微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)知識(shí)脈絡(luò)大全

第一章衛(wèi)生檢驗(yàn)綜合知識(shí)“中華人民共和國(guó)計(jì)量法〞是1985.9.6由中華人民共和國(guó)第二十八號(hào)主席令公布的，自1986.7.1起施行。計(jì)量法中有關(guān)的條文有：第五條：國(guó)務(wù)院計(jì)量行政部門(mén)負(fù)責(zé)建立各種計(jì)量基準(zhǔn)器具，作為統(tǒng)一全國(guó)量值的最高依據(jù)。第八條：企業(yè)、事業(yè)單位根據(jù)需要，可以建立本單位使用的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具，其各項(xiàng)最高計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具經(jīng)有關(guān)人民政府計(jì)量行政部門(mén)主持考核合格后使用。第二十二條：為社會(huì)提供公證數(shù)據(jù)的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，必須經(jīng)省級(jí)以上人民政府計(jì)量行政部門(mén)對(duì)其計(jì)量檢定、測(cè)試的能力和可靠性考核合格。計(jì)量法實(shí)施細(xì)那么：1987年國(guó)家計(jì)量局發(fā)布的“中華人民共和國(guó)計(jì)量法實(shí)施細(xì)那么〞其中：第三十二條：為社會(huì)提供公證數(shù)據(jù)的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，必須經(jīng)省級(jí)以上人民政府計(jì)量行政部門(mén)計(jì)量認(rèn)證。計(jì)量認(rèn)證：本標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局于1990年7月20日批準(zhǔn)，并自1990年11月1日起施行。衛(wèi)生部于1981年發(fā)布的《衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理方法》第一條規(guī)定：衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是國(guó)家的一項(xiàng)重要的技術(shù)法規(guī)，是進(jìn)行預(yù)防性和經(jīng)常性衛(wèi)生監(jiān)督的重要依據(jù)。衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)可分為：強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)和推薦性標(biāo)準(zhǔn)；又分為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以“GB〞表示，國(guó)家推薦性標(biāo)準(zhǔn)以“GB/T〞表示；衛(wèi)生部發(fā)布的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以“WS〞表示，推薦性標(biāo)準(zhǔn)表示為“WS/T〞。衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定狀況：建國(guó)后最早頒發(fā)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是在1953年；正式列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)的第一個(gè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是1956年頒發(fā)的“工業(yè)企業(yè)設(shè)計(jì)暫行〞衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)；到1996年底，我國(guó)已有衛(wèi)生國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)1200項(xiàng)，到2004年止，與勞動(dòng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)配套的標(biāo)準(zhǔn)方法已有249多個(gè)；與環(huán)境衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)配套的居民區(qū)大氣標(biāo)準(zhǔn)方法已有20多個(gè)；與食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)配套的標(biāo)準(zhǔn)方法，其中理化檢驗(yàn)方法已有70多個(gè)，微生物學(xué)檢驗(yàn)方法已有30多項(xiàng)。我國(guó)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)由“全國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會(huì)〞及其專業(yè)委員會(huì)負(fù)責(zé)制定和評(píng)審，又國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局和衛(wèi)生部審批。中華人民共和國(guó)傳染病防治法：1989年2月21日第七屆全國(guó)人民代表大會(huì)常務(wù)委員會(huì)第六次會(huì)議通過(guò)。2004年8月28日第十屆全國(guó)人民代表大會(huì)常務(wù)委員會(huì)第十一次會(huì)議修訂。中華人民共和國(guó)傳染病防治法：共79條本法自2004年12月1日起施行。傳染性非典性肺炎：〔簡(jiǎn)稱為非典性肺炎，AP〕是指2002年11月起，我國(guó)局部地區(qū)發(fā)生的、主要以近距離空氣非沫和密切接觸傳播為主的呼吸道傳染病，臨床主要表現(xiàn)為肺炎，在家庭和醫(yī)院有顯著的聚集現(xiàn)象。世界衛(wèi)生組織于2003年4月16日，在13個(gè)WHO網(wǎng)絡(luò)會(huì)議上宣布一種新的冠狀病毒是DNASARS的病毒，從而為SARS防止提供了依據(jù)。醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)〔一〕、病毒的概念：病毒是一類體積微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、具有嚴(yán)格的寄生于活細(xì)胞的微小生物，它們具有以下幾種根本特征：1、病毒的根本結(jié)構(gòu)是由核酸〔基因組〕與蛋白質(zhì)組成，由DNA或RNA組成核心，外有一蛋白外殼〔核殼〕，有些病毒在核殼外面另有一層脂蛋白組成的包膜包圍著。2、病毒只在活細(xì)胞中增殖，因?yàn)椴《救狈ν暾?xì)胞器等必要裝置，所以必須依賴宿主細(xì)胞提供高分子合成裝置和能量。3、病毒非常微小，無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，絕大多數(shù)不能用光學(xué)顯微鏡檢查，而必須用電子顯微鏡才能察見(jiàn)。第一節(jié)核酸根本知識(shí)：一、核酸化學(xué)：DNA是脫氧核糖核酸的英文縮寫(xiě)。RNA與DNA差異在核糖2，位帶有一個(gè)羥基。DNA①DNA起儲(chǔ)存遺傳信息作用，并以核苷酸排列順序形式儲(chǔ)存遺傳信息。②由4種核苷酸組成DNA分子，由堿基互補(bǔ)維持DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。③在動(dòng)植物、細(xì)菌、真菌中都含有DNA，但在病毒中〔非細(xì)胞型微生物〕不一定含DNA。④DNA為長(zhǎng)絲狀分子互相糾纏〔jiuchan〕，其溶液十分粘稠。⑤它對(duì)紫外線有最強(qiáng)的吸收，通常用260nm波長(zhǎng)測(cè)DNA溶液濃度，它在近中性環(huán)境中帶負(fù)電核，DNA變性后OD值會(huì)升高。⑥因DNA不溶于乙醇，常用二倍量沉淀DNA⑦在變性溫度時(shí)，它的粘性突然降低。⑧淬火是為了保持DNA單鏈狀態(tài)。DNA變性后溶液慢慢冷卻，DNA會(huì)自動(dòng)恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)。說(shuō)法錯(cuò)誤的：〔1〕DNA和RNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)堿基G與C通過(guò)2對(duì)氫鍵配對(duì)構(gòu)成DNA分子說(shuō)法錯(cuò)誤的。〔2〕與DNA分子相比，RNA分子難水解的看法也不對(duì)?！?〕許多質(zhì)粒可在宿主之間進(jìn)行轉(zhuǎn)移的說(shuō)法是不對(duì)的。形狀：〔1〕TRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)呈三草形?！?〕在細(xì)胞內(nèi)RNA分子中rRNA占比例最大?！?〕DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)中呈左手雙螺旋的是Z構(gòu)象。DNA結(jié)構(gòu)、性質(zhì)：在真菌中網(wǎng)崎片段一般為100～200核苷酸。噬菌體核酸最常見(jiàn)的是雙鏈線狀DNA。反式作用因子具有的DNA識(shí)別或DNA結(jié)合域，主要有螺旋/轉(zhuǎn)折/螺旋〔T/H/T〕,鋅指結(jié)構(gòu)，堿性-亮氨酸拉鏈〔bZIP〕，堿性-螺旋/環(huán)/螺旋〔bH/L/H〕。真核生物中的瑞粒酶是由RNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成的。一般真核生物染色體上有5種主要的組蛋白，其中親和力最強(qiáng)的兩種是H3H4。二、DNA的復(fù)制和修復(fù)：〔1〕細(xì)胞每分裂一次，染色體DNA就合成一次，新DNA是按原DNA分子合成?！?〕DNA分子拆〔ca〕開(kāi)成兩條鏈，依每一條單鏈合成一條新單鏈，成為半保存復(fù)制。〔3〕在合成DNA時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA的必要條件?！?〕DNA多聚酶只能結(jié)合在一長(zhǎng)段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結(jié)構(gòu)上，才能順利開(kāi)始DNA合成。〔5〕在DNA合成中單核苷酸分子必須順序以共價(jià)鏈連接在已形成核酸鏈3，末端的羥基上?！?〕在合成發(fā)生錯(cuò)誤時(shí)，DNA多聚酶會(huì)切除錯(cuò)誤核苷酸，在那個(gè)位置上重新加一個(gè)正確核苷酸。〔7〕在人工合成DNA時(shí)，只加一種或兩種三磷酸單核苷酸，那么合成就會(huì)停止在缺失的核苷酸位置上。在大腸菌DNA損傷修復(fù)時(shí)填補(bǔ)缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ。DNA三個(gè)終止密碼子分別是UAA、UAG、UGA。在大腸菌中DNA復(fù)制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。該酶的核心聚合酶中，具有3，-5，外切酶活性的亞基是ε亞基。在體內(nèi)染色DNA復(fù)制時(shí)必須有RNA引物。在哺〔bu〕乳動(dòng)物細(xì)胞中負(fù)責(zé)合成線粒體DNA是DNA聚合酶r。RNA酶Tl可特異地作用于嘌呤核苷酸3，端磷酸并切割與相鄰核苷酸相連的磷酸二酯鍵。體內(nèi)DNA復(fù)制與體外PCR不同的是引發(fā)酶參與。與體內(nèi)DNA復(fù)制不相關(guān)酶是反轉(zhuǎn)錄酶。在細(xì)胞內(nèi)DNA合成正常進(jìn)行是RecA蛋白，而RecA蛋白不具有蛋白酶活性。在大腸菌DNA聚合酶Ⅰklenow片段沒(méi)有5，-3，外切酶活性。DNA修復(fù)過(guò)程中尿嘧啶糖基酶系統(tǒng)不包括Sl核酸酶。在逆轉(zhuǎn)錄酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具備的。在逆轉(zhuǎn)錄酶的最終產(chǎn)物雙鏈DNA的長(zhǎng)度較正鏈RNA稍長(zhǎng)。三、轉(zhuǎn)錄：在生物體內(nèi)，RNA合成過(guò)程稱為轉(zhuǎn)錄。它〔RNA〕是按照儲(chǔ)存在DNA上遺傳信息合成。合成RNA時(shí)DNA雙鏈也要解旋，解旋部位稱啟動(dòng)子。去掉RNA分子5，末端的磷酸，不起合成酶功能的作用。在刺激點(diǎn)突變，改變某些基因功能與DNA向RNA轉(zhuǎn)移無(wú)直接關(guān)系〔？〕大腸菌的RNA聚合酶由5個(gè)亞基，其σ亞基有啟動(dòng)子作用。利福平作用該酶〔聚合酶〕β亞基上。RNA聚合酶Ⅰ主要是轉(zhuǎn)錄rRNA〔構(gòu)成核糖體骨架的是rRNA〕。Prt-mRNA內(nèi)含子的5，-末端一般是GU。RNA聚合酶Ⅱ主要是轉(zhuǎn)錄hnRNA。在真核基因啟動(dòng)子近側(cè)序列元件中，對(duì)轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)定位起關(guān)鍵作用的是TATA盒。放線菌素D能抑制DNA轉(zhuǎn)錄。編碼核糖體RNA的基因是一種中度重復(fù)序列的DNA序列。四、翻譯：在合成各種不同RNA中：tRNA具有搬運(yùn)氨基酸功能。構(gòu)成核糖體骨架的是rRNA。mRNA直接決定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。合成蛋白質(zhì)需4種核苷酸，排列組成遺傳信息，然后轉(zhuǎn)換成20種氨基酸，組成遺傳信息稱為翻譯。3個(gè)核苷酸排列順序代表一種氨基酸密碼，表示蛋白質(zhì)合成開(kāi)始的密碼有一種。在細(xì)菌里，依靠rRNA和mRNA之間一段互補(bǔ)序列能發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)合成開(kāi)始的位置。在核糖體上，有兩個(gè)位置上暴露出mRNA〔直接決定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)〕分子相鄰的兩個(gè)密碼子，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成進(jìn)行到?jīng)]有攜帶任何一種氨基酸t(yī)RNA〔具有搬運(yùn)功能〕與其對(duì)應(yīng)，這說(shuō)明合成蛋白質(zhì)結(jié)束，并已開(kāi)始同一種蛋白質(zhì)分子的合成。合成蛋白質(zhì)后，決定其空間結(jié)構(gòu)的是蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序確定后，就能自動(dòng)折疊卷曲成一定的空間形狀。在原核生物核糖體是由16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA組成，在真核生物核糖體的五種主要的組蛋白中，H1在進(jìn)化中最不保守。五、基因表達(dá)調(diào)空：〔1〕氯霉素可與核糖體50S亞基結(jié)合并抑制蛋白質(zhì)合成。〔2〕在基因5，上游基因內(nèi)或其3，下游序列中存在，能提高同一條DNA鏈上靶基因轉(zhuǎn)錄速率的遺傳控制元件是增強(qiáng)子?！?〕乳糖操縱〔zong〕子中結(jié)構(gòu)基因是LacA、LacY、LacZ。六、遺傳重組：轉(zhuǎn)座子的功能有〔1〕促進(jìn)染色體重排，〔2〕促進(jìn)基因重復(fù)，〔3〕促進(jìn)基因擴(kuò)增，〔4〕造成缺失突變。在大腸遺傳重組中，同源重組需RecA蛋白質(zhì)。第二節(jié)實(shí)驗(yàn)技術(shù)：一、核酸提取、純化、濃縮eq\o\ac(○,1)用煮沸法從表達(dá)內(nèi)切酶A的大腸菌小量制備質(zhì)粒時(shí)不能省略酚-氯仿抽提。eq\o\ac(○,2)用煮沸法制備質(zhì)粒所用溶菌酶液是用TrisCL配制的。eq\o\ac(○,3)用乙醇沉淀溶于SDS中RNA時(shí)，要防止用乙酸鉀。eq\o\ac(○,4)小量制備DNA時(shí)不被限制酶切開(kāi)，應(yīng)用酚-氯仿抽提。eq\o\ac(○,5)用異丙醇沉淀核酸與用乙醇相比，最明顯優(yōu)點(diǎn)是可減少溶液體積。1、質(zhì)粒DNA提?。涸谟脡A裂解法少量提取質(zhì)粒DNA時(shí)，在緩沖液〔Ⅰ液〕中不含SDS。多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是環(huán)狀鏈DNA。質(zhì)粒DNA純化方法有：eq\o\ac(○,1)離子交換分析；eq\o\ac(○,2)聚乙二醇分級(jí)沉淀；eq\o\ac(○,3)二凝膠過(guò)濾層析；eq\o\ac(○,4)氯化銫〔se〕-溴化乙錠梯度平衡離心。質(zhì)粒具備有復(fù)制起點(diǎn)、抗生素抗性基因、有多種限制酶的單一切點(diǎn)、有較高的拷貝數(shù)。2、NA凝膠電泳：要使大于2Kb的DNA片段在凝膠電泳中分辨率達(dá)最大，其電壓不應(yīng)超過(guò)5V/cm。在電泳中不同構(gòu)象DNA泳動(dòng)率通常是：超螺旋＞線性＞切口環(huán)狀。二、PCR擴(kuò)增技術(shù)：PCR反響中變性、延伸溫度通常是：95℃、72℃。引物的Tm值估算每個(gè)A或T加在PCR反響中每一種dNTP的濃度通常是200umol/L，在PCR反響中經(jīng)n次循環(huán)后理論上，DNA鏈的擴(kuò)增數(shù)目是2n倍。在PCR反響中引物只與靶序列的相應(yīng)局部結(jié)合的說(shuō)法是錯(cuò)誤的。再此〔PCR擴(kuò)增技術(shù)〕反響中礦物油不是必需的，用于擴(kuò)增未知序列的PCR是反向PCR。不對(duì)稱PCR法專用于制備單鏈DNA的擴(kuò)增。在PCR反響DNA堿基錯(cuò)配率較高，原因是TaqDNA聚合酶缺乏3，-5，外切酶活性。PCR反響中的引物是DNA。反響體系中Taq酶過(guò)多及引物過(guò)多都可引起非靶序列擴(kuò)增。三、寡核苷酸探針合成、放射標(biāo)記、雜交標(biāo)記合成寡核苷酸時(shí)dNTP的濃度不應(yīng)低于1umol/L。探針是一段帶標(biāo)記的單鏈DNA，雙鏈DNA，cDNA，單鏈RNA。雜交液的成分與雜交溫度間的關(guān)系正確的選項(xiàng)是甲酰胺42℃，水68標(biāo)記探針的最有效簡(jiǎn)單方法是體外轉(zhuǎn)錄法。標(biāo)記雙鏈DNA的3，端時(shí)，常用T4噬菌體DNA聚合酶，而不是大腸菌DNA聚合酶Ⅰklenow片段，主要是因?yàn)?，-5，外切酶活性高。Westernblotting所用探針一般是Ab。Southenblotting一般是用于DNA分子的雜交技術(shù)。在核酸分子雜交技術(shù)根底之上又開(kāi)展了一系列檢測(cè)DNA和RNA的技術(shù)，如Southenblotting、Westernblotting、Dotblotting和菌落雜交。大腸菌的DNA聚合酶Ⅰ用在切口平移法標(biāo)記DNA。在20℃～25℃將外源性質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌中稱為轉(zhuǎn)化。外源性重組質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)菌混在一起，一般在42℃作短暫的熱刺激。c四、基因克隆載體：柯(ke)斯質(zhì)粒載體具有噬菌體特性，能通過(guò)溶菌周期，形成子代噬菌體顆粒的說(shuō)法是不對(duì)的。五、DNA序列測(cè)定：與Sanger雙脫氧鏈終止DNA測(cè)序法相比，Maxam-Gilbert法所測(cè)序列為原DNA分子，這是其特點(diǎn)。六、克隆子DNA定點(diǎn)誘變：Mu噬菌體DNA轉(zhuǎn)座成分不含末端反向重復(fù)序列。改變蛋白質(zhì)密碼序列的個(gè)別密碼子最好采用寡核苷酸介導(dǎo)誘變。七、研究DNA與蛋白質(zhì)的方法：〔1〕凝膠阻滯試驗(yàn)〔2〕DhAsel足跡試驗(yàn)、〔3〕甲基化干擾試驗(yàn)、〔4〕體內(nèi)足跡試驗(yàn)都是研究DNA與蛋白質(zhì)作用的方法。第四章免疫血清學(xué)知識(shí)第一節(jié)：血清學(xué)：一、根底知識(shí)：1、Ag-Ab反響結(jié)合力：有4種力致使Ag-Ab結(jié)合，其中一以靜電引力為最重要。2、Ag-Ab反響特點(diǎn)〔1〕特異性、〔2〕階段性〔兩個(gè)階段〕、〔3〕可逆性、〔5〕比例性〔Ag與Ab結(jié)合比例以3：2為最正確〕〔Ag=3，Ab=2〕。3、影響Ag-Ab反響的因素：〔1〕溫度〔多數(shù)情況下反響適宜溫度為37℃〕、〔2〕PH值〔一般反響適宜〔3〕電解質(zhì)〔多用0.85%鹽水〕。當(dāng)溫度升高反響加快，電解質(zhì)濃度加大時(shí)反響敏感性升高，無(wú)電解質(zhì)時(shí)Ag與Ab根本上不反響。參加反響的Ag也有影響，Ag濃度超出適宜量使反響的敏感性下降，過(guò)量的Ab會(huì)使反響出現(xiàn)前滯現(xiàn)象?！?〕血清交叉反響：出現(xiàn)血清交叉反響是說(shuō)明有共同抗原存在。二、血清檢驗(yàn)技術(shù)：1、血清凝集反響：采用顆粒狀A(yù)g〔死菌或活菌，多用死菌〕進(jìn)行的血清反響。①玻片凝集是其中一種，有許多優(yōu)點(diǎn)，最重要的優(yōu)點(diǎn)是報(bào)告結(jié)果快，多用于快速診斷。②試管凝集是最多用的一種方法，從溫箱中放24小時(shí)后取出反響管在室溫放2個(gè)少時(shí)再判定為宜，判定凝集滴度以凝集程度為〔++〕而定。③協(xié)同凝集用SPA〔葡萄球菌A蛋白〕與IgG的Fc結(jié)合后進(jìn)行的凝集反響。SPA與IgG結(jié)合具有種屬性，〔容〕易與兔血清中的IgG結(jié)合。用此試驗(yàn)主要查Ag。2、抗球蛋白試驗(yàn)：是用檢查不完全Ab〔半Ab〕，在試驗(yàn)中所用第二Ab是雙價(jià)抗體。根本方法是以試管凝集試驗(yàn)為根底。3、沉淀反響：其中包括①環(huán)狀反響、②絮狀反響、③瓊脂擴(kuò)散反響等。沉淀反響是用可溶性Ag。Ag-Ab沉淀反響用的電泳是瓊脂電泳和對(duì)流電泳。環(huán)狀沉淀反響的沉淀環(huán)是在Ag與Ab兩液面交界處形成，判定時(shí)間是3～7分鐘〔環(huán)狀沉淀反響〕。用瓊脂擴(kuò)散反響做Ag分析時(shí)，其反響溫度在4℃～6℃下進(jìn)行為宜，一般是72小時(shí)后判定結(jié)果。用其進(jìn)行診斷時(shí)多在18℃～22℃4、電泳：用電泳做診斷多為瓊脂電泳和對(duì)流電泳。這類電泳反響本質(zhì)屬于Ag-Ab沉淀反響。5、CFT〔補(bǔ)體〕：參與CFT有兩個(gè)反響系統(tǒng)5種成分參加。其中補(bǔ)體〔CFT用的補(bǔ)體是豚tun鼠血清中補(bǔ)體〕是此反響的紐帶。它〔CFT〕與兩個(gè)系統(tǒng)的結(jié)合是非特異性的。在CFT中用豚鼠血清中補(bǔ)體，常用滅活溫度是56℃CFT又分為①溫CFT、②冷CFT。溫CFT：是指反響溫度37℃30分鐘，主要是查IgG類Ab冷CFT：是在4℃～6℃〔瓊脂擴(kuò)散反響做Ag分析時(shí)溫度也是4℃～6℃〕進(jìn)行此反響多用于查此外，補(bǔ)體〔CFT〕還參與溶血反響和溶菌反響。第二節(jié)免疫學(xué)根底：抗原〔Ag〕：Ag是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答〔產(chǎn)生Ab、細(xì)胞免疫等〕物質(zhì)。完全Ag是指既有免疫原性又有反響原性的物質(zhì)，而只有反響原性無(wú)免疫原性的物質(zhì)稱為半抗原。決定Ag特異性的最小化學(xué)亞單位稱為決定基〔蔟cu〕，又稱為表位。依其與胸腺的關(guān)系又分Ti抗原和TD抗原。Ti抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM抗體，TD抗原產(chǎn)生需有T細(xì)胞輔助。蛋白質(zhì)是抗原性最強(qiáng)的物質(zhì)，其次是多糖、核酸、類脂是抗原性最弱物質(zhì)。人類血型抗原有A和B抗原，它們〔A抗原和B抗原〕刺激機(jī)體產(chǎn)生抗A和抗B抗體。人類血型抗原是同種異型抗原〔同一種屬不同個(gè)體間的遺傳標(biāo)記不同〕。器官移植所產(chǎn)生的排異反響。也是因同種異型抗原所致。佐劑在免疫中常常采用，它主要的機(jī)制是增強(qiáng)機(jī)體對(duì)Ag的免疫應(yīng)答?？贵w〔Ab〕：Ag物質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生Ab，Ab本質(zhì)是Ig〔免疫球蛋白〕。Ig〔免疫球蛋白〕分為五大類：IgG、IgM、IgA、IgE、IgD。Ig〔免疫球蛋白〕的根本結(jié)構(gòu)是：四條肽鏈〔2條輕鏈-L鏈，2條重鏈-H鏈〕，由雙流鍵連接。L鏈〔輕鏈〕：可分為可變局部〔V〕和恒定局部〔C〕，即V〔可變局部〕L〔輕鏈〕+C〔恒定局部〕L〔輕鏈〕即VL+CL。H鏈〔重鏈〕：也分可變局部〔V〕和恒定局部〔C〕，即VH+CH，但CH〔恒定局部、重鏈〕局部又分為CH1、CH2、CH3。IgM和IgE還有CH4局部。CH1與CH2區(qū)之間為絞鏈區(qū)。如果用木瓜酶水解后，將IgG水解2Fab和Fc。Fab是Ig與Ag結(jié)合部位，F(xiàn)c是可結(jié)晶局部。用胃蛋白酶水解IgG，可分為F(ab,)2和Fc局部，F(xiàn)(ab,)2是2個(gè)Fab連在一起的局部。Ig〔免疫球蛋白〕的分類是根據(jù)H鏈〔重鏈〕結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，主要依Fc局部〔CH〕。Ig同種型是指H鏈所具有的特性。Ig〔免疫球蛋白〕分型是依據(jù)L鏈〔輕鏈〕結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可分為κ和λ型。Ig的Fc段局部可與某些細(xì)胞的Fc受體結(jié)合，如巨噬細(xì)胞。F(ab,)2局部是與Ag結(jié)合部，VH〔重鏈〕+VL〔V可變局部L輕鏈〕是F(ab,)2中的高變區(qū)，直接與Ag能結(jié)合的部位。人類5種Ig〔免疫球蛋白〕各具特色：IgG-血清中含量最高；IgM-分子量最大；IgG：①在血清中含量最高；②它還是唯一能通過(guò)人類胎盤(pán)的；③IgG是抗感染的主要Ig(IgG抗病毒抗體)；eq\o\ac(○,4)結(jié)合補(bǔ)體；eq\o\ac(○,5)起到條理作用；eq\o\ac(○,6)結(jié)合SPA〔葡萄球菌A蛋白〕；eq\o\ac(○,7)起到沉淀反響；eq\o\ac(○,8)中和反響；eq\o\ac(○,9)溶解細(xì)菌。eq\o\ac(○,10)H抗原主要刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG類抗體；eq\o\ac(○,11)肥達(dá)試驗(yàn)IgG類H抗體出現(xiàn)較晚；eq\o\ac(○,12)IgG是人血清中的主要抗體eq\o\ac(○,13)IgG是固定補(bǔ)體IgM、①分子量最大；②早期多為IgM〔IgM早期診斷〕；③IgM是種屬發(fā)育過(guò)程中最原始的Ig〔早期出現(xiàn)抗體的是IgM〕；④IgM有很高的結(jié)合價(jià)和凝集能力。⑤IgM是動(dòng)物機(jī)體在受到初次抗原刺激后最早產(chǎn)生的一種抗體球蛋白。eq\o\ac(○,6)()抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM類抗體。eq\o\ac(○,8)肥達(dá)試驗(yàn)IgM類()抗體出現(xiàn)較早。eq\o\ac(○,9)IgM是感染早期出現(xiàn)的抗體IgA、①有分泌型存在；②局部Ab；③IgA抗蛋白酶的水解作用。④IgA對(duì)大腸桿菌有一定抑制作用；⑤其含量?jī)H次于IgG。⑥呼吸系統(tǒng)的非特異性防御機(jī)制機(jī)械物理性防御富含IgAIgE、①與肥大細(xì)胞膜上Fc受體結(jié)合〔結(jié)合肥大細(xì)胞〕；②是血清中含量最少的一類Ig；IgD。①在血清中含量很少；②因其性質(zhì)很不穩(wěn)定、半衰期很短，所以對(duì)其了解尚少。補(bǔ)體〔C〕：補(bǔ)體是存在于人和動(dòng)物血清中，即可參加特異免疫又可參與非特異免疫作用的大分子物質(zhì)。它有9種成分，11種蛋白組成。9種成分是：C1〕、C2C3補(bǔ)體系統(tǒng)包括補(bǔ)體及D、P、B等因子組成，約有20種成分。補(bǔ)體的激活有兩個(gè)途徑：〔1〕傳統(tǒng)途徑〔第一途徑〕和旁路〔第二途徑〕。傳統(tǒng)途徑〔第一途徑〕：可被Ag-Ab免疫復(fù)合物〔IC〕活化。活化順序是：C1、C4、C2、C3、C5C6免疫系統(tǒng)：1、免疫組織器官：〔1〕中樞：骨髓、胸腺、法氏囊〔禽類〕；〔2〕周?chē)鞴伲浩⑴K、淋巴結(jié)、皮膚免疫系統(tǒng)、黏膜免疫系統(tǒng)。2、免疫細(xì)胞：干細(xì)胞系、淋巴細(xì)胞系〔TH、TC、TS、TDH、BC、漿細(xì)胞等〕、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、NK細(xì)胞等。單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-l。3、免疫分子：TCR、BCR、CD、MHC、Ig、補(bǔ)體、細(xì)胞因子〔IL-l、IL-2〕五、各免疫細(xì)胞特點(diǎn)：1、T細(xì)胞：是由一群細(xì)胞組成。T細(xì)胞定位于淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)?？煞謳兹海渲蠺H細(xì)胞是很重要的免疫細(xì)胞，CD+4可被PHA、ConA、PWM、花生凝集素刺激活化進(jìn)行有絲分裂，幫助產(chǎn)生Ab，司管細(xì)胞免疫。TS細(xì)胞是抑制細(xì)胞，CD+8參加免疫調(diào)節(jié)。TC是細(xì)胞毒細(xì)胞。TH是成熟需要胸腺加工處理。2、B細(xì)胞：B淋巴細(xì)胞主管體液免疫細(xì)胞。外表有抗原抗體受體〔SmIg〕。B細(xì)胞成熟骨髓中〔相當(dāng)于禽類法氏囊〕。未成熟的B細(xì)胞最初可查到Ig的u鏈，活化B細(xì)胞可衍〔yan〕變成漿細(xì)胞，漿細(xì)胞能產(chǎn)生Ab和分泌Ab。PWM是可以刺激B細(xì)胞有絲分裂。人類外周血中T細(xì)胞和B細(xì)胞之比為2：1。3、單核類細(xì)胞：無(wú)Ag受體，但能處理Ag，加工Ag，并向T細(xì)胞遞呈Ag。六、過(guò)敏反響〔變態(tài)反響〕：國(guó)際公認(rèn)的過(guò)敏反響〔變態(tài)反響〕是四個(gè)型：Ⅰ型〔速發(fā)型〕、Ⅱ型〔溶細(xì)胞型〕、Ⅲ型〔免疫復(fù)合物或血管炎型〕Ⅳ型〔遲發(fā)型〕。Ⅰ型〔速發(fā)型〕：是由IgE抗體所致，IgE與肥大細(xì)胞的IgE的Fc受體結(jié)合產(chǎn)生一系列變化，出現(xiàn)Ⅰ型過(guò)敏。如青霉素過(guò)敏〔皮內(nèi)注射過(guò)敏原〕，患有慢性寄生蟲(chóng)感染患者。IgE抗體升高顯著。Ⅱ型〔溶細(xì)胞型〕、Ⅲ型〔免疫復(fù)合物或血管炎型〕：過(guò)敏系由IgM、IgG抗體及補(bǔ)體等參與介導(dǎo)。Ⅳ型〔遲發(fā)型〕：過(guò)敏反響是由T細(xì)胞中TDTH細(xì)胞釋放淋巴因子所致。如結(jié)核菌素過(guò)敏試驗(yàn)〔皮內(nèi)注射過(guò)敏原〕七、毒素變成類毒素：使毒素的毒力減弱，病理作用減弱，但免疫原性仍保存。第五章病毒及立克次體檢驗(yàn)第一節(jié)：病毒檢驗(yàn)：一、病毒學(xué)總論：〔一〕、病毒的特點(diǎn)：病毒屬于微生物界，其不同于其他微生物的特性如下：1、病毒一般只含有一種核酸DNA或RNA，而其它微生物，包括細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體，那么都同時(shí)含有兩種核酸。2、病毒通過(guò)基因組復(fù)制和表達(dá)產(chǎn)生子代病毒的核酸和蛋白質(zhì)，隨后裝配完整的病毒粒子。3、病毒缺乏完整的酶系統(tǒng)，不具備其他生物“產(chǎn)能〞所需的遺傳信息，因此必須利用宿主細(xì)胞的酶類和產(chǎn)能機(jī)構(gòu)，并借助宿主細(xì)胞的生物合成機(jī)構(gòu)復(fù)制其核酸以及合成由其核酸編碼的蛋白質(zhì)，乃至直接利用細(xì)胞成分。4、某些RNA病毒的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA〔cDNA〕，與細(xì)胞基因組整合，并隨細(xì)胞DNA復(fù)制而增殖，即所謂的DNA前病毒。5、病毒沒(méi)有細(xì)胞壁，也不進(jìn)行蛋白質(zhì)、糖和脂類的代謝活動(dòng)，因此對(duì)于干擾微生物的這些代謝過(guò)程而影響微生物結(jié)構(gòu)和功能的抗生素，具有明顯的抵抗力。一個(gè)簡(jiǎn)單的病毒粒子，實(shí)質(zhì)上只是一團(tuán)遺傳物質(zhì)〔DNA或RNA〕和它外圍的一層蛋白外殼。這層蛋白外殼就是衣殼，衣殼和核酸一起總稱為核衣殼。病毒不含氨基酸，這是病毒與其他微生物，包括細(xì)菌、衣原體、立克次體等又一明顯區(qū)別?！捕场⒉《镜姆诸惡兔翰《镜姆诸愊到y(tǒng)采用目、科、亞科、屬和種的等級(jí)制度。屬名應(yīng)是一個(gè)以“virus〞結(jié)尾的單詞；亞科“virinae〞；科“viridae〞；目“virales〞結(jié)尾的單詞。動(dòng)物病毒“種〞的名稱大多引用其所引起疾病的名稱，后加“病毒〞，獸醫(yī)學(xué)上那么常再加上宿主〔動(dòng)物的名稱〕種類，也有的在病名前再加最初發(fā)現(xiàn)該病毒的地名。毒珠名稱至少應(yīng)能反映該毒珠的別離地點(diǎn)和時(shí)間以及該毒珠的類別。根據(jù)其病毒核酸組成還可以將病毒分成DNA病毒和RNA病毒。RNA病毒可分為〔1〕正鏈RNA病毒；〔2〕負(fù)鏈RNA病毒，正鏈RNA病毒可以直接呈現(xiàn)mRNA的作用，同時(shí)又是合成互補(bǔ)鏈的模板；一般情況下，正鏈RNA病毒的基因組RNA具有感染性。負(fù)鏈RNA病毒不能直接呈現(xiàn)mRNA的作用，即不能直接指導(dǎo)合成互補(bǔ)鏈?！踩场⒉《镜脑鲋常翰《救狈ψ陨碓鲋乘璧耐暾赶到y(tǒng)，增殖時(shí)必須依靠宿主細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)，甚至直接利用宿主細(xì)胞的某些成分，這就決定了病毒在細(xì)胞內(nèi)專性寄生的特性。病毒的增殖過(guò)程大致可以分為：〔1〕吸附與侵入、〔2〕脫殼、〔3〕病毒成分的合成及裝配、〔4〕釋放等4個(gè)主要階段。二、病毒學(xué)技術(shù)：〔一〕病毒的培養(yǎng)：〔1〕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、〔2〕雞胚、〔3〕體外培養(yǎng)的器官、〔4〕細(xì)胞，這4種都可以作為人工增殖病毒的根本工具。而大量病毒的，又是病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究以及制備疫苗和特異性診斷試劑的先決條件。1、組織培養(yǎng)：病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖及其對(duì)細(xì)胞的作用，可以根據(jù)細(xì)胞病變、細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)出現(xiàn)血凝素或其他病毒抗原、紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象以及通過(guò)“指示病毒〞的干擾等方法加以識(shí)別。組織培養(yǎng)用的玻璃器皿要用〔硫酸、重酪lao酸鉀〕。常用于組織培養(yǎng)的人工綜合營(yíng)養(yǎng)液的主要成分有：氨基酸、糖類、無(wú)機(jī)鹽、維生素、輔助生長(zhǎng)因子等。常用的人工綜合營(yíng)養(yǎng)液為：MEM和RPM1640。用人工綜合營(yíng)養(yǎng)液配制細(xì)胞生長(zhǎng)液時(shí)需要參加eq\o\ac(○,1)適量血清和谷氨酰胺溶液，eq\o\ac(○,2)還需要參加規(guī)定量的抗生素溶液防止細(xì)菌污染，eq\o\ac(○,3)參加碳酸氫鈉溶液修正PH，eq\o\ac(○,4)根據(jù)情況還可參加HEPES溶液可使生長(zhǎng)液具有較強(qiáng)的PH緩沖能力。能使組織和成片細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞的化學(xué)制劑為胰蛋白酶和EDTA，EDTA使用液又可稱之為Versen溶液，其分散細(xì)胞的作用原理是EDTA可以結(jié)合鈣、鎂離子，使組織細(xì)胞分散。動(dòng)物血清中具有細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的各種營(yíng)養(yǎng)因子，它能促進(jìn)細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)，且有很強(qiáng)的酸堿緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可分為〔1〕細(xì)胞生長(zhǎng)液〔2〕細(xì)胞維持液兩種。細(xì)胞生長(zhǎng)液：是使細(xì)胞發(fā)育增殖的液體，因此要求營(yíng)養(yǎng)條件豐厚；細(xì)胞維持液：用于延緩細(xì)胞代謝，從而延長(zhǎng)細(xì)胞的存活時(shí)間，以利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。這兩種液體成分的主要區(qū)別是血清含量不同。細(xì)胞生長(zhǎng)適宜的PH范圍是PH7.2～7.6。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)全過(guò)程的關(guān)鍵是防止污染。2、細(xì)胞株的保存是組織培養(yǎng)中一個(gè)十分重要的工作，二甲基亞砜是細(xì)胞低溫保存的良好的保護(hù)劑，含10%二甲基亞砜的血清可以作為懸浮細(xì)胞的液體在液氮中保存細(xì)胞。3、病毒學(xué)上常用的細(xì)胞類型可分為〔1〕原代細(xì)胞、〔2〕二倍體細(xì)胞、〔3〕傳代細(xì)胞，三大類，原代細(xì)胞培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)的根本區(qū)別在于細(xì)胞是否能在體外無(wú)限傳代。4、細(xì)胞的純化：細(xì)胞的純化可以用細(xì)胞克隆技術(shù)。克隆是指用無(wú)性繁殖方法產(chǎn)生的一組遺傳上相同的細(xì)胞和生物群體的過(guò)程。〔二〕、病毒病的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷：1、病毒的別離和鑒定：〔P219〕病毒對(duì)細(xì)胞的感染性具有嚴(yán)格的選擇性和特異性，因此用組織培養(yǎng)細(xì)胞接種病毒必須首先選擇敏感細(xì)胞?！?〕病毒增殖的判定：〔略〕〔2〕細(xì)胞病變〔CPE〕：大局部病毒在敏感細(xì)胞系均可出現(xiàn)CPE〔細(xì)胞病變〕，CPE〔細(xì)胞病變〕可以表現(xiàn)為嚴(yán)重的細(xì)胞破壞、細(xì)胞腫大、顆粒增多、細(xì)胞融合成合胞體或無(wú)明顯的細(xì)胞變化等。CPE〔細(xì)胞病變〕經(jīng)常具有病毒“種〞的特性，因此常常作為病毒堅(jiān)決依據(jù)?！?〕病毒蝕(shi)斑技術(shù)〔又稱空斑〕：病毒蝕(shi)斑是指病毒在已長(zhǎng)成的單層細(xì)胞上形成的局限性病灶，主要用于病毒的純化或病毒懸液中感染病毒含量的測(cè)定?！灿貌《疚g斑技術(shù)測(cè)定含量-病毒純化或病毒懸液中感染的病毒〕〔4〕病毒感染力的滴定：有兩種，一種方法是用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物測(cè)定LD50(半數(shù)致死量)；另一種方法是在組織細(xì)胞上測(cè)定TCID50〔半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量?！?〕病毒的保存：別離或鑒定后的病毒經(jīng)過(guò)冷凍枯燥后可以長(zhǎng)期保存。2、免疫-血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：免疫-血清學(xué)實(shí)驗(yàn)是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合的原理進(jìn)行的，主要用于兩個(gè)目的：從病料獲得病毒株后，應(yīng)用的抗病毒血清或單克隆抗體進(jìn)行免疫-血清學(xué)試驗(yàn)，鑒定病毒的種類乃至型別；②由發(fā)病動(dòng)物采集血清標(biāo)本，應(yīng)用全病毒或特異性病毒抗原，測(cè)定發(fā)病動(dòng)物體液中的特異性抗體，或進(jìn)一步比擬發(fā)病動(dòng)物的急性發(fā)病期和恢復(fù)期血清中的抗體效價(jià)，了解病毒性抗體是否有明顯的增長(zhǎng)，從而判定病毒感染的存在?！?〕中和試驗(yàn)：動(dòng)物在受到病毒感染后，在體內(nèi)產(chǎn)生抗體，如果該抗體能與相應(yīng)的病毒粒子特異性地結(jié)合，使后者喪失感染力，這種抗體就成為中和抗體。應(yīng)用的病毒或病毒抗原，可以測(cè)知患者體內(nèi)中和抗體的存在及其效價(jià)；用的抗病毒血清或中和性單克隆抗體，也可以進(jìn)行病毒的鑒定，因此中和試驗(yàn)也常用于新別離病毒株的鑒定?！?〕血凝和血凝抑制試驗(yàn)：許多病毒能夠凝集某些種類動(dòng)物的紅細(xì)胞，病毒凝集的紅細(xì)胞種類隨病毒種類的不同而不同。血凝反響可被特異性抗體所抑制，因此血凝抑制試驗(yàn)可以應(yīng)用于：①應(yīng)用于標(biāo)準(zhǔn)病毒懸液測(cè)定血清中的相應(yīng)抗體；②應(yīng)用于特異性抗體鑒定新別離的病毒。用枸櫞酸鈉配置的阿氏液具有抗紅細(xì)胞凝集作用，用于血凝和血凝抑制試驗(yàn)中配置紅細(xì)胞懸掖。同一患者急性發(fā)病期和恢復(fù)期雙份血清〔相距2～3周〕的抗體效價(jià)增高4倍以上者，說(shuō)明本次發(fā)病是由所測(cè)抗體相應(yīng)病毒引起的?！?〕補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：一個(gè)抗體分子與抗原結(jié)合后，可以導(dǎo)致數(shù)百個(gè)補(bǔ)體分子的激活，呈現(xiàn)一定程度的放大作用，所以補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一個(gè)比擬敏感的方法，一般用于人及動(dòng)物血清中特異性抗體的定量檢測(cè)〔補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)〕，也常用于新別離病毒的鑒定。〔4〕免疫熒光技術(shù)：將抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，再進(jìn)行抗原-抗體反響，出現(xiàn)熒光就說(shuō)明標(biāo)記物的存在，同時(shí)也反映了抗原或抗體的存在。免疫熒光技術(shù)具有抗原-抗體反響的特異性和染色技術(shù)的快速性，并可在細(xì)胞水平上進(jìn)行抗原定位，故在病毒學(xué)研究和病毒病的診斷中都是一種應(yīng)用很廣的方法。熒光抗體染色技術(shù)包括〔1〕直接法、〔2〕間接法、〔3〕補(bǔ)體法、〔4〕SPA(葡萄球菌A蛋白)免疫熒光法。〔5〕酶免疫技術(shù)：以酶作為標(biāo)記物，通過(guò)化學(xué)方法將其與抗原或抗體共價(jià)結(jié)合，形成酶標(biāo)記物，可與被檢的抗原或抗體起反響，形成酶標(biāo)記免疫復(fù)合物。制備酶結(jié)合物的方法很多，目前應(yīng)用最廣泛的有過(guò)碘酸鹽法和戊二醛法。酶免疫測(cè)定試驗(yàn)包括：①間接法〔測(cè)抗體〕、②雙抗體夾心法〔測(cè)抗原〕、③IgM捕獲ELISA〔酶鏈免疫吸附實(shí)驗(yàn)〕、④競(jìng)爭(zhēng)法。IgM是動(dòng)物機(jī)體在受到初次抗原刺激后最早產(chǎn)生的一種抗體球蛋白，因此IgM捕獲ELISA常應(yīng)用于多種病毒病的早期診斷。抗u鏈抗體特異性結(jié)合IgM，可以應(yīng)用于IgM捕獲ELISA。IgG是主要的抗病毒抗體，在第二次抗原刺激時(shí)，由于免疫回憶，發(fā)生迅速的加強(qiáng)反響IgG量顯著增高〔分子量大〕。在病毒病的診斷中，也常將這一原理用于判斷病毒病的感染狀況，但常常需要采集恢復(fù)期和急性期雙份血清進(jìn)行抗體效價(jià)的比擬如IgG水平4倍或4倍以上增加具有血清學(xué)診斷意義?！?〕膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)：膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)是以膠體金為載體吸附抗體和抗原，完成檢測(cè)特異性抗原或抗體的。膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)優(yōu)于ELISA〔酶鏈免疫吸附實(shí)驗(yàn)〕法和免疫熒光法的最主要一點(diǎn)是肉眼直接判定結(jié)果?！部偨Y(jié)：膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)就是直接用肉眼可以觀察結(jié)果〕。3、病毒病的分子生物學(xué)診斷：分子生物學(xué)診斷的特異性取決于核酸序列的特異性，病毒病的分子生物學(xué)診斷，包括對(duì)病毒核酸和蛋白質(zhì)的測(cè)定。PCR〔全稱是聚合酶鏈反響〕，是在引物、摸板DNA和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下依賴于DNA聚合酶的酶促合成反響。由于引物是按照與擴(kuò)增區(qū)段兩端序列彼此互補(bǔ)的原那么設(shè)計(jì)的，因此每一條新生鏈的合成都是從引物的退火結(jié)合位點(diǎn)開(kāi)始，并沿著相反鏈延伸。因此，PCR〔聚合酶鏈反響〕的特異性是由人工合成的一對(duì)寡核苷酸引物所決定的。PCR〔聚合酶鏈反響〕可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)對(duì)僅有的幾個(gè)拷貝的基因放大數(shù)百萬(wàn)倍，使PCR〔聚合酶鏈反響〕擴(kuò)增結(jié)果在瓊脂糖凝膠電泳后形成明顯可見(jiàn)的DNA帶。溴化乙錠〔EB〕可以插入核酸分子之間并在紫外線下放射熒光，因此可以作為核酸分子電泳的指示劑?！埠怂岱肿与娪镜闹甘緞┯娩寤义V-EB〕?！?〕RT-PCR(聚合酶鏈反響)技術(shù)：由于DNA聚合酶不能以RNA為摸板合成cDNA，所以不能對(duì)RNA病毒核酸進(jìn)行直接PCR〔聚合酶鏈反響〕。首先必須提取病毒RNA。提取病毒RNA時(shí)，要注意防止RNA酶對(duì)病毒RNA的降解作用。為此，所用的試劑和用品均需要進(jìn)行無(wú)Rnase處理，〔Rnas必須使用無(wú)熱原質(zhì)水制備〕如參加RNA酶抑制劑或高壓滅菌。參加反轉(zhuǎn)錄酶經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄反響合成與病毒RNA互補(bǔ)的DNA(cDNA)，然后才能進(jìn)行PCR〔聚合酶鏈反響〕，這就是所謂的RT-PCR〔逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響〕。目前常用的逆轉(zhuǎn)錄酶〔RT-PCR〕包括MMV和AMV。RT-PCR〔逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響〕反響的特異性取決于模板和引物，引物序列必須是被檢病毒特異的，原那么上要求引物3，端堿基與模板一定要配對(duì)，對(duì)引物5，末端的堿基并沒(méi)有嚴(yán)格的限制，只要與模板DNA結(jié)合的引物長(zhǎng)度足夠，其5，末端堿基可以不與模板DNA匹配而呈游離狀態(tài)，因此對(duì)引物5，末端可以進(jìn)行自由修飾。PCR〔聚合酶鏈反響〕反響中，引物1又稱Watson引物，是與模板正鏈互補(bǔ)的寡核苷酸鏈?！?〕核酸雜交檢測(cè)技術(shù)：雜交的根本原理是帶互補(bǔ)序列的單鏈核苷酸相遇時(shí)，會(huì)退火形成雙鏈?！坝糜谠\斷目的〞雜交雙方是序列的病毒探針和待測(cè)樣品中的病毒核酸，如果是陽(yáng)性結(jié)果說(shuō)明病毒感染的存在。在核酸分子雜交技術(shù)根底之上又開(kāi)展了一系列檢測(cè)DNA和RNA的技術(shù)，如Southrnblotting、Westernblotting、Ditblotting和菌落雜交。聚丙烯酰胺凝膠電泳也可簡(jiǎn)稱為PAGE〔PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳-測(cè)雜交〕DNA限制性內(nèi)切酶可以識(shí)別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列。利用不同的內(nèi)切酶切割病毒DNA，依據(jù)切割后的片段在凝膠電泳中泳動(dòng)速率不同所形成的電泳帶型做出診斷?！?〕病毒病的免疫預(yù)防：決定疫苗免疫效果的關(guān)鍵因素是疫苗本身的質(zhì)量。目前普遍應(yīng)用的病毒疫苗主要分為弱毒〔活〕疫苗和滅活疫苗兩類。弱毒〔活〕疫苗分解成〔弱毒疫苗、弱活疫苗〕。近年來(lái)隨著分子病毒學(xué)研究的不斷深入，相繼研究出了〔1〕亞單位疫苗、〔2〕基因工程疫苗、〔3〕活載體疫苗、〔4〕分子疫苗。三、病毒學(xué)各論：〔一〕、蟲(chóng)媒病毒：蟲(chóng)媒病毒是由媒介昆蟲(chóng)作為病毒的傳遞者的一類病毒，由蟲(chóng)媒病毒引起的疾病即為蟲(chóng)媒病毒，如乙型腦炎、新疆出血熱、登革熱、黑熱病等?！捕?、亞病毒：〔類病毒和阮病毒等總稱〕類病毒沒(méi)有外殼蛋白，對(duì)各種有機(jī)溶劑有抵抗力，說(shuō)明也沒(méi)有脂質(zhì)外膜，只是一個(gè)裸luo露的RNA分子，類病毒只出現(xiàn)于植物。在人和動(dòng)物中存在著一類被稱為亞急性海綿樣腦病的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如瘋牛病。瘋牛病能夠通過(guò)食物鏈傳染給人。研究證明，這種奇特疾病的病原，即不是病毒，也不是類病毒，大體上是由蛋白質(zhì)組成，目前稱之為阮病毒?！部偨Y(jié)：病毒-亞急性海綿樣腦病的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如瘋牛病〕〔三〕、流行性乙型腦炎病毒：〔屬于蟲(chóng)媒病毒〕病原學(xué)：流行性乙型腦炎病毒屬于黃病毒科。黃病毒科能夠致人疾病的病毒有登革熱病毒、丙型肝炎病毒和乙型腦炎病毒。由于1924年乙型腦炎病毒首先證實(shí)于日本，故也稱其為日本乙型腦炎。C6/36細(xì)胞適合于乙型腦炎病毒的別離和培養(yǎng)。流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染原：由蚊為媒介而傳播，引起人畜感染的主要媒介可能是三帶啄庫(kù)蚊，其他庫(kù)蚊也有可能。〔2〕傳染途徑：流行性乙型腦炎是一種自然疫源性疾病，豬是傳播乙型腦炎病毒〔乙腦病毒〕的主要?jiǎng)游锼拗?。乙型腦炎病毒通過(guò)蚊-豬-蚊的循環(huán)維持自身的存在?！?〕人群易感性：除人、馬和豬外，通常不呈現(xiàn)臨床病癥。臨床表現(xiàn)：流行性乙型腦炎是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性傳染病，以高熱和狂暴或沉郁等神經(jīng)病癥為特征。預(yù)防：疫苗預(yù)防注射?！菜摹场⒌歉餆岷偷歉锍鲅獰岵《荆骸驳歉餆帷狣H、登革出血熱病毒—DHF〕DH/DHF〔屬于蟲(chóng)媒病毒〕病原學(xué)：登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬含單股正鏈RNA。登革熱〔DH〕和登革出血熱〔DHF〕是由4個(gè)血清型病毒引起的兩種不同臨床類型的急性傳染病。C6/36細(xì)胞可用于登革病毒別離和培養(yǎng)。流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染原：中國(guó)DH/DHF的傳播媒介主要為埃及伊蚊和白紋wen伊蚊，這些蚊種主要生活在家庭儲(chǔ)水容器中?！?〕傳染途徑：登革熱存在城市型〔人-蚊-人循環(huán)〕、叢林型〔猴-蚊-猴循環(huán)〕兩種疫源地。中國(guó)主要為人-蚊-人循環(huán)?！?〕人群易感性：DH/DHF主要發(fā)生于熱帶和亞熱帶地區(qū)。中國(guó)從嬰兒到老人均可發(fā)病，以兒童和青壯年患病率較高。臨床表現(xiàn)：潛伏期：一般為5～8天。登革熱主要以高熱、頭痛、肌肉和關(guān)節(jié)痛為主，與登革熱的主要區(qū)別是有無(wú)嚴(yán)重出血。DSS〔登革休克綜合征〕是DH/DHF的嚴(yán)重形式，其含義是登革休克綜合征。主要診斷依據(jù)為出血、休克、口唇發(fā)紺和血壓低或測(cè)不到。〔這些病癥是登革休克綜合征臨床表現(xiàn)〕世界衛(wèi)生組織(WHO)對(duì)DHF/DSS的診斷限定了嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。有四種主要的臨床表現(xiàn)：高熱、出血、肝腫大和循環(huán)衰竭。WHO根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度把DHF/DSS〔登革出血熱/登革休克綜合征〕分為四個(gè)等級(jí)：Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)表現(xiàn)為DHF〔登革出血熱〕輕型，Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)表現(xiàn)為更嚴(yán)重的形式—DSS的〔登革休克綜合征〕4、預(yù)防：防蚊滅蚊。傳染源的管理。〔五〕、流行性出血熱病毒：〔屬于蟲(chóng)媒病毒〕1、病原學(xué)：流行性出血熱病毒屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，基因?yàn)樨?fù)鏈分節(jié)段RNA。中國(guó)目前發(fā)現(xiàn)的流行性出血熱主要有2種類型：HTNV型〔野鼠型〕和SEOV型〔家鼠型〕。Vero-E6細(xì)胞適合于流行性出血熱病毒的別離和培養(yǎng)。2、流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染原：在我國(guó)流行性出血熱主要傳染源和病毒宿主為嚙nie齒動(dòng)物〔黑線姬鼠和褐家鼠〕。嚙nie-咬如蟲(chóng)咬嚙?！?〕傳染途徑：接觸帶病毒的宿主動(dòng)物及其排泄物可以造成感染?！?〕人群易感性：普遍易感。3、臨床表現(xiàn)：潛伏期：一般為7～14天。典型的臨床表現(xiàn)有三大特征：發(fā)熱、出血和腎損害。流行性出血熱主要以腎臟損害為特征，故又稱之為腎綜合征出血熱。預(yù)防：〔1〕防鼠滅鼠?！?〕接種疫苗：目前我國(guó)所使用的流行性出血熱的疫苗是細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗，可以分為3種類型〔家鼠型、野鼠型、家鼠、野鼠雙價(jià)混合苗〕經(jīng)過(guò)近幾年的應(yīng)用已證明在預(yù)防流行性出血熱方面有效。〔3〕講究衛(wèi)生。診斷：流行性出血熱對(duì)于明確疫源地類型、選擇所用疫苗的種類、指導(dǎo)防治策略等都非常重要。目前流行性出血熱的分型診斷方法有多種，包括〔1〕免疫熒光法、〔2〕單抗分型、〔3〕RT-PCR〔逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響〕、〔4〕ELISA〔酶鏈免疫吸附實(shí)驗(yàn)〕法。鼠帶毒率調(diào)查是常用的監(jiān)測(cè)手段之一，用于流行性出血熱鼠帶毒率調(diào)查標(biāo)本制備的主要方法為鼠肺冰凍切片，鼠帶毒率調(diào)查的常用方法為免疫熒光法?！擦?、克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰幔骸补视址Q為新疆出血熱〕病原學(xué)：克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰崾遣寄醽啿《究?、?nèi)羅病毒屬的病毒，故又稱為新疆出血熱。病毒基因組為負(fù)鏈分節(jié)段RNA。流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染原：30多種蜱，特別璃眼蜱屬既是該病毒的儲(chǔ)存宿主又是傳播媒介；多種不同的脊椎動(dòng)物既是蜱的宿主，也可能是病毒的儲(chǔ)存宿主?！?〕傳染途徑：人的感染是因?yàn)轵绲亩ＲЩ蛎芮薪佑|感染動(dòng)物或患者?！?〕人群易感性：普遍易感。臨床表現(xiàn)：潛伏期：蜱叮咬至疾病發(fā)作之間的時(shí)間為潛伏期，一般為3～6天。臨床表現(xiàn)：克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰崾且环N神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，神經(jīng)系統(tǒng)的病癥出現(xiàn)于血管異常造成的顯著的出血綜合征之前。常常為突發(fā)和急性，發(fā)熱〔39℃～414、預(yù)防：目前尚無(wú)特異性疫苗進(jìn)行接觸前的主動(dòng)預(yù)防。有效的預(yù)防首先應(yīng)防止與傳染源及媒介的接觸。〔七〕、肝炎病毒：甲型肝炎病毒：甲型肝炎病毒〔HAV〕可以引起甲型肝炎。在病毒分類上甲肝病毒屬于小RNA病毒科。甲型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要依賴于檢測(cè)患者血清中的抗HAV〔甲型肝炎病毒〕的IgM。2、乙型肝炎病毒：〔HBV〕〔1〕、病原學(xué)：乙型肝炎病毒〔HBV〕屬于嗜肝DNA病毒科、正嗜肝DNA病毒屬，是傳染性肝炎的一個(gè)重要病因?！?〕流行病學(xué)：HBV〔乙型肝炎病毒〕的唯一宿主是人。嗜肝DNA病毒可以存活于那些與感染者粘膜或皮膚創(chuàng)口接觸的物品外表?！?〕診斷：HBV〔乙型肝炎病毒〕侵入機(jī)體后進(jìn)入血液循環(huán)，主要在白細(xì)胞中進(jìn)行繁殖。HBV〔乙型肝炎病毒〕主要有3種抗原，分別為HBsAg〔乙型肝炎外表抗原〕、HBcAg〔乙型肝炎核心抗原〕、HBeAg〔乙肝e抗原〕。HBsAg〔乙型肝炎外表抗原〕：〔1〕HBsAg可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生乙型肝炎外表抗體〔抗—HBs〕,具有抗HBV〔乙型肝炎病毒〕感染的作用、〔2〕HBsAg與病毒的中和性作用有關(guān)。HBcAg〔乙型肝炎核心抗原〕：為病毒核心的主要抗原，是急性乙型肝炎病毒感染的重要診斷指標(biāo)之一，是檢測(cè)到抗HbcAgM。HBeAg〔乙肝e抗原〕：在乙型肝炎潛伏期的后期出現(xiàn)并且HBeAg的存在表示HBV〔乙型肝炎病毒〕的存在。HBeAg是在病毒復(fù)制活潑時(shí)的宿主血清中檢測(cè)到的一種可溶性抗原，HBeAg成分的消失和出現(xiàn)相應(yīng)的抗體，預(yù)示著乙型肝炎病毒的繁殖減弱和疾病有可能向好的方面轉(zhuǎn)化。血清中HBV〔乙型肝炎病毒〕DNA聚合酶的存在，說(shuō)明HBV的感染處于病毒活動(dòng)復(fù)制期?！?〕預(yù)防：疫苗接種：目前用于預(yù)防接種的乙型肝炎疫苗主要有基因工程乙肝疫苗和乙型肝炎外表抗原佐劑疫苗。防止血源性污染和傳播。3、丙型肝炎病毒：〔HCV〕——非甲非乙型肝炎病毒病原學(xué)：丙型肝炎病毒〔HCV〕屬于黃病毒科、類丙型肝炎病毒屬。病毒粒子含有一單股正鏈RNA。丙型肝炎又可稱為非甲非乙型肝炎，根據(jù)其流行病學(xué)特征、臨床表現(xiàn)和傳播方式，可以將其分為〔1〕腸道傳播的非甲非乙型肝炎、〔2〕輸血后非甲非乙型肝炎。流行病學(xué)：①宿主動(dòng)物與傳染源：人是丙型肝炎的自然宿主和貯zhu存者。尚未確認(rèn)別的自然宿主和非脊椎動(dòng)物傳播媒介。②傳染途徑：約60%的丙型肝炎病例都是由血液接觸引起的，而非腸道感染。③人群易感性：普遍易感。4、丁型肝炎病毒〔HDV〕：丁型肝炎病毒〔HDV〕為缺陷型RNA病毒，必須借助乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕包裹才能成為感染性病毒顆粒，常與HBV〔乙型肝炎〕同時(shí)或重疊感染。HDV〔丁型肝炎病毒〕主要通過(guò)非腸道傳播途徑傳播。HDV感染的指標(biāo)是血液和體液中可測(cè)得HDV抗原。抗HDV抗體檢測(cè)可以反映HDV感染狀況。慢性HDV感染與多種肝臟疾病密切相關(guān)，包括重癥肝炎、肝硬化、丁型肝炎和慢性活動(dòng)性肝炎?！舶恕沉鞲胁《尽餍行愿忻安《尽矊儆诤粑啦《尽巢≡瓕W(xué)：流感病毒屬于正粘病毒科。按流感病毒核蛋白與基質(zhì)蛋白抗原性的不同，流感病毒又可分為甲、乙、丙3型。流感病毒基因組為單股RNA，由8個(gè)階段組成。流感病毒基因組片段具有共同的特點(diǎn)：所有的RNA階段具有相同的5，端。1980年WHO公布的流感病毒命名方法，一株流感病毒名稱中包括下面幾項(xiàng)內(nèi)容：型別/宿主/別離地點(diǎn)/毒株序號(hào)/別離年代〔亞型〕。流感病毒血凝素變異性很強(qiáng)是造成流感病毒易發(fā)生抗原變異的主要原因。2、流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染源：人的絕大多數(shù)甲型流感病毒能自然感染家禽、家畜，并進(jìn)一步支持人甲型流感病毒新亞型可能來(lái)源于動(dòng)物的觀點(diǎn)。乙型流感病毒能引起人的呼吸道感染，丙型流感病毒也是感染人的病毒?！?〕傳播途徑：流感病毒的主要傳播途徑是空氣飛沫?！?〕人群易感性：3個(gè)型流感病毒沒(méi)有共同抗原，都能感染人；但甲型流感病毒的感染范圍很廣，容易引起大規(guī)模流行。3、免疫預(yù)防：由于流感病毒變異頻繁，因此疫苗注射必須有針對(duì)性，即必須針對(duì)當(dāng)前的流行株，才能取得良好的免疫效果。4、診斷：用于流感病毒別離與鑒定的標(biāo)本應(yīng)取自患者鼻咽分必物。流感病毒的快速診斷主要依賴于檢查抗病毒血凝素抗體?！簿拧嘲２├《荆翰≡瓕W(xué)：絲狀病毒科、絲狀病毒屬包括兩種病毒，即①埃博拉病毒和②馬爾堡病毒。研究絲狀病毒的重要意義在于：〔1〕這兩種病毒均具極高的傳染性，對(duì)人類的危害極大；〔2〕室溫下非常穩(wěn)定；〔3〕埃博拉病毒60℃〔4〕埃博拉病毒最初流行于扎伊爾北部的埃博拉河流域而命名為埃博拉病毒。2、流行病學(xué)：埃博拉病毒的自然宿主尚末確定。自然條件下，人和猴都能發(fā)生嚴(yán)重感染并死亡。埃博拉病毒感染后可以引起出血的臨床表現(xiàn)，因此常將其歸為出血熱病毒。根據(jù)埃博拉病毒的抗原性的差異，又可將埃博拉病毒分為3個(gè)血清型，不同血清型的埃博拉病毒其致病型有很大的差異。目前認(rèn)為，埃博拉病毒的疫源地主要在非洲大陸，但1989年自菲律賓運(yùn)往美國(guó)的獼猴發(fā)生了感染，泰國(guó)也有埃博拉病毒感染的血清學(xué)證據(jù)，提示東南亞地區(qū)也可能是疫源地之一。馬爾堡病毒也可引起人的嚴(yán)重出血熱，在人-人或猴-人之間傳播?！彩恕潮遣《荆罕遣《緦儆谛『颂呛怂岵《究啤⒈遣《緦?，是與人類普遍感冒有關(guān)的病毒?！彩拧橙傺撞《荆骸矊儆诤粑啦《尽沉餍行匀傺资怯筛闭巢《究啤⒏闭巢《緦俚娜傺撞《疽?。流行性腮腺炎最具有流行病學(xué)意義的傳染源是亞臨床型者?！捕程旎ú《荆骸矊儆诙活惒《尽程旎ㄊ嵌徊《究?、正痘病毒屬的天花病毒引起的一種傳播迅速的烈性傳染病。由于使用痘苗病毒疫苗預(yù)防，1977年天花在全世界流行終止?！彩晨袢《荆翰≡瓕W(xué)：狂犬病毒屬于彈狀病毒科、狂犬病毒屬。因其特有的臨床表現(xiàn)，狂犬病又可稱為“恐水病〞。從感染動(dòng)物或患者中發(fā)現(xiàn)的狂犬病毒又可稱之為野毒株或街毒；狂犬病毒街毒經(jīng)過(guò)系列傳代適應(yīng)特定宿主后即為固定毒。根據(jù)對(duì)不同毒株的血清反響和單克隆抗體分析，將狂犬病毒分成5個(gè)血清型：血清1型、血清2型、血清3型、血清4型、血清5型。血清2、3、4、5型又稱為狂犬病相關(guān)病毒，野外分布的主要為血清2、3、4型。在血清分型的根底上，利用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)狂犬病毒也進(jìn)行了遺傳學(xué)分型，即將狂犬病毒屬分為6種基因型：基因型1〔血清1型〕、基因型2〔血清2型〕、基因型3〔血清3型〕、基因型4〔血清4型〕、基因型5和基因型6〔血清5型〕相對(duì)應(yīng)。2、流行病學(xué)：〔1〕宿主動(dòng)物與傳染源：狂犬病毒幾乎可以感染所有溫血?jiǎng)游?，但造成人類感染的主要傳染源是帶病毒犬?！?〕傳播途徑：因感染狂犬病毒的動(dòng)物咬傷，感染性唾液污染傷口發(fā)生感染?！?〕人群易感性：人及所有溫血?jiǎng)游锝阅芨腥尽?、預(yù)防：狂犬病的預(yù)防主要包括兩個(gè)方面：〔1〕即控制傳染源〔2〕暴露后應(yīng)用免疫制劑?？刂苽魅驹粗饕羌茵B(yǎng)犬的免疫。狂犬病免疫制劑包括被動(dòng)免疫與主動(dòng)免疫兩種?？袢〉谋粍?dòng)免疫制劑有動(dòng)物源抗狂犬病病毒的精制血清和人源狂犬病免疫球蛋白。主動(dòng)免疫即注射狂犬疫苗。我國(guó)于1981年開(kāi)始用地鼠腎細(xì)胞疫苗，近幾年又開(kāi)始應(yīng)用Vero〔非洲綠猴腎〕細(xì)胞狂犬病疫苗。4、診斷：狂犬病病毒或病毒抗原可以在患者身體多個(gè)部位，如角膜壓片、腦脊髓液、唾液和咬傷處皮膚組織檢測(cè)到。實(shí)驗(yàn)室診斷狂犬病最具特性的診斷依據(jù)是—感染神經(jīng)原內(nèi)的Negri小體〔內(nèi)基氏小體〕，最常見(jiàn)于海馬及小腦普爾金耶組織的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，是狂犬病病毒的集落。WHO推薦快速熒光灶抑制試驗(yàn)取代了傳統(tǒng)的小鼠中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)狂犬疫苗免疫后中和抗體水平?！彩弧齿啝畈《荆骸矊儆谀c道病毒〕1、病原學(xué)：輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬，是各種幼齡動(dòng)物非細(xì)胞性腹瀉的主要病原之一。病毒由11個(gè)節(jié)段的雙鏈RNA組成。根據(jù)輪狀病毒RNA11個(gè)節(jié)段的聚丙烯酰胺電泳圖形不同，可以將輪狀病毒進(jìn)行分型和鑒定。絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物輪狀病毒，具有一種相同的群抗原，這些輪狀病毒被命名為A群輪狀病毒，是研究的主要對(duì)象。2、流行病學(xué)：輪狀病毒宿主范圍甚廣，的有人及多種動(dòng)物。據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，全世界幼兒發(fā)生的腸炎至少有50%是由輪狀病毒引起的?！材c道病毒〕。3、預(yù)防：人用口服輪狀病毒活疫苗可是兒童獲得保護(hù)。4、診斷：輪狀病毒感染的可靠的實(shí)驗(yàn)室診斷依賴于檢出輪狀病毒或抗原，進(jìn)行該項(xiàng)診斷應(yīng)收集糞便。培養(yǎng)輪狀病毒使用最普遍的是MA-104傳代細(xì)胞系。輪狀病毒復(fù)制方式不同于其他呼腸孤病毒，它不是通過(guò)吞飲作用進(jìn)入細(xì)胞，而是通過(guò)胞漿膜直接進(jìn)入胞漿，胰蛋白酶對(duì)病毒進(jìn)行處理可以使病毒變?yōu)橛懈腥拘?。因此為了在?xì)胞培養(yǎng)中復(fù)制輪狀病毒和連續(xù)傳代通常需要用胰蛋白酶對(duì)病毒進(jìn)行處理，從而促進(jìn)輪狀病毒的感染性?！彩嘲捳畈《荆喊捳畈《臼且蝗狠^大的有囊膜的雙鏈DNA病毒。根據(jù)進(jìn)行該項(xiàng)診斷皰疹病毒的感染性質(zhì)，又可將皰疹病毒分為A群和B群兩個(gè)亞群。A群：凡在體外培養(yǎng)時(shí)，容易從細(xì)胞內(nèi)釋放到營(yíng)養(yǎng)液中的病毒為A群；B群：病毒同細(xì)胞緊密結(jié)合很難釋放到營(yíng)養(yǎng)液中為B群，又名細(xì)胞結(jié)合性病毒。皰疹病毒基因組結(jié)構(gòu)由末端重復(fù)序列和內(nèi)部重復(fù)序列所組成，重復(fù)序列的數(shù)量和長(zhǎng)度在不同的皰疹病毒有較大的差異。皰疹病毒的基因可以整合于細(xì)胞的基因組內(nèi)，成為細(xì)胞DNA的一局部，長(zhǎng)遠(yuǎn)地復(fù)制下去，形成長(zhǎng)期潛伏感染狀態(tài)。皰疹病毒與腫瘤發(fā)生關(guān)系的機(jī)制目前已經(jīng)證明與皰疹病毒隱性感染有關(guān)。人皰疹病毒共有5型，皰疹病毒4型，即EB病毒〔EBV〕，EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外，還與人類鼻咽癌有密切關(guān)系?！彩衬孓D(zhuǎn)錄病毒：——前病毒——RNA腫瘤病毒——白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒科最根本的特征是在其生命活動(dòng)過(guò)程中有RNA到DNA的復(fù)制過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄病毒病毒的基因組是單股、正鏈、線性RNA的二聚體，病毒粒子中的RNA不具備感染性。逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA反轉(zhuǎn)錄成為DNA后，病毒DNA可以整合在宿主染色體中，這是逆轉(zhuǎn)錄病毒生命存在的一種形式，這種形式稱之為前病毒。能夠引起腫瘤的逆轉(zhuǎn)錄病毒在文獻(xiàn)中被稱之為RNA腫瘤病毒。致瘤性逆轉(zhuǎn)錄病毒中可以引起惡性疾患，潛伏期長(zhǎng)，并且不引起靶細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生明顯的變化的病毒為白血病病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒獨(dú)特的基因組結(jié)構(gòu)和生命周期使逆轉(zhuǎn)錄病毒在分子生物學(xué)研究和基因治療中其到了基因轉(zhuǎn)移載體的重要作用。〔十四〕艾滋病〔AIDS〕病毒：人Ⅰ型免疫缺陷病毒〔HIV-1〕和人Ⅱ型免疫缺陷病毒〔HIV-2〕引起人的獲得性免疫缺陷綜合征?！睞IDS〕1、、病原學(xué)：人Ⅰ型免疫缺陷病毒〔HIV-1〕和人Ⅱ型免疫缺陷病毒〔HIV-2〕引起人的獲得性免疫缺陷綜合征，簡(jiǎn)稱艾滋病〔AIDS〕。艾滋病病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科、慢病毒屬。2、致病機(jī)制：HIV對(duì)CD+4細(xì)胞有選擇性的親嗜性。病毒侵入細(xì)胞后，借助反轉(zhuǎn)錄酶合成DNA，與細(xì)胞DNA整合，并利用宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)進(jìn)行生物合成，產(chǎn)生病毒產(chǎn)物，致使宿主細(xì)胞死亡，釋放出大量新病毒，攻擊新的靶細(xì)胞，從而使T4淋巴細(xì)胞數(shù)量不斷減少；正常的T4細(xì)胞，通過(guò)CD+4細(xì)胞結(jié)合病毒與病毒外表蛋白，而被細(xì)胞毒作用T細(xì)胞〔T8〕識(shí)別，進(jìn)而被殺傷。T4淋巴細(xì)胞在免疫應(yīng)答過(guò)程中起調(diào)節(jié)作用，與eq\o\ac(○,1)單核-巨噬細(xì)胞、eq\o\ac(○,2)細(xì)胞毒性T細(xì)胞、eq\o\ac(○,3)NK細(xì)胞、eq\o\ac(○,4)B細(xì)胞等均有密切關(guān)系，所以T4細(xì)胞耗竭、功能下降，必將使免疫系統(tǒng)的多種功能發(fā)生缺陷。3、傳播途徑：性接觸為最主要的傳播途徑；經(jīng)注射途徑、孕婦胎盤(pán)以及破損皮膚等均可造成感染。4、診斷：測(cè)定HIV感染的最簡(jiǎn)便方法是測(cè)定HIV抗體。5、預(yù)防：切斷各種傳播途徑?！彩濉臣顾杌屹|(zhì)炎病毒：〔屬于腸道病毒〕脊髓灰質(zhì)炎病毒屬于小核糖核酸病毒科，腸道病毒屬的病毒，主要經(jīng)過(guò)糞-口途徑傳播。脊髓灰質(zhì)炎病毒進(jìn)入機(jī)體后，主要侵犯脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。目前脊髓灰質(zhì)炎在世界上許多國(guó)家，包括中國(guó)，已經(jīng)消失?！彩晨谔阋卟《荆嚎谔阋卟《緦儆谛『颂呛怂岵《究?、口蹄疫病毒屬，是一種主要感染偶蹄動(dòng)物的烈性傳染病，人和非偶蹄動(dòng)物也可感染，但病癥相對(duì)較輕。口蹄疫一旦發(fā)生那么呈爆發(fā)性流行，可以跳躍式傳播，在適合的氣候條件下還可通過(guò)風(fēng)媒的途徑傳播。人感染口蹄疫病毒后只在口腔黏膜、手、足處皮膚出現(xiàn)水皰，可自愈，個(gè)別嚴(yán)重病例見(jiàn)于兒童。動(dòng)物患口蹄疫后其生產(chǎn)性能急劇下降；對(duì)疫區(qū)要進(jìn)行封鎖，封鎖期間疫區(qū)內(nèi)正常的畜產(chǎn)品交易和生產(chǎn)活動(dòng)都不能進(jìn)行；對(duì)確診為口蹄疫的動(dòng)物要立即捕殺、銷(xiāo)毀。所以口蹄疫爆發(fā)后對(duì)畜、牧、業(yè)生產(chǎn)乃至整個(gè)國(guó)民經(jīng)濟(jì)都會(huì)造成巨大的損失?！彩摺澈粑篮习《荆汉粑篮习《緦儆诟闭巢《究啤⒎尾《緦?。因在組織培養(yǎng)繁殖時(shí)能引起細(xì)胞融合而定為現(xiàn)在的名稱。呼吸道合胞病毒可以引起嬰幼兒產(chǎn)生嚴(yán)重的下呼吸道感染。感染性肺炎病因分類分類舉例細(xì)菌性肺炎〔1〕需氧革蘭染色陽(yáng)性球菌：如肺炎鏈球菌〔肺炎球菌〕、金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌等〔2〕需氧革蘭染色陰性球菌：如肺炎克雷伯桿菌、流感嗜血桿菌、綠膿桿菌、腸桿菌屬、大腸埃希菌、變形桿菌等厭氧桿菌：如棒狀桿菌、梭狀桿菌等病毒性肺炎腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、禽流感病毒、副流感病毒、麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒、漢坦病毒肺綜合征、HendraandNipah病毒、冠狀病毒、Metapeumovius支原體肺炎肺炎支原體引起的肺炎衣原體肺炎肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體真菌性肺炎白色念珠菌、曲菌、放線菌等其他病原體所致肺炎立克次體〔如Q熱立克次體〕、弓形蟲(chóng)〔如鼠弓形蟲(chóng)〕、原蟲(chóng)〔如卡氏肺孢子蟲(chóng)〕、寄生蟲(chóng)〔如肺包蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、肺血吸蟲(chóng)〕、軍團(tuán)菌等。立克次體族的分類DNA生物學(xué)特性補(bǔ)體結(jié)合反響生G+C(基因組)細(xì)胞內(nèi)雞胚培養(yǎng)空斑大小動(dòng)物低可溶性抗原顆粒性外斐fei氏屬物種mol位置滴度頂峰〔形成天數(shù)〕易感抗〔乙醚提取〕抗原反響型%〔溫度〕性力立斑普氏立克次體胞漿0.75mm豚tun不強(qiáng)群特種特OX〔加拿克疹莫氏立克次體29～30〔僅加拿大立瀕bin死〔7～10〕(小豬)鼠異性異性大立克次次傷斑疹傷寒立克次體立克次體可〔35℃體寒加拿大立克次體可在核內(nèi)〕群斑立氏立克次體OX〔小蛛立點(diǎn)西伯利亞立克次體胞漿死后2～3mm豚鼠不強(qiáng)群特種特克次體陰性、派熱康氏立克次體32～33及24～725～8天易感異性異性氏立克次體不明〕群澳大利亞立克次體核小時(shí)小蛛立克次體〔32℃派氏立克次體恙蟲(chóng)恙蟲(chóng)病立克次體？胞漿瀕bin死1mm小鼠脆弱株特種及型OX病群〔35℃〕8～10天柯克QQ熱立克次體或43～45胞漿瀕bin死1mm豚鼠強(qiáng)無(wú)種特異性陰性斯體熱貝氏立克次體空泡〔35℃〕8～10天羅沙戰(zhàn)戰(zhàn)壕熱立克次體或38～39胞外生長(zhǎng)很差細(xì)胞不能較強(qiáng)種特種特陰性利壕五日熱羅沙利馬體培養(yǎng)感染異性異性馬體熱醫(yī)學(xué)微生物知識(shí)第一節(jié)：醫(yī)學(xué)微生物學(xué)總論非細(xì)胞型微生物〔病毒〕：〔1〕是最小的一類微生物，能通過(guò)除菌濾器。〔2〕沒(méi)有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無(wú)產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)增殖?！膊《緦僦吃思?xì)胞型微生物〔細(xì)菌、支原體、立克次氏體衣原體、螺旋體、放線菌〕：〔1〕僅有原始核質(zhì)，系呈裸(luo)露(lou)的環(huán)狀DNA團(tuán)塊(kuai)無(wú)核膜或核仁?！?〕細(xì)胞器不很完善，只有核蛋白體。細(xì)菌的根本結(jié)構(gòu)包括：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、核蛋白體等；細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)包括：菌毛、鞭毛、莢膜等；細(xì)菌可分為自養(yǎng)菌和異養(yǎng)菌；細(xì)菌按形態(tài)不同可分為：球菌、桿菌、螺形菌〔螺菌和弧菌〕。在細(xì)菌的組成中，水為主要成分，而蛋白質(zhì)類在固體成分中的比例最高。核細(xì)胞型微生物〔真菌〕：〔1〕細(xì)胞核分化程度高，有核膜和核仁；〔2〕細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器完整?！舱婢鷮僦场?〕不能在活細(xì)胞內(nèi)內(nèi)生長(zhǎng)增殖。機(jī)體的屏障作用包括：皮膚與粘膜、血腦屏障和胎盤(pán)屏障。毒力主要由侵襲力和毒素所決定。毒素包括：外毒素〔如金黃色葡萄球菌腸毒素、產(chǎn)毒性大腸桿菌腸毒素、白喉毒素、痙攣毒素、肉毒毒素、表皮剝脫毒素、霍亂腸毒素〕和內(nèi)毒素外毒素包括：神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素、和腸毒素；細(xì)菌的內(nèi)毒素為脂多糖成分，均由革蘭陰性菌產(chǎn)生、160℃，2-4小時(shí)才被破壞，其毒害效應(yīng)不具有組織器官選擇性?！捕拘宰饔冒―IC、Shwartzman現(xiàn)象、發(fā)熱反響、白細(xì)胞反響、內(nèi)毒素血癥與內(nèi)毒素休克〕雖毒性作用較弱，但不能像外毒素那樣經(jīng)甲醛脫毒而成為類毒素試驗(yàn)可以用對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的測(cè)定。致病性螺形菌有弧菌如霍亂弧菌，和螺菌如鼠咬熱螺菌。幼齡細(xì)菌菌體較長(zhǎng)，老齡細(xì)菌往往呈多形態(tài)性。第二節(jié)：細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：有些細(xì)菌在一定條件下可以發(fā)生轉(zhuǎn)化而進(jìn)入休眠狀態(tài)，稱為芽孢。其結(jié)構(gòu)和性狀與其繁殖狀態(tài)有明顯不同；還有的細(xì)菌在環(huán)境因素的用下，還可以形成L型。細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖，又稱為粘肽、胞壁質(zhì)。肽聚糖原核型生物細(xì)胞的特有成分。肽聚糖〔1〕是細(xì)胞壁抗胞內(nèi)高滲透壓、〔2〕保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能完整的主體成分、〔3〕凡能破壞肽聚糖分子結(jié)構(gòu)或抑制其合成的物質(zhì)，都有抑菌或殺菌作用。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁：由肽聚糖及穿插于其內(nèi)磷壁酸組成。其中〔1〕肽聚糖不僅曾數(shù)多、含量高，占細(xì)胞壁干重50%-80%；〔2〕而且質(zhì)地致密，是具有高機(jī)械強(qiáng)度的三維空間結(jié)構(gòu)。磷壁酸分為壁磷壁酸和膜磷壁酸兩種。磷壁酸有很強(qiáng)的抗原性，是G+細(xì)菌的重要外表抗原，可用以對(duì)細(xì)菌進(jìn)行血清學(xué)分型。革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁：依次包括肽聚糖、脂蛋白、外膜、類脂A、多糖等成分。還有胞質(zhì)周?chē)g隙。肽聚糖：陰性細(xì)菌的肽聚糖僅1-2層，占細(xì)胞壁干重的10%左右。是疏松薄弱的二維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。脂蛋白：由蛋白和脂質(zhì)組成，連接于外膜與肽聚糖之間。脂蛋白是陰性細(xì)菌含量最高的蛋白質(zhì)，其功能是穩(wěn)定外膜并將之固定于肽聚糖層。外膜：外膜是陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁特有成分，約占細(xì)胞壁干重80%。外膜由平行排列的脂質(zhì)雙層構(gòu)成，其內(nèi)鑲嵌以具有不同功能的多種特異性蛋白；外膜還有性菌毛、噬菌體的受體。脂多糖〔LPS〕:〔稱為內(nèi)毒素〕：是細(xì)胞壁外膜伸出于細(xì)胞外表的特殊結(jié)構(gòu)，由類脂A、核心多糖和特異性多糖組成。LPS對(duì)動(dòng)物具有強(qiáng)烈毒性作用。LPS牢固地結(jié)合在細(xì)菌細(xì)胞外表，只在菌體溶解時(shí)才釋放，故稱為細(xì)菌內(nèi)毒素。類脂A：類脂A耐熱，是內(nèi)毒素的主要成分和毒性部位類脂A無(wú)種屬特異性，各種細(xì)菌的類脂A都相同，故不同細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素的毒性作用均相似。核心多糖：位于類脂A的外層，具有屬特異性，同一屬的細(xì)菌其核心多糖的組成是相同的。特異性多糖：具有抗原性，G細(xì)菌的菌體抗原〔O抗原〕細(xì)胞膜：細(xì)胞膜由平行排列的脂質(zhì)雙層組成，其內(nèi)鑲嵌以多種蛋白和少量多糖；細(xì)胞膜的主要功能：〔1〕物質(zhì)納泄：細(xì)胞膜具有選擇性通透作用，可選擇性地?cái)z取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝產(chǎn)物。物質(zhì)納泄是細(xì)胞膜的主動(dòng)運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程，其中載體蛋白和酶類物質(zhì)起重要作用。〔2〕生物合成：細(xì)胞膜上有多種合成酶，是細(xì)菌細(xì)胞生物合成重要場(chǎng)所。肽聚糖、磷壁酸、磷脂、脂多糖、莢膜、鞭毛等多種菌體成分，都是在細(xì)胞膜上合成的?！?〕呼吸作用：細(xì)胞膜上有多種呼吸酶，包括細(xì)胞色素和一些脫氫酶，可以運(yùn)轉(zhuǎn)電子完成氧化磷酸化，參與細(xì)胞呼吸過(guò)程，與能量的產(chǎn)生、貯〔zhu〕存和利用有密切關(guān)系?！?〕形成中介體：中介體是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)陷、折疊、卷曲形成的囊狀結(jié)構(gòu)。多見(jiàn)于G+細(xì)菌。細(xì)胞質(zhì)：是由細(xì)胞膜包裹著的溶膠性物質(zhì)，其根本成分是水、蛋白質(zhì)、核酸、脂類、少量糖和無(wú)機(jī)鹽等。用光鏡和電鏡觀察細(xì)胞質(zhì)，大小不等的顆粒。核糖體：核糖體是游離于細(xì)胞質(zhì)中的微小顆粒，當(dāng)mPNA連成多聚核糖體時(shí)，就成為蛋白質(zhì)的合成場(chǎng)所。核質(zhì)：細(xì)菌的遺傳物質(zhì)是由裸露的雙股DNA盤(pán)旋、盤(pán)繞、卷曲而成的松散網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，無(wú)組蛋白包饒、無(wú)核膜、無(wú)核仁，故稱為核質(zhì)或擬核。核質(zhì)具有細(xì)胞核功能，決定細(xì)菌性狀和遺傳特征。質(zhì)粒：質(zhì)粒是核