DB13-T1415-2011魚類寄生蟲性疫病診斷技術(shù)規(guī)程

ICS65.150

B52

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T1415—2011

魚類寄生蟲性疫病診斷技術(shù)規(guī)程

Diagnosisprotocalforparasiteepidemicsoffish

DB13/T1415—2011

魚類寄生蟲性疫病診斷技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了魚類寄生蟲性疫病即小瓜蟲病、刺激隱核蟲病、粘孢子蟲病、三代蟲病、指環(huán)蟲病的

診斷技術(shù)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于小瓜蟲病、刺激隱核蟲病、粘孢子蟲病、三代蟲病、指環(huán)蟲病的診斷。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

OIE《水生動物疾病診斷手冊》

3通則

3.1材料和試劑

3.1.1材料

普通光學(xué)顯微鏡、雙筒解剖鏡、放大鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術(shù)刀、手術(shù)剪、解剖針、吸水

紙、培養(yǎng)皿、滴管、解剖盤等。

3.1.2試劑

0.85％生理鹽水、30‰人工配制海水、4％～5%和10％的福爾馬林、70％酒精、硝酸銀、甘油膠胨、

肖氏液、聚乙烯醇。

配置試劑用水應(yīng)符合GB/T6682的要求。

3.2采樣量

用于檢查診斷的魚應(yīng)有一定數(shù)量，檢查時采集的樣品至少5尾~10尾。也可按照OIE《水生動物疾病

診斷手冊》的采樣方法進(jìn)行采樣，見附錄A。

3.3樣品及運輸

用于實驗室檢查的病魚應(yīng)是活體，運輸時應(yīng)在采集的病魚中加注原池水進(jìn)行活體運輸。每個容器只

裝運同一種病魚送至實驗室。運輸過程中應(yīng)采取充氧、降溫等措施。

3.4病原體記數(shù)

按不同感染部位采集組織，進(jìn)行觀察。記錄顯微鏡檢查時的倍數(shù)和該倍數(shù)下的蟲體數(shù)量。孢囊用數(shù)

字說明，蟲體數(shù)為同一玻片中3個視野的平均數(shù)。

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DB13/T1415—2011

4小瓜蟲病

4.1病原種類特征

見附錄B。

4.2現(xiàn)場樣品目檢

檢查魚體。病魚體色發(fā)黑，消瘦，游動異常，體表或鰓上可見1mm左右的小白點，病情嚴(yán)重時，

魚體表伴大量粘液，用鑷子刮下白點或粘液，放在解剖盤上，滴一滴生理鹽水，靜置1min～2min，

在光亮的地方仔細(xì)觀察，如果見到一個個白色小圓球在慢慢地游動，且大多數(shù)集中在水滴的邊緣，根據(jù)

上述的癥狀可以初步確診。

4.3實驗室檢測及標(biāo)本保存

4.3.1體表

用解剖刀刮取體表兩側(cè)粘液，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，用鑷子將組織粘液分散，蓋上蓋玻

片，用拇指輕輕壓片，在顯微鏡或解剖鏡下檢查。

4.3.2鰭

目檢正常的魚，剪下各鰭，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，解剖鏡下檢查。

目檢魚體各鰭如有潰爛或白點，用鑷子刮取潰爛或白點部位，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，用

蓋玻片蓋上輕壓，解剖鏡或顯微鏡下檢查。

4.3.3鰓

用剪刀將左右兩邊的鰓完整地取出，放在培養(yǎng)皿里（要分開放置），并附上左右標(biāo)記。剪取一小塊

鰓組織（應(yīng)從每一邊鰓的第一片鰓片接近兩端的位置剪?。?，放在載玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋

玻片輕壓，在解剖鏡或顯微鏡下檢查。

如鰓上肉眼可見白點或孢囊，則用鑷子刮取白點或孢囊，或取整片鰓絲壓片，顯微鏡下檢查。

4.3.4蟲體收集保存

見附錄C。

4.4結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)小瓜蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定為小

瓜蟲??；小瓜蟲計數(shù)不足10個時，判定為小瓜蟲感染。

5刺激隱核蟲病

5.1病原種類特征

見附錄B。

5.2現(xiàn)場樣品目檢

滴加試劑為30‰人工配制海水，其他步驟同4.2。

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DB13/T1415—2011

5.3實驗室檢測及標(biāo)本保存

診斷時滴加試劑為30‰人工配制海水，其他步驟同4.3。

5.4結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)刺激隱核蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定

為刺激隱核蟲??；刺激隱核蟲計數(shù)不足10個時，判定為刺激隱核蟲感染。

6粘孢子蟲病

6.1病原種類特征

見附錄B。

6.2現(xiàn)場樣品目檢

粘孢子蟲的多數(shù)種類，寄生于魚的體表、鰓、腸道及體腔，都表現(xiàn)出肉眼可見的癥狀，即白點狀或

白色的瘤狀孢囊，孢囊形狀和大小不規(guī)則，顏色灰白而不透明。用鑷子取下一個孢囊放在載玻片上，滴

一滴生理鹽水，用蓋玻片蓋上輕壓，如孢囊破裂并流出乳白色液體，可初步診斷為粘孢子蟲病。

6.3實驗室檢測及標(biāo)本保存

6.3.1鏡檢

在400倍顯微鏡下，壓破的孢囊液體中清晰可見孢子，可診斷為粘孢子蟲病。一個孢囊中有成千上

萬個孢子蟲。

6.3.2體表

檢查體表，用解剖刀刮取鱗片下的瘤狀物，置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，顯

微鏡下檢查。

6.3.3鰭

檢查方法參見4.3.2，鏡檢倍數(shù)為400倍。

6.3.4鰓

檢查方法參見4.3.3，鏡檢倍數(shù)為400倍。

6.3.5體腔

打開魚體腹腔，仔細(xì)觀察顯露出的部位有無可疑病變。如發(fā)現(xiàn)白點，或較大孢囊，有可能是粘孢子

蟲寄生。用鑷子刮取白點部位或孢囊置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，見孢囊破裂后，

顯微鏡下檢查。

6.3.6腸道

將腸道外壁上所有脂肪去除干凈，把腸前后伸直擺在解剖盤上。將腸分為前、中、后三段，各取一

段，用剪刀從與腸平行的方向剪開一個小小切口，用鑷子從切口上取一小滴內(nèi)容物放在載玻片上，滴一

滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，顯微鏡下檢查，每段同時檢查兩片標(biāo)本。

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DB13/T1415—2011

剪開腸道后，如見白點或孢囊附著，直接用解剖刀刮取白點或孢囊于在載玻片上，壓片后，顯微鏡

下檢查。

6.3.7蟲體收集保存

見附錄C。

6.4病原體記數(shù)及結(jié)果判定

6.4.1病原體記數(shù)

6.4.1.1計數(shù)符號用“+”表示：“+”表示有；“++”表示多；“+++”表示很多。

6.4.1.2高倍顯微鏡400倍一個視野下，有1個～20個蟲體時記“+”，21個～50個蟲體時記“++”，

50個以上的蟲體時記“+++”。

6.4.2結(jié)果判定

檢出粘孢子蟲則判定為粘孢子蟲病。

7三代蟲病

7.1病原種類特征

見附錄B。

7.2現(xiàn)場樣品目檢

當(dāng)蟲體大量寄生時，病魚體表可見一層灰白色的粘液，魚體失去光澤，游動極不正常。

7.3實驗室檢測及標(biāo)本保存

該病不會出現(xiàn)白點或孢囊，無須此步檢測。其他步驟參見4.3。

7.4結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)三代蟲計數(shù)達(dá)到5個及5個以上時，判定為三代

蟲病；三代蟲計數(shù)不足5個時，判定為三代蟲感染。

8指環(huán)蟲病

8.1病原種類特征

見附錄B。

8.2現(xiàn)場樣品目檢

同7.2。

8.3實驗室檢測及標(biāo)本保存

同7.3。

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DB13/T1415—2011

8.4結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)指環(huán)蟲計數(shù)達(dá)到5個及5個以上時，判定為指環(huán)

蟲?。恢腑h(huán)蟲計數(shù)不足5個時，判定為指環(huán)蟲感染。

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DB13/T1415—2011

AA

附錄A

（資料性附錄）

采樣數(shù)量

表A.1檢疫采樣數(shù)量表

魚群大小2％感染率時取樣5％感染率時取樣10％感染率時取樣

50503520

100754523

2501105025

5001305526

10001405527

20001456027

40001456027

100001456027

100000或以上1506030

注：檢疫采樣應(yīng)采集全部實驗室樣品。

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DB13/T1415—2011

BB

附錄B

（資料性附錄）

病原種類特征

B.1多子小瓜蟲

B.1.1成蟲期

蟲體一般呈卵形或球形，大小(350～800)μm×(300～500)μm，胞口在接近前端的腹面上。大核香

腸狀或馬蹄狀，小核緊帖大核上，細(xì)胞質(zhì)有很多小的伸縮泡和一些食物粒。

B.1.2幼蟲期

身體一般呈橢圓形，隨著發(fā)育時間的延長身體逐漸變長，變成扁鞋底狀，在前端有一乳頭狀突起，

叫鉆孔器，前端較圓，除身體后端有1根特長的尾毛外，周身長著長短一致的纖毛。在腹面稍前的位置，

有1個近似“6”字形的小胞口。在身體前半部有一個大的伸縮泡。

B.1.3包囊期

離開魚體的蟲體或越出囊泡的蟲體，可作3h～6h的游泳，然后沉入水底的物體上，靜止之后，分

泌一層膠質(zhì)厚膜將蟲體包圍即是包囊。包囊圓形或橢圓形，白色透明。

B.2刺激隱核蟲

B.2.1寄生滋養(yǎng)體

成熟的蟲體呈球形或卵圓形，直徑約300μm～500μm，顯微鏡下常呈乳白色，體被纖毛，表面有

脊?fàn)钔黄?，胞口位于身體的前端，體內(nèi)有4個～8個卵圓形團(tuán)塊連接成“Ｕ”字形排列的念珠狀大核。蟲

體會隨運動改變形狀。

B.2.2胞囊

蟲體從宿主體表脫落后，纖毛退化，表面的脊?fàn)钔黄鹱兤?，形成厚壁胞囊，大小?4.5μm×170

μm～252μm×441μm。

B.2.3幼蟲

卵圓形或紡錘型，前端稍尖，大小為20μm×30μm～50μm×70μm，其形態(tài)大小隨地域、宿主種

類和溫度的不同而有所變化。

B.3粘孢子蟲

主要致病種類有：

B.3.1變異粘體蟲（M.variaAchmerovNie&Lee,1964)

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DB13/T1415—2011

營養(yǎng)體外觀不規(guī)則，大小不一。成熟孢子殼面觀為橢圓形，前端較后端寬或鈍圓。后端殼緣光滑，

或有4～5個V形皺褶。極囊2個，梨形或卵圓形，大小相等，平行排列于前方，約占孢子長的1/2。少數(shù)

極囊不等，斜向排列于前。極絲在極囊內(nèi)盤繞5～9圈。孢中質(zhì)有圓形胚核2個。無嗜碘泡。頂面觀紡錘

形?？p面觀亦為紡錘形，縫脊直或稍彎曲。孢子長9μm～13μm，寬6μm～8.5μm。孢囊形狀大小不

一，有橢圓形、扇形塊狀、長條形或分枝不規(guī)則等。

B.3.2中華粘體蟲（M.sinensisNie&Lee,1964)

成熟的孢子圓形，前方稍尖，后方鈍圓，縫脊直。兩個梨形極囊同等大小。無嗜碘泡。感染的魚腸

道內(nèi)壁或外壁形成乳白色芝麻狀孢囊。

B.3.3鰱碘泡蟲（M.drjagini）(1954)(Schulman,1962)

營養(yǎng)體直徑4.8μm～16.0μm.。孢子殼面觀橢圓或倒卵形，前寬而后稍狹。殼面光滑或有4～5個V

形的褶皺，囊間有明顯V形小塊。孢子長12.3μm，寬9.0μm。極囊2個，梨形，通常大極囊傾斜地位于

孢子前方。

B.3.4餅形碘泡蟲（M.artuaAchmerov,1960)

孢囊白色，圓形或橢圓形，長42μm～89.2μm，寬31.5μm～73.5μm。孢子殼面觀為圓形，縱軸

小于橫軸，孢子后方有不甚明顯的褶皺?？p面觀紡錘形。孢子長4.8μm～6.0μm。2個卵圓形的極囊大

小相等，呈八字形排列。

B.3.5異型碘泡蟲（M.disparTheolohan,1895)

孢子橢圓形，縫脊直而明顯，兩個梨形極囊大小不等，彼此有一定間隔，有一個明顯的嗜碘泡。孢

囊大小為29.7μm～39.2μm×195.8μm～230μm。

B.3.6鯪單極蟲（T.rohitae）(Southwell&Prashad,1918)

著生于魚體鱗片下，白色或蠟黃色，孢囊大小形狀不一，有圓形、橢圓形、長方形或多角形，其長

可達(dá)32mm，短的有5mm。孢子長29.8μm～35μm，寬7μm～12.3μm，極囊長19μm～25μm，寬為

7μm，呈長卵形，約占孢子長的1/3～1/2。嗜碘泡1個。孢子外面常被有一層無色透明的薄膜。

B.4三代蟲

主要致病種類有：

B.4.1鰱三代蟲（G.hypopthalmichthysiLing）

主要寄生于鰱、鳙的皮膚、鰭、鰓及口腔。無眼點，體長0.32mm～0.51mm，寬0.07mm～0.14mm

前端有頭器1對。后吸器上的8對邊緣小鉤排列呈傘狀，中央大鉤1對，2片聯(lián)結(jié)片?？谠谏眢w前端腹面，

呈管狀或漏斗狀。咽由16個大細(xì)胞構(gòu)成，葫蘆狀。食道很短，腸支伸至體后的4/5處。睪丸位于體后部

中間。交配囊卵圓形，由1根大而彎曲的大刺和8根刺組成。卵巢單個，呈新月形，在睪丸之后。

B.4.2秀麗三代蟲（G.eleganseNordmann）

主要寄生于鯉、鯽及金魚。無眼點，在蟲體的中部，可見到胚胎，有時甚至可見到“連續(xù)四代”在

一起。

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DB13/T1415—2011

B.4.3鯇三代蟲（G.ctenopharyngodontisLing）

主要寄生于草魚皮膚和鰓上。無眼點，蟲體較大，為0.33mm～0.57mm×0.09～0.15mm，兩端

的前緣常各具有一尖刺狀的突起。

B.5指環(huán)蟲

指環(huán)蟲屬的主要特征：后吸器具7對邊緣小鉤，1對中央大鉤。聯(lián)結(jié)片存在，輔助片存在或缺失。體

前端具眼點2對，具貯精囊，前列腺儲囊1對。主要致病種類有：

B.5.1頁形指環(huán)蟲（DactylogyruslamellatusAchmerov）

主要寄生于草魚鰓、皮膚和鰭。蟲體扁平，大小為0.192mm～0.529mm×0.072mm～0.136mm，

具眼點及頭器各2對。

B.5.2鳙指環(huán)蟲（DactylogyrusaristichthysLong&Yu）

主要寄生于鳙魚鰓部。具7對邊緣小鉤，中央大鉤基部較寬，內(nèi)外突明顯。聯(lián)結(jié)片略呈倒“山”字

形，輔助片稍似菱角狀，左右兩部分較細(xì)長。

B.5.3小鞘指環(huán)蟲（DactylogyrusvaginulatusTchang&Niu）

主要寄生于鰱魚鰓上，為較大型的指環(huán)蟲，可達(dá)0.98mm～1.4mm×0.233mm～0.344mm。中央

大鉤粗壯，全長0.054mm～0.066mm。

B.5.4壞鰓指環(huán)蟲（DactylogyrusvastatorNybelin）

主要寄生于鯉魚、鯽魚、金魚的鰓絲。聯(lián)結(jié)片單一，呈“一”字行。

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DB13/T1415—2011

CC

附錄C

（資料性附錄）

蟲體標(biāo)本收集方法及保存

C.1小瓜蟲、刺激隱核蟲

C.1.1用4％～5％福爾馬林保存帶有蟲體的組織。

C.1.2制備干片保存：將有病原體的含有物涂在載玻片上，空氣中干燥后進(jìn)行染色（硝酸銀

法染色），用以觀察蟲體的纖毛線。

C.2粘孢子蟲

C.2.1把孢囊取出，壓破，或取出內(nèi)含物，用蓋片涂抹法涂片，用肖氏液固定。

C.2.2用4％～5％福爾馬林保存孢子或孢囊。

C.2.310％福爾馬林固定保存病變組織。

C.2.4用甘油膠胨保存孢子。即把孢子放在載破片上的中間位置，水分盡量少帶，然后用小

解剖刀或小鑷子取一小塊甘油膠胨放在有孢子的位置上面，把載玻片放在酒精燈的火焰上稍微

加熱，待甘油膠胨完全溶解后，即蓋上蓋玻片，并輕輕壓平，平放在桌上，使其在空氣中干燥

即可。

C.3三代蟲、指環(huán)蟲

C.3.1解剖鏡下從鰓片上找到蟲體，用針挑出，再用吸管吸取，置于盛有蒸餾水的器皿里，

用甘油膠胨或聚乙烯醇把蟲體封固或者放入4％福爾馬林中固定保存。

C.3.2將鰓組織完整剪下，放入4％～5％福爾馬林中固定保存。

_________________________________

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DB13/T1415—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省水產(chǎn)局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治監(jiān)測總站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張志華、侯金良、李同慶、康辰香、孫偉彬、石潔卿、馬瑞欣、邵鐵凡、寇景

蓮。

I

DB13/T1416.4—2011

表3（續(xù)）

檢測項目收集器具采樣（測量）儀器接觸限值（mg/m3）樣品保留期限

PC-TWA20

氨大型氣泡吸收管空氣采樣器：500mL/min當(dāng)天

PC-STEL30

電離輻射----------X，γ輻射儀；α，β表面劑量儀劑量當(dāng)量率限值--

9

DB13/T1416.5—2011

表4木制家具行業(yè)職業(yè)危害因素檢測采樣點設(shè)置

重點危害崗位采樣點設(shè)置采樣工種檢測項目

坯料與機(jī)械加工工序：機(jī)加工車間（包括電鋸、圓鋸機(jī)、拼板機(jī)、冷壓

木粉塵

開料、鋸料、拼板、冷壓、熱壓、刨切、機(jī)、熱壓機(jī)、刨切機(jī)、排鉆、開槽機(jī)、劃槽機(jī)、機(jī)加操作工

噪聲

雕刻、銑型、鉆孔、劃槽、修邊、封邊鏤銑機(jī)、封邊機(jī)、雙端開榫機(jī)等設(shè)備）

磨砂工序：手砂、機(jī)砂砂光機(jī)、手砂房磨砂工噪聲、木粉塵、其他粉塵

高溫、噪聲、苯、苯胺、甲苯二異氰酸酯、甲醛、

涂飾工序：調(diào)漆房、底漆房、面漆房、色漆房、凈化干燥室、

調(diào)漆工、噴漆工、烘干工等甲苯、二甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、正己烷、

調(diào)漆、著色、噴漆、晾漆、烘干輥淋機(jī)

重金屬（可溶性鉛）等

涂膠貼面貼面崗位、熱壓機(jī)、冷壓機(jī)、剪切機(jī)、特注機(jī)貼面工、涂膠工等高溫、噪聲、甲醛、乙酸乙酯、乙酸丁酯等

面板清潔面板清潔崗位面板清潔工