專(zhuān)題一 獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)課件

專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)一般毒性試驗(yàn):

急性毒性試驗(yàn)亞慢性毒性試驗(yàn)

長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

特殊毒性試驗(yàn):

“三致”試驗(yàn)致畸、致突變、致癌1專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)第一節(jié)一般毒性試驗(yàn)一、急性毒性試驗(yàn)(1)經(jīng)口或注射給藥的急性毒性試驗(yàn)(2)經(jīng)皮給藥的急性毒性試驗(yàn)?zāi)康模海?）求出受試物的半數(shù)致死量（LD50）。（2）闡明受試物急性毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系與中毒特征，為急救治療措施提供依據(jù)。（3）為受試物的毒性作出初步判斷，為其它毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。2專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)經(jīng)口或注射給藥的急性毒性試驗(yàn)1.動(dòng)物小鼠（體重18～22g）、大鼠（體重180～200g）或其他敏感動(dòng)物。應(yīng)注明動(dòng)物的品系。每組小鼠不少于10只、大鼠不少于6只，雌雄各半，雌性應(yīng)未產(chǎn)無(wú)孕。2.供試藥物的配制一般用水為溶劑,將藥物配成一定濃度的溶液.3專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

3.給藥方式與最大體積

灌胃法:一次最大灌胃量1.0ml/只(小鼠)4.0ml/只(大鼠)

腹腔注射:一次最大注射量1.0ml/只(小鼠)3.0ml/只(大鼠)4.劑量與分組預(yù)試驗(yàn)全部致死的最小劑量LD100和全部存活的最大劑量LD0正式試驗(yàn)5-7個(gè)劑量組,組間劑量呈等比級(jí)數(shù),其比值為1.2-1.4.4專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

5.觀察指標(biāo)

動(dòng)物一般健康狀況，中毒表現(xiàn)和死亡過(guò)程。時(shí)間：7天。死亡動(dòng)物：大體剖檢、病理組織學(xué)檢查（必要時(shí)）6.LD50計(jì)算

寇氏法計(jì)算供試藥的LD50值及其95%可信限范圍。7.結(jié)果判定

大鼠一次經(jīng)口LD50在1mg/kg以下為極毒，1～50mg/kg為劇毒，50～500mg/kg為中等毒，500～5000mg/kg為低毒，5000

mg/kg以上者為實(shí)際無(wú)毒。5專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)小鼠腹腔注射敵百蟲(chóng)LD50計(jì)算表

組別劑量(mg/kg)對(duì)數(shù)劑量(Xi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)(ni)死亡動(dòng)物數(shù)(ri)死亡率(pi)存活率(q)13002.47711000123602.55631020.20.834322.63551050.50.545182.71431070.70.356222.793810101.00合計(jì)---∑

ri24∑

Pi2.4∑q2.66專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

計(jì)算LD50，代入下列公式：

lgLD50=Xk-d（∑Pi–0.5)LD50=Lg–1[Xk-d（∑Pi–0.5)]式中Xk

為最大對(duì)數(shù)劑量,∑Pi為死亡率的總和;d為相鄰兩組劑量比值的對(duì)數(shù),d=lg1.2=0.0792則:LD50=Lg–1[2.7938-0.0792(2.4-0.5)]=Lg–12.6433=439.87(mg/kg)7專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)經(jīng)皮給藥的急性毒性試驗(yàn)1.動(dòng)物

選用健康家兔（2.0～3.0kg）、豚鼠(350～450g)或大鼠(200～300g)，每組動(dòng)物不少于6只，雌雄各半。2.供試藥物的配制供試藥物如是固體，應(yīng)磨成細(xì)粉狀，過(guò)120目篩，并用適量水或無(wú)毒無(wú)刺激性賦型劑（橄欖油、羊毛脂、凡士林等）混勻。如為液體，一般不要稀釋。8專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

3.給藥方式

脫去動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛發(fā)（不得損傷皮膚），脫毛后24小時(shí)檢查皮膚，如無(wú)損傷才能進(jìn)行試驗(yàn)。將供試藥物均勻地涂敷于脫毛區(qū)，不應(yīng)少于動(dòng)物體表面積的10%，用塑料紙和兩層紗布覆蓋，再用膠布或繃帶固定，以防脫落和動(dòng)物舔食。敷藥24小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)束后，用溫水或適當(dāng)溶劑清除殘留供試藥。大鼠可采用浸尾方法給藥。9專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

4.劑量與分組

正式試驗(yàn)前，用少量動(dòng)物做預(yù)備試驗(yàn)，根據(jù)24小時(shí)內(nèi)動(dòng)物死亡情況，估計(jì)LD50的可能范圍，以確定正式試驗(yàn)的劑量。一般分為4個(gè)劑量組，組間劑量呈等比級(jí)數(shù)。其比值為：1:1.5-3.0。若用賦形劑，需設(shè)賦形劑對(duì)照組。10專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)5.觀察指標(biāo)

觀察動(dòng)物的全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，觀察時(shí)間為一周。若給藥4天后仍有動(dòng)物死亡時(shí)，仍需繼續(xù)觀察一周，對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)做大體剖檢，必要時(shí)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。11專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

6.結(jié)果判定

兔涂皮LD50在5mg/kg以下為極毒，5～44mg/kg為劇毒，44～350mg/kg為中等毒，350～2180mg/kg為低毒，2180mg/kg以上者為實(shí)際無(wú)毒。12專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)確定外來(lái)化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物1/10左右的生命時(shí)間內(nèi)，反復(fù)多次接觸后有無(wú)引起損害的觀測(cè)過(guò)程。又稱(chēng)短期試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)（Subchronictoxicitytest）。

目的：1.毒性確定2.靶器官3.慢性毒性試驗(yàn)依據(jù)13專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)方法1.動(dòng)物

一般選用大鼠(100～200g)或小鼠(15～20g)。有條件時(shí)，采用供試藥物的靶動(dòng)物雞等。外購(gòu)動(dòng)物需飼養(yǎng)一周后才能供試驗(yàn)用。14專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2.試驗(yàn)周期

臨床用藥期（天）毒性試驗(yàn)給藥期（天）1～314728309030天以上6個(gè)月15專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)3.給藥方式

試驗(yàn)周期給藥途徑14天大鼠、小鼠灌胃

雞

藥丸28天以上混飼自由采食飲水不限16專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)4.劑量與分組

大鼠20只/組，雌雄各半對(duì)照組低劑量組高于有效量，不出現(xiàn)毒性反應(yīng)中劑量組高劑量組部分動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng)或死亡但死亡數(shù)不超過(guò)20%17專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)5.觀察指標(biāo)

分六大項(xiàng)，具體指標(biāo)為：（1）健康狀況每天（2）體重，飼料消耗2-3次/周（3）血液學(xué)檢查定期（4）血液生化學(xué)檢查定期（5）肝、腎絕對(duì)重量和臟器指數(shù)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（6）剖檢、組織病理學(xué)檢查試驗(yàn)結(jié)束時(shí)18專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)6.結(jié)果處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)方差分析或X2

病理變化照片寫(xiě)出評(píng)價(jià)報(bào)告19專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)三、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)1.概念外來(lái)化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物生命期的大部分時(shí)間或終生接觸于機(jī)體時(shí)所引起的損害作用，稱(chēng)為長(zhǎng)期毒性作用或慢性毒性作用。確定外來(lái)化學(xué)物質(zhì)這種慢性毒性作用的動(dòng)物試驗(yàn)觀察方法，稱(chēng)為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。20專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2.目的觀測(cè)長(zhǎng)期反復(fù)攝入低劑量的受試物，可能對(duì)機(jī)體造成的損害、嚴(yán)重程度、停藥后的發(fā)展和恢復(fù)情況，為臨床試驗(yàn)提供依據(jù)。3.試驗(yàn)方法（1）動(dòng)物

兩種動(dòng)物（嚙齒類(lèi)和非嚙齒類(lèi)），目前要求用一種嚙齒類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行全面系統(tǒng)的試驗(yàn)。21專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

（2）劑量分組

試驗(yàn)組：4～5個(gè)，設(shè)高劑量組1～2個(gè)，中劑量組1～2個(gè)，低劑量組1～2個(gè)。

以LD50的1/10、1/50、1/100、1/1000劑量分組。對(duì)照組：1個(gè)（3）染毒方式混飼或飲水，由動(dòng)物自由進(jìn)食。或涂擦皮膚。22專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（4）觀察指標(biāo)一般情況：健康、生長(zhǎng)發(fā)育、進(jìn)食量，特別是體重。生物化學(xué)指標(biāo)：肝、腎功能。血液學(xué)變化：Hb，WBC，RBC，病理學(xué)檢查：病理解剖和病理組織學(xué)變化。（5）結(jié)果評(píng)價(jià)參考亞急性毒性試驗(yàn)。23專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)第二節(jié)特殊毒性試驗(yàn)致突變:

體外:（1）艾母氏(Ames)試驗(yàn)(必做)（2）哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變（CHO、CHL）選做體內(nèi):（3）微核試驗(yàn)(必做)（4）精子畸形試驗(yàn)選做（5）小鼠睪丸精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)選做（6）顯性致死試驗(yàn)若（4）、（5）任一項(xiàng)為陽(yáng)性，必做（6）24專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

致畸:（1）傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)(必做)一般獸藥必做（2）喂養(yǎng)繁殖毒性試驗(yàn)（3）喂養(yǎng)致畸試驗(yàn)（2）、（3）飼料藥物添加劑必須增做25專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)一、艾母氏(Ames)試驗(yàn)方法1.原理組氨酸缺陷型（即突變型）鼠傷寒沙門(mén)氏菌在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，但在加有致突變?cè)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)，則可使突變型產(chǎn)生回復(fù)突變成為野生型，即恢復(fù)合成組氨酸的能力，于是就能在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)其生長(zhǎng)菌落的數(shù)量判斷受試物是否具有致突變性。26專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

野生型（能合成組氨酸）

缺乏組氨酸的培養(yǎng)基加有致突變?cè)呐囵B(yǎng)基組氨酸缺陷型（即突變型）鼠傷寒沙門(mén)氏菌。。。。。。

。27專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

2.菌種組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門(mén)氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)株。3.劑量分組每次試驗(yàn)要求4--5個(gè)劑量組，每個(gè)劑量做三個(gè)平行平皿。高劑量以不抑菌為原則。液態(tài)受試物：0.05-50ul/平皿固態(tài)受試物：0.1-1000ug/平皿，最高劑量可達(dá)5000ug/平皿。

選定后劑量的藥物應(yīng)配制成適當(dāng)濃度體積：100ul或200ul/皿。28專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

4.溶劑水5.對(duì)照物每次檢測(cè)均需要陽(yáng)性對(duì)照：已知的陽(yáng)性藥物陰性對(duì)照：溶劑

加S9混合液時(shí)要同時(shí)作不加S9混合液的對(duì)照平皿6.S9混合液如果受試物可能是經(jīng)動(dòng)物體酶系統(tǒng)活化代謝后才具有致突變作用，則試驗(yàn)過(guò)程需要在培養(yǎng)基上同時(shí)加入哺乳動(dòng)物的肝微粒體（S9混合液），使受試物被活化而呈現(xiàn)致突變作用。

29專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

S9制備

選體重200g左右成年雄性大鼠，經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后宰殺（處死前12小時(shí)禁食）。在低溫條件下，無(wú)菌操作取出肝臟，用KCI液淋洗后置勻漿器中制成勻漿。低溫離心后分裝，保存于液氮或–80℃冰箱。30專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

7.試驗(yàn)步驟

TA97aTA98TA100TA10237℃水浴振蕩培養(yǎng)活菌數(shù)不得少于1～2x109/ml

增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)液31專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)步驟

受檢物+菌液+S9混合液或磷酸鹽緩（0.1-0.2ml）（0.1ml）（0.5ml）

37℃水浴振蕩培養(yǎng)20imns加入45℃頂層培養(yǎng)基2ml混勻37℃培養(yǎng)48h

無(wú)菌小試管含底層培養(yǎng)基的平皿32專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)8.結(jié)果評(píng)價(jià)

受試組的菌落數(shù)大于2倍自發(fā)回變數(shù)，并有劑量反應(yīng)關(guān)系和重現(xiàn)性，判為誘變陽(yáng)性。33專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)二、微核試驗(yàn)

原理：骨髓細(xì)胞染色體經(jīng)誘變物作用，發(fā)生突變后出現(xiàn)斷裂，并有部分?jǐn)嗥谟薪z分裂后期不移向兩極，在有絲分裂的末期不進(jìn)入分裂的細(xì)胞核中，因而存留于細(xì)胞漿中，形成一個(gè)或幾個(gè)圓形至杏仁狀的結(jié)構(gòu)，并存留一定時(shí)間。由于這種圓形結(jié)構(gòu)比普通細(xì)胞核小，故稱(chēng)微核（micronucleus）。34專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)圖示原理：

誘變物嗜多染紅細(xì)胞微核直徑相當(dāng)于紅細(xì)胞直徑的1/20～1/5。35專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

1.動(dòng)物

成年健康小鼠（品系），隨機(jī)分為受試組和對(duì)照組。10只/組，雌雄各半。2.受試物的處理將受試物溶于適宜的溶劑中,以0.1-0.2ml/10g體重的給藥體積配制成適當(dāng)?shù)臐舛取?.給藥方式給藥途徑：與臨床用藥途徑相同。內(nèi)服時(shí)需灌胃。給藥劑量：以LD50為依據(jù)，設(shè)三個(gè)劑量組。高劑量組LD50的0.8-0.5；低劑量組LD50的0.05-0.1

并設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照物可選用已知的能誘發(fā)微核陽(yáng)性的誘變劑。36專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

4.試驗(yàn)操作

一次給藥：24，48，72小時(shí)取樣制片。

二次給藥：第二次給藥后的6，24小時(shí)取樣制片。處死小鼠，將股骨骨髓洗入離心管，離心，常規(guī)涂片。姬姆薩染色，鏡檢。5.鏡檢計(jì)數(shù)：1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE）/片求出：嗜多染紅細(xì)胞/正染紅細(xì)胞（NCE）必要時(shí)，丫啶橙染色，熒光顯微鏡分析計(jì)數(shù)。37專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

6.結(jié)果評(píng)價(jià)

將數(shù)據(jù)列表，分別列出嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，微核數(shù)及PCE/NCE之比。所得結(jié)果用t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，經(jīng)重復(fù)試驗(yàn)P<0.01并有劑量反應(yīng)關(guān)系時(shí)，判為陽(yáng)性。38專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)三、異常毒性檢查

（一）目的

將一定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi)或口服給藥，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察小鼠的死亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。

39專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

小鼠健康無(wú)傷，體重17～20g。做過(guò)本實(shí)驗(yàn)的小鼠不能重復(fù)使用。40專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（三）檢驗(yàn)方法

取5只小鼠，按藥物的給藥途徑，每只小鼠分別給予供試品溶液0.5ml。靜脈注射：尾靜脈注入供試品溶液，注射時(shí)間一般為4～5秒，規(guī)定緩慢注射的藥品可延長(zhǎng)至30秒。皮下注射：可見(jiàn)注射部位皮下出現(xiàn)泡狀隆起。41專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（四）結(jié)果判定

除另有規(guī)定外，5只小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得死亡。如有死亡，另取體重17～20g小鼠10只復(fù)測(cè)，全部小鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡，否則，判為不合格。42專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)第三節(jié)制劑的安全性評(píng)價(jià)一、熱原反應(yīng)試驗(yàn)二、溶血性檢查三、局部刺激性試驗(yàn)1.家兔點(diǎn)眼法2.家兔股四頭肌法四、過(guò)敏性試驗(yàn)五、降壓物質(zhì)檢查43專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)一、熱原反應(yīng)試驗(yàn)1.概念是指某些微生物的尸體及其增殖時(shí)的產(chǎn)物,主要是細(xì)菌的一種內(nèi)毒素。大多數(shù)細(xì)菌都能在增殖時(shí)產(chǎn)生熱原，霉菌與酵母菌也能產(chǎn)生熱原。熱原隨注射液進(jìn)入動(dòng)物體后，輕則能引起體溫升高，嚴(yán)重的虛脫死亡。44專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

檢查對(duì)象：注射用原料溶媒注射液注射器45專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)注射劑熱原污染的途徑1.溶媒注射用水2.原料適宜微生物生長(zhǎng)、生物制品

如葡萄糖、水解蛋白、氯化鈉

3.用具或容器污染4.生產(chǎn)過(guò)程中污染及時(shí)滅菌，縮短時(shí)間46專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)熱原的性質(zhì)1.耐熱性

60℃1小時(shí)不受影響;180-200℃干熱2小時(shí)或250℃30mins徹底破壞2.濾過(guò)性過(guò)細(xì)菌濾器;不能過(guò)透析膜3.水溶性

不溶于有機(jī)溶媒4.不揮發(fā)性但可隨水蒸氣帶入蒸餾水5.被吸附性

活性炭,硅藻土,樹(shù)脂等47專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)除去熱原的方法1.防止污染

藥液、溶媒（24小時(shí)內(nèi)ddH2O）2.清除熱原

容器用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、干熱3.吸附

0.1-0.2%活性炭；多層石棉板4.超聲波破壞熱原5.氧化劑

高錳酸鉀、雙氧水48專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2.熱原檢查法本法系將一定劑量的供試品，靜脈注射入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。49專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)(1)選符合規(guī)定的家兔1.健康無(wú)傷，體重1.7～3.0kg，同一來(lái)源、同一品系，雌兔無(wú)孕。2.1兔1籠，標(biāo)兔號(hào)，經(jīng)7日同一飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，測(cè)溫條件相同。在此期間，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異常。50專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)(2)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備1、試驗(yàn)前1～2日，供試用家兔應(yīng)處于同一溫度的環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室與飼養(yǎng)室環(huán)境溫度相差不得大于5℃。51專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2.室溫應(yīng)在17～28℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避免噪音干擾。3.家兔在試驗(yàn)前停食1小時(shí)并置于固定盒內(nèi)，直至試驗(yàn)完畢。52專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)4、肛溫計(jì)插入深度約6cm，不得少于1.5分鐘，每隔30分鐘測(cè)量體溫1次，一般測(cè)量2次，兩次體溫之差不得超過(guò)0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。53專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

5.試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切與供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘或用180℃加熱2小時(shí)，也可用其他適宜的方法除去熱原。54專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)(3)檢查方法1.每個(gè)供試樣品用家兔3只，在測(cè)定正常體溫(38.3-39.6℃)后15分鐘內(nèi)給藥。2.供試品注射的體積，按家兔體重不少于1ml/kg，不大于10ml/kg，體積在5～10ml/kg的溶液應(yīng)在37～38℃預(yù)熱后注射。55專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)3.耳靜脈緩慢注射，但每兔不超過(guò)3分鐘。4.給藥后每隔30分鐘測(cè)溫1次，共測(cè)6次。56專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)5、溫差計(jì)算：（1）以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度。（2）以6次體溫中最低的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的降低溫度。57專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)(4)結(jié)果判斷1.判斷復(fù)試：（1）初試3只兔中僅有1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔升溫均低于0.6℃，但升溫的總數(shù)達(dá)1.4℃或1.4℃以上,應(yīng)另取5只家兔復(fù)試。58專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（2）含有熱原的供試品，一般在給家兔靜脈注射后1~2小時(shí)出現(xiàn)升溫高峰，當(dāng)?shù)?小時(shí)升溫大于0.6℃時(shí)，宜復(fù)試后再作判斷。（3）3只家兔中有1只降溫值小于0.6℃，或3只家兔中有2只降溫值在0.45~0.55℃，應(yīng)另取3只家兔復(fù)試。59專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2.判斷合格（1）初試3只家兔中，體溫升高0.6℃以下，并且3只家兔升溫的總數(shù)在1.4℃以下可判斷為符合規(guī)定。60專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（2）復(fù)試5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)僅有1只，并且初復(fù)試合并，8只家兔的升溫總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下，可判斷為符合規(guī)定。

61專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)3、判斷不合格（1）初試3只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)有2只或3只，可判斷為不符合規(guī)定。62專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（2）復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔數(shù)有2只或2只以上，可判斷為不符合規(guī)定。（3）初復(fù)試合并8只家兔的升溫總數(shù)超過(guò)3.5℃，可判斷為不符合規(guī)定。63專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

二、中草藥注射劑的質(zhì)量檢查1.急性毒性

中草藥注射劑的耐受量應(yīng)為家畜臨床用量的100倍為安全，60倍以上者可慎用。64專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)具體方法取小鼠5只，尾靜脈或腹腔注射0.5ml藥液，觀察小鼠有無(wú)震顫、驚厥、四肢癱瘓、步態(tài)不穩(wěn)、豎毛、呼吸抑制或死亡等反應(yīng)。一般觀察48-72小時(shí)，如有死亡，應(yīng)另取10只重做，不得有死亡。65專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)2、溶血試驗(yàn)含皂苷或鞣質(zhì)或成分尚未十分明確的中草藥注射液必須做溶血試驗(yàn)。66專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)具體方法（1）2%兔的紅細(xì)胞生理鹽水的配制

兔耳緣靜脈采血1ml，置青霉素小瓶（西林瓶）中，加玻璃珠攪拌除纖維蛋白，用生理鹽水離心洗滌至上清液澄清為止，然后配成2%混懸液。

67專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（2）溶血試驗(yàn)設(shè)計(jì)表試管號(hào)1234567被試藥液（ml）0.10.20.30.40.500生理鹽水（ml）2.42.32.22.12.02.50紅細(xì)胞液（ml）2.52.52.52.52.52.52.5蒸餾水（ml）0000002.568專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

取潔凈試管7支，按上表排列加入各種溶液，第6管為陰性對(duì)照管，第7管為陽(yáng)性對(duì)照管。各管輕輕搖勻后，37℃恒溫箱或水浴中保溫（或25-37℃室溫下），開(kāi)始每隔15分鐘，1小時(shí)后每隔1小時(shí)分別觀察1次，共3小時(shí)。69專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)（3）結(jié)果判斷判定標(biāo)準(zhǔn):1.全溶血:溶液澄明紅色,管底無(wú)紅細(xì)胞殘留.2.部分溶血:溶液澄明紅色或棕色,管底有少量紅細(xì)胞殘留.3.無(wú)溶血:紅細(xì)胞全部下沉,上層液體無(wú)色澄明.4.凝集:雖不溶血,但出現(xiàn)紅絮狀物,振搖后不能分散.將凝集物置于載玻片上,蓋上蓋玻片,從邊緣滴加生理鹽水,顯微鏡下觀察,紅細(xì)胞散開(kāi)者為假凝集,反之為真凝集.70專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)

結(jié)果判定:一般認(rèn)為,第3管或第3管以前被試藥液在30分鐘內(nèi)引起溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的，不宜作靜脈注射用；不溶血或出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象的才可作注射用。71專(zhuān)題一獸藥的毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)價(jià)三、局部