高效液相色譜法對丹參中丹參酮ⅡA,丹參酮Ⅰ

高效液相色譜法對丹參中丹參酮IIA,丹參酮I和

隱丹參酮的同時測定摘要 本實驗采用高效液相色譜法對中藥材丹參中丹參酮IIA,丹參酮I和隱丹參酮三種成分采用外標(biāo)定量法進行同時測定，根據(jù)其色譜圖相應(yīng)保留時間的譜峰與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比，可知其三種成分在該樣品中的含量，通過測定可知樣品中丹參酮IIA，丹參酮I和隱丹參酮三種成分的百分含量分別為 0.1011%、0.0259%、0.0155%。關(guān)鍵詞HPLC丹參參酮IIA丹參酮I隱丹參酮外標(biāo)法1、引言丹參酮IIA、丹參酮I和隱丹參酮是從唇形科鼠尾草屬植物丹參的根部提取的脂溶性二萜類物質(zhì)。其分子結(jié)構(gòu)、分子式、分子量如下:H3c CH3H3c CH3OIIOC18H12O3 294.33CH3C18H12O3 刃6.29C19H20O3296.36丹參酮IIA丹參酮丹參酮IIA丹參酮I隱丹參酮本實驗將采用高效液相色譜法對丹參中的三種脂溶性提取物（丹參酮IIA、丹參酮I、隱丹參酮）進行同時測定。高效液相色譜分析包括兩種洗脫方式：等度洗脫和梯度洗脫。梯度洗脫又稱為梯度淋洗或程序洗提，即在分離過程中使兩種或者兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變他們之間的比例，從而使流動相的強度、極性、pH值或離子強度相應(yīng)地變化，達到提高分離效果，縮短分離時間的目的。梯度洗脫可以使一個復(fù)雜樣品中性質(zhì)差異較大的組分,都能在各自適宜的分離條件（容量因子k適宜）下實現(xiàn)分離。色譜定量分析的依據(jù)是各分析組分的質(zhì)量或者濃度與檢測器的響應(yīng)信號（色譜圖上表現(xiàn)為峰面積A或峰高h）成正比，即m=f錯誤！未找到引用源。A（f稱為定量校正因子）。色譜法中常用的定量分析方法有歸一化法，內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法。外標(biāo)法是應(yīng)用待測組分的純物質(zhì)來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，即配置不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)（濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取固定量標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣分析，從所得的色譜圖上測出響應(yīng)信號（峰高或峰面積），然后繪制峰高或峰面積對含量（質(zhì)量或濃度）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本實驗采用反相化學(xué)鍵合相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合相為固定相，0.1%磷酸溶液-甲醇為流動相分離丹參中脂溶性提取物，并通過外標(biāo)法對三種待測物質(zhì)進行定量分析。當(dāng)組分在固定相和流動相間進行分配時，極性大的物質(zhì)在流動相中的溶解度較大，而極性小的物質(zhì)在流動相中的溶解度較小，組分的流出順序是極性大的化合物在前，極性小的化合物在后，最終實現(xiàn)各物質(zhì)的分離。2、實驗部分2.1實驗儀器與試劑日本島津LC-20A高效液相色譜儀（配備SPD-20A紫外檢測器、SIL-20A自動進樣器、LC-20AB輸液泵、CTO-10AS柱溫箱、脫氣機）、色譜柱：DiamonsilC18柱（150mmx4.6mm，5pm）、電子天平、超聲波清洗儀、溶劑過濾器、微孔濾膜（0.45pm，無機相和有機相）、50ml具塞三角瓶、25.00mL移液管、定量濾紙、漏斗、漏斗架、一次性針筒過濾器（脂溶性）、微量注射器。丹參酮IIA標(biāo)準(zhǔn)品，丹參酮I標(biāo)準(zhǔn)品，隱丹參酮標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇（色譜純），乙醇（分析純），磷酸（分析純），超純水，丹參粉末。2.2實驗方法2.2.1前處理精密稱取0.20i0g干燥的樣品粉末，置于具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入25.00mL80%乙醇，稱重，超聲提取25min，補重，搖勻過濾，得到待測液。2?2?2譜條件■1.色譜柱：C]8柱（150mmx4.6mm,5pm）2.流動相：泵A： 0.1%磷酸水溶液；泵B：甲醇泵B濃度：0?40min，70%?75%；40~45min，75%

流速：0.8mL/min3.紫外檢測器：測定波長254nm柱溫箱:30°C進樣量：10“L3、結(jié)果與討論3?1實驗結(jié)果色譜圖如下圖所示: LC16000014000012000010000080000-響應(yīng)-60000-40000-20000-0-10 20 30 40時間50-2000010 20 30 40時間503.2結(jié)果分析實驗結(jié)果如上圖所示，在保留時間分別為23.033min、24.667min、38.5min時，分別出現(xiàn)了隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA的相應(yīng)色譜峰，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比，由于進樣量為 10uL，得出其含量分別為0.0125ug/10uL、0.0209ug/10uL、0.0813ug/10uL，已知原始樣液為25mL，則可計算出樣品中三種成分的含量：31.2