗(yàn)左為陽(yáng)性（黃）右為陰性對(duì)照β-D-半乳糖苷酶（ONPG）的測(cè)定沙門(mén)氏菌——致病性潛伏期一般6-72小時(shí)，癥狀為惡心、嘔吐、腹絞痛、腹瀉、發(fā)熱等。病程一般1-2天或更長(zhǎng)。感染劑量為15-20個(gè)菌，死亡率達(dá)1-4%。污染源為人和動(dòng)物糞便目前至少有67種0抗原和2000以上血清型，所致疾病稱(chēng)沙門(mén)菌病。致病性-沙門(mén)菌病(salmonellosis)腸熱癥

-----傷寒病和副傷寒病總稱(chēng)，由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。兩次菌血癥。急性腸炎（食物中毒）——最常見(jiàn)的沙門(mén)桿菌感染，多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。敗血癥——常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌等引起。帶菌者——占患者的1-5%，膽囊可持續(xù)帶菌大于1年，傳染源。TYPHOIDMARY抵抗力耐冷不耐熱,水中存活2~3W冰凍土壤中可越冬糞便種可以存活1~2月膽鹽、煌綠抗力較其他腸道桿菌強(qiáng)-可用選擇培養(yǎng)基（SS）進(jìn)行分離鑒別毒素特征不產(chǎn)外毒素，但菌體裂解時(shí)，可產(chǎn)生毒性很強(qiáng)的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素是類(lèi)脂、糖類(lèi)和蛋白復(fù)合物。此種毒素為致病的主要原因，可引起人體發(fā)冷、發(fā)熱及白細(xì)胞減少等癥。1.O抗原：為L(zhǎng)PS（脂多糖）是分組的依據(jù)，為每個(gè)菌株均有的成分。A~E組對(duì)人致病，刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM抗體

2.H抗原：為蛋白質(zhì)，是分型依據(jù)刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG抗體

3.Vi抗原：是表面抗原，與毒力有關(guān)，有抗吞噬作用，檢測(cè)出低效價(jià)抗體即有診斷意義?？乖Y(jié)構(gòu)分類(lèi)與命名分類(lèi)：依據(jù)生化反應(yīng)和DNA同源性,將沙門(mén)菌分為：2種(species):

腸道沙門(mén)菌邦戈沙門(mén)菌6個(gè)亞種(Subspecies):命名：依據(jù)所致人/動(dòng)物疾病命名如傷寒沙門(mén)菌/鼠傷寒沙門(mén)菌依據(jù)分離地命名如上海沙門(mén)菌--沙門(mén)氏菌傳統(tǒng)檢測(cè)方法1.前增菌-使食物樣品在含有營(yíng)養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門(mén)氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。加工食品均應(yīng)經(jīng)過(guò)前增菌。2.選擇性增菌-此培養(yǎng)基允許沙門(mén)氏菌持續(xù)增殖，同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。未經(jīng)加工的食品直接增菌。3.選擇性平板分離-采用固體選擇性培養(yǎng)基，抑制非沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)，提供肉眼可見(jiàn)的疑似沙門(mén)氏菌純菌落的識(shí)別。4.生物化學(xué)篩選-排除大多數(shù)非沙門(mén)氏菌，也提供了沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。5.血清學(xué)技術(shù)提供了培養(yǎng)物菌種的鑒定。凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃

±1℃一般4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋滅菌生理鹽水25mL檢樣勻液25mL＋MM（或TTB）100mL檢樣勻液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/AH2S－結(jié)果），靛基質(zhì)，尿素，KCN，賴(lài)氨酸沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn)甘露醇山梨醇H2S＋靛＋尿－KCN－賴(lài)＋H2S－靛－尿－KCN－賴(lài)＋/－非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果沙門(mén)氏菌血清學(xué)試驗(yàn)ONPG－沙門(mén)氏菌非沙門(mén)氏菌42℃18h～24h36℃

±1℃18h～24h42℃18h～24h36℃

±1℃18h～24h36℃

±1℃40h～48h36℃

±1℃18h～24h

微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.4-2003BPW:緩沖蛋白胨水MM：氯化鎂孔雀綠增菌液TTB：四硫磺酸鈉煌綠增菌液SC：亞硒酸鹽增菌液SS培養(yǎng)基成分牛肉膏粉5g蛋白胨5g

三號(hào)膽鹽3.5g乳糖

10g

檸檬酸鈉

8.5g

硫代硫酸鈉

8.5g

檸檬酸鐵1g

中性紅

0.025g

煌綠0.00033g硫代硫酸鈉：提供硫，檢測(cè)產(chǎn)生硫化氫的能力，抑制腸道正常菌群，緩和膽鹽對(duì)沙門(mén)菌的傷害作用；細(xì)菌分解乳糖后使硫游離出來(lái)，利用菌落著色。沙門(mén)氏菌在SS瓊脂上典型特征沙門(mén)氏菌在37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)后，無(wú)色透明菌落有黑色中心；志賀氏菌呈無(wú)色透明菌落。沙門(mén)氏菌在膽硫乳瓊脂(DHL瓊脂)上典型特征沙門(mén)氏菌在37℃培養(yǎng)22-24小時(shí)后，無(wú)色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。有些菌株無(wú)色半透明。蛋白胨20g

牛肉膏粉3g

乳糖

10g

蔗糖10g

去氧膽酸鈉1g

硫代硫酸鈉2.3g

檸檬酸鈉1g

檸檬酸鐵銨

1g

中性紅0.03g去氧膽酸鈉和檸檬酸鈉：抑制革蘭氏陽(yáng)性菌及大多數(shù)的大腸菌群和變形桿菌。沙門(mén)氏菌在亞硫酸鉍瓊脂(BS瓊脂)上典型特征沙門(mén)氏菌在37℃培養(yǎng)24-48小時(shí)后，棕褐色或灰色至黑色，有時(shí)有金屬光澤，周?chē)囵B(yǎng)基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰綠色,周?chē)囵B(yǎng)基不變或微變暗。蛋白胨10g

牛肉膏5g

葡萄糖5g

硫酸亞鐵

0.3g

磷酸氫二鈉4g

煌綠0.025g

檸檬酸鉍銨2g

亞硫酸鈉6g沙門(mén)氏菌在（木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽）XLD瓊脂上典型特征沙門(mén)氏菌在35℃培養(yǎng)24-48小時(shí)后，無(wú)色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。志賀氏菌為無(wú)色透明菌落。大腸桿菌為黃色菌落，其外圍有黃色環(huán)。酵母膏粉3g

L-賴(lài)氨酸5g

木糖

3.75

g

乳糖

7.5

g

蔗糖7.5

g

氯化鈉5

g

硫代硫酸鈉6.8

g

去氧膽酸鈉2.5

g

檸檬酸鐵銨0.8

g

苯酚紅0.08

g

沙門(mén)氏菌在?？祟D腸內(nèi)（HE）瓊脂上典型特征在37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)后，沙門(mén)氏菌、亞利桑那菌和變形桿菌為藍(lán)綠色至藍(lán)色、有或無(wú)黑色中心的菌落；大腸桿菌和大腸菌群為粉紅色菌落，有沉淀環(huán)；無(wú)色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。志賀氏菌和普羅菲登斯菌為綠色、濕潤(rùn)而隆起菌落。

蛋白胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水楊素2g膽堿20g氯化鈉5g0.4%溴麝香草酚藍(lán)3031

反應(yīng)序號(hào)A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，按下表判定結(jié)果：反應(yīng)序號(hào)Bl：補(bǔ)做ONPG。若ONPG（＋），為大腸埃希氏菌，若ONPG（－），為沙門(mén)氏菌。同時(shí)，沙門(mén)氏菌應(yīng)為賴(lài)氨酸（＋），但甲型副傷寒沙門(mén)氏菌為賴(lài)氨酸（－）。32以抗體為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法利用抗原-抗體反應(yīng)的顯著特異性，來(lái)進(jìn)行細(xì)菌的鑒別和血清型定型。細(xì)菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在，是建立食品快速檢測(cè)方法的基礎(chǔ)。酶標(biāo)抗體（ELISA），熒光抗體染色（免疫熒光法），同位素標(biāo)記抗體（放射免疫試驗(yàn)）全自動(dòng)免疫分析儀已建立的免疫學(xué)檢測(cè)方法有：以核酸為基礎(chǔ)的方法以細(xì)胞核酸DNA和RNA作為