人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒說明書

第第頁人抗可提取核抗原抗體（ENA—Ab）ELISA試劑盒說明書人抗可提取核抗原抗體（ENAAb）ELISA試劑盒試驗原理：本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中指標的濃度呈比例關(guān)系。自備料子：1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。人抗可提取核抗原抗體（ENAAb）ELISA試劑盒樣品收集、處理及保管方法：1、血清操作過程中避開任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞快速小心地分別。2、血漿EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。4、組織勻漿將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保管假如樣品不立刻使用，應(yīng)將其分成小部分70℃保管，避開反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作注意事項：試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不行保管。試驗中不用的板條應(yīng)立刻放回包裝袋中，密封保管，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取停止液和底物A、B液時，避開使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。底物A應(yīng)揮發(fā)，避開長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避開長時間暴露于光下。避開用手接觸，有毒。試驗完成后應(yīng)立刻讀取OD值。加入試劑的次序應(yīng)全都，以保證全部反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。依照說明書中標明的時間、加液的量及次序進行溫育操作。安全性：1．避開直接接觸停止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．試驗中不要吃喝、吸煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑盒性能：1.靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990.2.特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。操作步驟：1．使用前，將全部試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．依據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品依據(jù)本身的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立刻加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。假如用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。5．每孔加入100ul的親和鏈酶素HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。假如用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避開光照。8．取出酶標板，快速加入50ul停止液，加入停止液后應(yīng)立刻測定結(jié)果。9．在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。結(jié)果判斷與分析：1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的指標標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的含量可依據(jù)其OD值由標