圖1高效液相色譜儀的系統(tǒng)流程圖原理VIP

高效液相色譜儀制作人：何朦朦組員：沈夏潔周天逸吳方威

高效液相色譜儀的原理原理基本結構特點應用使用注意事項高效液相色譜儀的系統(tǒng)流程圖如圖1所示。圖1高效液相色譜儀的系統(tǒng)流程圖原理優(yōu)點應用使用注意事項由流程圖可以看出系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)

內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來?；窘Y構原理優(yōu)點應用使用注意事項基本結構混合物中各組分在固定相和流動相之間會發(fā)生吸附、溶解或其他親和作用，這種作用存在差異，從而使各組分在色譜柱中的遷移速度不同得到分離石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱高效液相色譜儀的基本結構原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項貯液器脫氣器高壓泵進樣器色譜柱檢測器原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項貯液器是用于存放溶劑的裝置。貯液器中的溶劑必須很純，貯液器材料要耐腐蝕，對溶劑呈惰性，一般情況下通常采用1升~2升的大容量玻璃瓶，也可采用不銹鋼制成的容器，貯液器應配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進入泵內(nèi)，溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，孔隙大小一般為2μm。貯液器原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項脫氣的目的是為了防止流動相從高壓柱內(nèi)流出時釋放出氣泡進入檢測器而使噪聲劇增，至使不能正常檢測，一般情況下通常采用氦氣鼓泡來驅除流動相中溶解的氣體，因為氦氣在各種液體中的溶解度極低，所以必須先用氯氣快速清掃溶劑數(shù)分鐘，然后再使氦氣以極小流量不斷流過此溶劑。脫氣器原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項泵應耐壓、耐腐蝕、密封性好。高壓泵主要用于輸送流動相，其壓力一般為幾兆帕至數(shù)十兆帕。這是液體的黏度比氣體大100倍，同時由于固定相的顆粒極細，柱內(nèi)壓降大，為保證一定的流速，必須借助高壓迫使流動相通過柱子。高壓泵應無脈動或脈動極小，以保證輸出的流動相具有恒定的流速，同時采用脈動阻尼裝置可將產(chǎn)生的脈動除去，使流動相的流量變動范圍不宜超過2%~3%。高壓泵主要分為恒壓泵、恒流泵和螺旋傳動注射泵三類。高壓泵原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項高效液相色譜儀進樣器普遍使用高壓進樣閥，用微量注射器將樣品注入樣品環(huán)管，使用的樣品環(huán)管分別有不同的尺寸，可根據(jù)分析要求選用。當進樣閥手柄放在吸液位置時，流動相直接通過孔的通路流向色譜柱，樣品通過注射器從另外的位置進入樣品環(huán)管，如果有過量的樣品則會從出口孔排出，然后將手柄轉到進樣位置，此時流動相便將樣品帶進了柱子。進樣器原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項色譜柱是整個色譜系統(tǒng)的心臟，它的質量優(yōu)劣直接影響到分離的效果，一般情況下色譜柱通常采用優(yōu)質不銹鋼管制成，并且柱內(nèi)壁必須光潔平滑，否則內(nèi)壁的縱向溝痕和表面多孔性也會引起譜帶的展寬，柱接頭的體積應盡可能小，柱長一般為10cm~25cm，內(nèi)徑4mm~5mm。若使用直徑為5μm~10μm固定相顆粒，理論塔板可達到5×104/m。尺寸排阻色譜柱的內(nèi)徑通常大于5mm，制備色譜柱則會更大；為了減少溶劑用量，可采用微徑柱，內(nèi)徑為1mm，長度為30mm~75mm，若采用3μm顆粒，理論塔板數(shù)高達1×105/m。為了保護分析柱不被污染，有時需在分析柱前加一短柱，約數(shù)厘米長，此柱稱為衛(wèi)柱，為了防止衛(wèi)柱過分增加柱阻力，在衛(wèi)柱中使用的顆粒大小約為10μm~30μm色譜柱原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項高效液相色譜儀常用的檢測器有紫外吸收、示差折光率、熒光和安培檢測器等，對它們的要求和性能指標與氣相色譜檢測儀基本相同。檢測器主要分為紫外吸收檢測器、熒光檢測器和示差檢測器。檢測器高效液相色譜儀的優(yōu)點原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項高壓——壓力可達150～300kg/cm2。色譜柱每米降壓為75kg/cm2以上。高速——流速為0.1～10.0mL/min。高效——塔板數(shù)可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種。高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：

速度快——通常分析一個樣品在15～30min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。

分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。

色譜柱可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。高效液相色譜儀的應用原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項

高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。與試樣預處理技術相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。

HPLC成為解決生化分析問題最有前途的方法。因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。

液相色譜-質譜連用技術受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快,如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發(fā)烴類,使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。高效液相色譜儀的使用注意事項原理基本結構優(yōu)點應用使用注意事項1熟悉設備2設備易出現(xiàn)的問題3正確的實驗步驟4其他應注意的問題1熟悉設備完全的了解設備可以避免因操作失誤而導致儀器損壞，有利于對儀器進行保養(yǎng)，高效液相重在保養(yǎng)。新購入設備，廠家的技術人員負責進行安裝、調試，這時候，負責高效液相檢驗的化驗員最好選擇一種藥物，進行完整的演練，這樣印象深刻，省得以后的很多不確信。另外，最好在調試的時候由化驗員自己重新安裝一下工作站，因為在以后的工作中可能會損壞工作站，到時候再打電話咨詢就很難說得明白了，并且最好完整記錄下安裝的步驟。2設備易出現(xiàn)的問題高效液相色譜儀主要由四大部分組成：柱溫箱(包括進樣閥)、高壓輸液泵、檢測器、工作站。（1）柱溫箱及進樣閥容易出現(xiàn)的問題是：溫控儀失靈，不能正確控制柱溫箱的溫度，這時只要更換一下溫控儀就可以了，溫控儀只在各樣品系統(tǒng)適用性試驗中有溫控要求時應用，如果無要求，就不必開啟；漏液，如發(fā)現(xiàn)對照品和樣品的出峰時間都不規(guī)律，而且每次的出峰面積也差別很大，根本無法對樣品進行定性和定量，這時候需要檢查色譜柱和各金屬細管的連接處，可能是連接處的塑料套因連接時未按要求而變形了，因其一旦變形就沒法修復，所以換一個新的，按要求套上即可。（2）高壓輸液泵容易出現(xiàn)的問題是：①壓力升不上去：檢查一下桌面上是否有漏下的液滴，如果有擰緊漏液處即可。②壓力過高：看一下抽取流動相的塑料管里是否有氣泡，如果有，則按一下Stop，這時候千萬別抽氣泡，等壓力降下來，最好到0Psi，這時候抽出氣泡。如果在過高的壓力下抽氣泡，后果會非常嚴重，流通池會被鼓破，無法分析樣品，并且會給你帶來很多困惑，當然如果有經(jīng)驗的話會及時發(fā)現(xiàn)，因為流通池破了后會流出藍色的墨水樣的液體。（3）檢測器容易出現(xiàn)的問題：①流通池：以上已經(jīng)提過了，如果流通池破了，則需要及時更換。②氘燈：氘燈的壽命一般為2000h，如果檢測器打不開了，則說明氘燈超過其使用期限，需要更換了。在日常檢測中，一般在進樣品之前開啟檢測器，樣品分析完畢，及時關閉檢測器，這樣可以延長其使用年限，避免不必要的浪費。（4）工作站容易出現(xiàn)的問題：安裝工作站的電腦一般不要進行其他的工作，一旦出現(xiàn)問題，則需重新安裝。3正確的實驗步驟實驗步驟包括樣品的處理和流動相的配制。（1）樣品的配制：嚴格按照樣品質量標準配制，樣品最好現(xiàn)配先做，不要擱置，以防樣品分解，導致含量變小。（2）流動相的配制：流動相最好現(xiàn)配先用，尤其含鹽量高的流動相。流動相的抽濾需要注意：如果流動相中含有機溶劑，則需要用有機系濾膜，若使用水系濾膜，則濾膜會被溶解入流動相，流動相只能廢掉。如果流動相不含有機溶劑則需要用水系濾膜，若用有機