專題一 獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價課件

專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價一般毒性試驗:

急性毒性試驗亞慢性毒性試驗

長期毒性試驗

特殊毒性試驗:

“三致”試驗致畸、致突變、致癌1專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價第一節(jié)一般毒性試驗一、急性毒性試驗(1)經(jīng)口或注射給藥的急性毒性試驗(2)經(jīng)皮給藥的急性毒性試驗?zāi)康模海?）求出受試物的半數(shù)致死量（LD50）。（2）闡明受試物急性毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系與中毒特征，為急救治療措施提供依據(jù)。（3）為受試物的毒性作出初步判斷，為其它毒性試驗設(shè)計提供依據(jù)。2專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價經(jīng)口或注射給藥的急性毒性試驗1.動物小鼠（體重18～22g）、大鼠（體重180～200g）或其他敏感動物。應(yīng)注明動物的品系。每組小鼠不少于10只、大鼠不少于6只，雌雄各半，雌性應(yīng)未產(chǎn)無孕。2.供試藥物的配制一般用水為溶劑,將藥物配成一定濃度的溶液.3專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

3.給藥方式與最大體積

灌胃法:一次最大灌胃量1.0ml/只(小鼠)4.0ml/只(大鼠)

腹腔注射:一次最大注射量1.0ml/只(小鼠)3.0ml/只(大鼠)4.劑量與分組預(yù)試驗全部致死的最小劑量LD100和全部存活的最大劑量LD0正式試驗5-7個劑量組,組間劑量呈等比級數(shù),其比值為1.2-1.4.4專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

5.觀察指標

動物一般健康狀況，中毒表現(xiàn)和死亡過程。時間：7天。死亡動物：大體剖檢、病理組織學(xué)檢查（必要時）6.LD50計算

寇氏法計算供試藥的LD50值及其95%可信限范圍。7.結(jié)果判定

大鼠一次經(jīng)口LD50在1mg/kg以下為極毒，1～50mg/kg為劇毒，50～500mg/kg為中等毒，500～5000mg/kg為低毒，5000

mg/kg以上者為實際無毒。5專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價小鼠腹腔注射敵百蟲LD50計算表

組別劑量(mg/kg)對數(shù)劑量(Xi)實驗動物數(shù)(ni)死亡動物數(shù)(ri)死亡率(pi)存活率(q)13002.47711000123602.55631020.20.834322.63551050.50.545182.71431070.70.356222.793810101.00合計---∑

ri24∑

Pi2.4∑q2.66專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

計算LD50，代入下列公式：

lgLD50=Xk-d（∑Pi–0.5)LD50=Lg–1[Xk-d（∑Pi–0.5)]式中Xk

為最大對數(shù)劑量,∑Pi為死亡率的總和;d為相鄰兩組劑量比值的對數(shù),d=lg1.2=0.0792則:LD50=Lg–1[2.7938-0.0792(2.4-0.5)]=Lg–12.6433=439.87(mg/kg)7專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價經(jīng)皮給藥的急性毒性試驗1.動物

選用健康家兔（2.0～3.0kg）、豚鼠(350～450g)或大鼠(200～300g)，每組動物不少于6只，雌雄各半。2.供試藥物的配制供試藥物如是固體，應(yīng)磨成細粉狀，過120目篩，并用適量水或無毒無刺激性賦型劑（橄欖油、羊毛脂、凡士林等）混勻。如為液體，一般不要稀釋。8專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

3.給藥方式

脫去動物背部脊柱兩側(cè)毛發(fā)（不得損傷皮膚），脫毛后24小時檢查皮膚，如無損傷才能進行試驗。將供試藥物均勻地涂敷于脫毛區(qū)，不應(yīng)少于動物體表面積的10%，用塑料紙和兩層紗布覆蓋，再用膠布或繃帶固定，以防脫落和動物舔食。敷藥24小時。試驗結(jié)束后，用溫水或適當溶劑清除殘留供試藥。大鼠可采用浸尾方法給藥。9專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

4.劑量與分組

正式試驗前，用少量動物做預(yù)備試驗，根據(jù)24小時內(nèi)動物死亡情況，估計LD50的可能范圍，以確定正式試驗的劑量。一般分為4個劑量組，組間劑量呈等比級數(shù)。其比值為：1:1.5-3.0。若用賦形劑，需設(shè)賦形劑對照組。10專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價5.觀察指標

觀察動物的全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，觀察時間為一周。若給藥4天后仍有動物死亡時，仍需繼續(xù)觀察一周，對死亡動物應(yīng)做大體剖檢，必要時進行病理組織學(xué)檢查。11專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

6.結(jié)果判定

兔涂皮LD50在5mg/kg以下為極毒，5～44mg/kg為劇毒，44～350mg/kg為中等毒，350～2180mg/kg為低毒，2180mg/kg以上者為實際無毒。12專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價二、亞慢性毒性試驗確定外來化學(xué)物質(zhì)在動物1/10左右的生命時間內(nèi)，反復(fù)多次接觸后有無引起損害的觀測過程。又稱短期試驗、亞急性毒性試驗（Subchronictoxicitytest）。

目的：1.毒性確定2.靶器官3.慢性毒性試驗依據(jù)13專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價試驗方法1.動物

一般選用大鼠(100～200g)或小鼠(15～20g)。有條件時，采用供試藥物的靶動物雞等。外購動物需飼養(yǎng)一周后才能供試驗用。14專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2.試驗周期

臨床用藥期（天）毒性試驗給藥期（天）1～314728309030天以上6個月15專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價3.給藥方式

試驗周期給藥途徑14天大鼠、小鼠灌胃

雞

藥丸28天以上混飼自由采食飲水不限16專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價4.劑量與分組

大鼠20只/組，雌雄各半對照組低劑量組高于有效量，不出現(xiàn)毒性反應(yīng)中劑量組高劑量組部分動物出現(xiàn)毒性反應(yīng)或死亡但死亡數(shù)不超過20%17專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價5.觀察指標

分六大項，具體指標為：（1）健康狀況每天（2）體重，飼料消耗2-3次/周（3）血液學(xué)檢查定期（4）血液生化學(xué)檢查定期（5）肝、腎絕對重量和臟器指數(shù)試驗結(jié)束時（6）剖檢、組織病理學(xué)檢查試驗結(jié)束時18專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價6.結(jié)果處理

試驗數(shù)據(jù)方差分析或X2

病理變化照片寫出評價報告19專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價三、長期毒性試驗1.概念外來化學(xué)物質(zhì)在動物生命期的大部分時間或終生接觸于機體時所引起的損害作用，稱為長期毒性作用或慢性毒性作用。確定外來化學(xué)物質(zhì)這種慢性毒性作用的動物試驗觀察方法，稱為長期毒性試驗。20專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2.目的觀測長期反復(fù)攝入低劑量的受試物，可能對機體造成的損害、嚴重程度、停藥后的發(fā)展和恢復(fù)情況，為臨床試驗提供依據(jù)。3.試驗方法（1）動物

兩種動物（嚙齒類和非嚙齒類），目前要求用一種嚙齒類動物進行全面系統(tǒng)的試驗。21專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

（2）劑量分組

試驗組：4～5個，設(shè)高劑量組1～2個，中劑量組1～2個，低劑量組1～2個。

以LD50的1/10、1/50、1/100、1/1000劑量分組。對照組：1個（3）染毒方式混飼或飲水，由動物自由進食?；蛲坎疗つw。22專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（4）觀察指標一般情況：健康、生長發(fā)育、進食量，特別是體重。生物化學(xué)指標：肝、腎功能。血液學(xué)變化：Hb，WBC，RBC，病理學(xué)檢查：病理解剖和病理組織學(xué)變化。（5）結(jié)果評價參考亞急性毒性試驗。23專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價第二節(jié)特殊毒性試驗致突變:

體外:（1）艾母氏(Ames)試驗(必做)（2）哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變（CHO、CHL）選做體內(nèi):（3）微核試驗(必做)（4）精子畸形試驗選做（5）小鼠睪丸精原細胞染色體畸變試驗選做（6）顯性致死試驗若（4）、（5）任一項為陽性，必做（6）24專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

致畸:（1）傳統(tǒng)致畸試驗(必做)一般獸藥必做（2）喂養(yǎng)繁殖毒性試驗（3）喂養(yǎng)致畸試驗（2）、（3）飼料藥物添加劑必須增做25專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價一、艾母氏(Ames)試驗方法1.原理組氨酸缺陷型（即突變型）鼠傷寒沙門氏菌在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上不能生長，但在加有致突變原的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，則可使突變型產(chǎn)生回復(fù)突變成為野生型，即恢復(fù)合成組氨酸的能力，于是就能在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上生長，根據(jù)其生長菌落的數(shù)量判斷受試物是否具有致突變性。26專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

野生型（能合成組氨酸）

缺乏組氨酸的培養(yǎng)基加有致突變原的培養(yǎng)基組氨酸缺陷型（即突變型）鼠傷寒沙門氏菌。。。。。。

。27專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

2.菌種組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102四個標準株。3.劑量分組每次試驗要求4--5個劑量組，每個劑量做三個平行平皿。高劑量以不抑菌為原則。液態(tài)受試物：0.05-50ul/平皿固態(tài)受試物：0.1-1000ug/平皿，最高劑量可達5000ug/平皿。

選定后劑量的藥物應(yīng)配制成適當濃度體積：100ul或200ul/皿。28專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

4.溶劑水5.對照物每次檢測均需要陽性對照：已知的陽性藥物陰性對照：溶劑

加S9混合液時要同時作不加S9混合液的對照平皿6.S9混合液如果受試物可能是經(jīng)動物體酶系統(tǒng)活化代謝后才具有致突變作用，則試驗過程需要在培養(yǎng)基上同時加入哺乳動物的肝微粒體（S9混合液），使受試物被活化而呈現(xiàn)致突變作用。

29專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

S9制備

選體重200g左右成年雄性大鼠，經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后宰殺（處死前12小時禁食）。在低溫條件下，無菌操作取出肝臟，用KCI液淋洗后置勻漿器中制成勻漿。低溫離心后分裝，保存于液氮或–80℃冰箱。30專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

7.試驗步驟

TA97aTA98TA100TA10237℃水浴振蕩培養(yǎng)活菌數(shù)不得少于1～2x109/ml

增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液31專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價試驗步驟

受檢物+菌液+S9混合液或磷酸鹽緩（0.1-0.2ml）（0.1ml）（0.5ml）

37℃水浴振蕩培養(yǎng)20imns加入45℃頂層培養(yǎng)基2ml混勻37℃培養(yǎng)48h

無菌小試管含底層培養(yǎng)基的平皿32專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價8.結(jié)果評價

受試組的菌落數(shù)大于2倍自發(fā)回變數(shù)，并有劑量反應(yīng)關(guān)系和重現(xiàn)性，判為誘變陽性。33專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價二、微核試驗

原理：骨髓細胞染色體經(jīng)誘變物作用，發(fā)生突變后出現(xiàn)斷裂，并有部分斷片在有絲分裂后期不移向兩極，在有絲分裂的末期不進入分裂的細胞核中，因而存留于細胞漿中，形成一個或幾個圓形至杏仁狀的結(jié)構(gòu)，并存留一定時間。由于這種圓形結(jié)構(gòu)比普通細胞核小，故稱微核（micronucleus）。34專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價圖示原理：

誘變物嗜多染紅細胞微核直徑相當于紅細胞直徑的1/20～1/5。35專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

1.動物

成年健康小鼠（品系），隨機分為受試組和對照組。10只/組，雌雄各半。2.受試物的處理將受試物溶于適宜的溶劑中,以0.1-0.2ml/10g體重的給藥體積配制成適當?shù)臐舛取?.給藥方式給藥途徑：與臨床用藥途徑相同。內(nèi)服時需灌胃。給藥劑量：以LD50為依據(jù)，設(shè)三個劑量組。高劑量組LD50的0.8-0.5；低劑量組LD50的0.05-0.1

并設(shè)陰性對照和陽性對照組，陽性對照物可選用已知的能誘發(fā)微核陽性的誘變劑。36專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

4.試驗操作

一次給藥：24，48，72小時取樣制片。

二次給藥：第二次給藥后的6，24小時取樣制片。處死小鼠，將股骨骨髓洗入離心管，離心，常規(guī)涂片。姬姆薩染色，鏡檢。5.鏡檢計數(shù)：1000個嗜多染紅細胞（PCE）/片求出：嗜多染紅細胞/正染紅細胞（NCE）必要時，丫啶橙染色，熒光顯微鏡分析計數(shù)。37專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

6.結(jié)果評價

將數(shù)據(jù)列表，分別列出嗜多染紅細胞數(shù)，微核數(shù)及PCE/NCE之比。所得結(jié)果用t檢驗進行數(shù)據(jù)分析，經(jīng)重復(fù)試驗P<0.01并有劑量反應(yīng)關(guān)系時，判為陽性。38專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價三、異常毒性檢查

（一）目的

將一定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi)或口服給藥，在規(guī)定時間內(nèi)觀察小鼠的死亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。

39專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

（二）實驗動物

小鼠健康無傷，體重17～20g。做過本實驗的小鼠不能重復(fù)使用。40專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（三）檢驗方法

取5只小鼠，按藥物的給藥途徑，每只小鼠分別給予供試品溶液0.5ml。靜脈注射：尾靜脈注入供試品溶液，注射時間一般為4～5秒，規(guī)定緩慢注射的藥品可延長至30秒。皮下注射：可見注射部位皮下出現(xiàn)泡狀隆起。41專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（四）結(jié)果判定

除另有規(guī)定外，5只小鼠在給藥后48小時內(nèi)不得死亡。如有死亡，另取體重17～20g小鼠10只復(fù)測，全部小鼠在48小時內(nèi)不得有死亡，否則，判為不合格。42專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價第三節(jié)制劑的安全性評價一、熱原反應(yīng)試驗二、溶血性檢查三、局部刺激性試驗1.家兔點眼法2.家兔股四頭肌法四、過敏性試驗五、降壓物質(zhì)檢查43專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價一、熱原反應(yīng)試驗1.概念是指某些微生物的尸體及其增殖時的產(chǎn)物,主要是細菌的一種內(nèi)毒素。大多數(shù)細菌都能在增殖時產(chǎn)生熱原，霉菌與酵母菌也能產(chǎn)生熱原。熱原隨注射液進入動物體后，輕則能引起體溫升高，嚴重的虛脫死亡。44專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

檢查對象：注射用原料溶媒注射液注射器45專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價注射劑熱原污染的途徑1.溶媒注射用水2.原料適宜微生物生長、生物制品

如葡萄糖、水解蛋白、氯化鈉

3.用具或容器污染4.生產(chǎn)過程中污染及時滅菌，縮短時間46專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價熱原的性質(zhì)1.耐熱性

60℃1小時不受影響;180-200℃干熱2小時或250℃30mins徹底破壞2.濾過性過細菌濾器;不能過透析膜3.水溶性

不溶于有機溶媒4.不揮發(fā)性但可隨水蒸氣帶入蒸餾水5.被吸附性

活性炭,硅藻土,樹脂等47專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價除去熱原的方法1.防止污染

藥液、溶媒（24小時內(nèi)ddH2O）2.清除熱原

容器用強酸、強堿、干熱3.吸附

0.1-0.2%活性炭；多層石棉板4.超聲波破壞熱原5.氧化劑

高錳酸鉀、雙氧水48專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2.熱原檢查法本法系將一定劑量的供試品，靜脈注射入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。49專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價(1)選符合規(guī)定的家兔1.健康無傷，體重1.7～3.0kg，同一來源、同一品系，雌兔無孕。2.1兔1籠，標兔號，經(jīng)7日同一飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，測溫條件相同。在此期間，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異常。50專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價(2)試驗前的準備1、試驗前1～2日，供試用家兔應(yīng)處于同一溫度的環(huán)境中，實驗室與飼養(yǎng)室環(huán)境溫度相差不得大于5℃。51專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2.室溫應(yīng)在17～28℃，在試驗全部過程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避免噪音干擾。3.家兔在試驗前停食1小時并置于固定盒內(nèi)，直至試驗完畢。52專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價4、肛溫計插入深度約6cm，不得少于1.5分鐘，每隔30分鐘測量體溫1次，一般測量2次，兩次體溫之差不得超過0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。53專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

5.試驗用的注射器、針頭及一切與供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘或用180℃加熱2小時，也可用其他適宜的方法除去熱原。54專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價(3)檢查方法1.每個供試樣品用家兔3只，在測定正常體溫(38.3-39.6℃)后15分鐘內(nèi)給藥。2.供試品注射的體積，按家兔體重不少于1ml/kg，不大于10ml/kg，體積在5～10ml/kg的溶液應(yīng)在37～38℃預(yù)熱后注射。55專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價3.耳靜脈緩慢注射，但每兔不超過3分鐘。4.給藥后每隔30分鐘測溫1次，共測6次。56專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價5、溫差計算：（1）以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度。（2）以6次體溫中最低的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的降低溫度。57專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價(4)結(jié)果判斷1.判斷復(fù)試：（1）初試3只兔中僅有1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔升溫均低于0.6℃，但升溫的總數(shù)達1.4℃或1.4℃以上,應(yīng)另取5只家兔復(fù)試。58專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（2）含有熱原的供試品，一般在給家兔靜脈注射后1~2小時出現(xiàn)升溫高峰，當?shù)?小時升溫大于0.6℃時，宜復(fù)試后再作判斷。（3）3只家兔中有1只降溫值小于0.6℃，或3只家兔中有2只降溫值在0.45~0.55℃，應(yīng)另取3只家兔復(fù)試。59專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2.判斷合格（1）初試3只家兔中，體溫升高0.6℃以下，并且3只家兔升溫的總數(shù)在1.4℃以下可判斷為符合規(guī)定。60專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（2）復(fù)試5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)僅有1只，并且初復(fù)試合并，8只家兔的升溫總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下，可判斷為符合規(guī)定。

61專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價3、判斷不合格（1）初試3只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)有2只或3只，可判斷為不符合規(guī)定。62專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（2）復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)有2只或2只以上，可判斷為不符合規(guī)定。（3）初復(fù)試合并8只家兔的升溫總數(shù)超過3.5℃，可判斷為不符合規(guī)定。63專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

二、中草藥注射劑的質(zhì)量檢查1.急性毒性

中草藥注射劑的耐受量應(yīng)為家畜臨床用量的100倍為安全，60倍以上者可慎用。64專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價具體方法取小鼠5只，尾靜脈或腹腔注射0.5ml藥液，觀察小鼠有無震顫、驚厥、四肢癱瘓、步態(tài)不穩(wěn)、豎毛、呼吸抑制或死亡等反應(yīng)。一般觀察48-72小時，如有死亡，應(yīng)另取10只重做，不得有死亡。65專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價2、溶血試驗含皂苷或鞣質(zhì)或成分尚未十分明確的中草藥注射液必須做溶血試驗。66專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價具體方法（1）2%兔的紅細胞生理鹽水的配制

兔耳緣靜脈采血1ml，置青霉素小瓶（西林瓶）中，加玻璃珠攪拌除纖維蛋白，用生理鹽水離心洗滌至上清液澄清為止，然后配成2%混懸液。

67專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（2）溶血試驗設(shè)計表試管號1234567被試藥液（ml）0.10.20.30.40.500生理鹽水（ml）2.42.32.22.12.02.50紅細胞液（ml）2.52.52.52.52.52.52.5蒸餾水（ml）0000002.568專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

取潔凈試管7支，按上表排列加入各種溶液，第6管為陰性對照管，第7管為陽性對照管。各管輕輕搖勻后，37℃恒溫箱或水浴中保溫（或25-37℃室溫下），開始每隔15分鐘，1小時后每隔1小時分別觀察1次，共3小時。69專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價（3）結(jié)果判斷判定標準:1.全溶血:溶液澄明紅色,管底無紅細胞殘留.2.部分溶血:溶液澄明紅色或棕色,管底有少量紅細胞殘留.3.無溶血:紅細胞全部下沉,上層液體無色澄明.4.凝集:雖不溶血,但出現(xiàn)紅絮狀物,振搖后不能分散.將凝集物置于載玻片上,蓋上蓋玻片,從邊緣滴加生理鹽水,顯微鏡下觀察,紅細胞散開者為假凝集,反之為真凝集.70專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價

結(jié)果判定:一般認為,第3管或第3管以前被試藥液在30分鐘內(nèi)引起溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的，不宜作靜脈注射用；不溶血或出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象的才可作注射用。71專題一獸藥的毒理學(xué)試驗和安全性評價三、局部