高效液相色譜分類(lèi)及工作原理通用課件

高效液相色譜分類(lèi)及工作原理通用課件目錄高效液相色譜簡(jiǎn)介高效液相色譜的分類(lèi)高效液相色譜的工作原理高效液相色譜的實(shí)驗(yàn)操作高效液相色譜的注意事項(xiàng)與維護(hù)01高效液相色譜簡(jiǎn)介高效液相色譜的定義高效液相色譜（HPLC）是一種分離和分析技術(shù)，利用固定相和流動(dòng)相之間的相互作用，對(duì)混合物中的組分進(jìn)行分離和檢測(cè)。它基于液體的流動(dòng)性和選擇性，通過(guò)高壓泵將液體樣品注入色譜柱，利用不同組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異實(shí)現(xiàn)分離。HPLC技術(shù)的起源，基于經(jīng)典液相色譜的改進(jìn)，使用高壓泵和高效填料。1960年代HPLC技術(shù)得到廣泛應(yīng)用，出現(xiàn)了各種類(lèi)型的檢測(cè)器，如紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等。1970年代HPLC技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展，出現(xiàn)了微徑柱和超高效液相色譜（UPLC）。1980年代HPLC技術(shù)不斷創(chuàng)新，出現(xiàn)了多維液相色譜、在線(xiàn)樣品制備等技術(shù)。1990年代至今高效液相色譜的發(fā)展歷程高效液相色譜的應(yīng)用領(lǐng)域用于檢測(cè)水、土壤、空氣等環(huán)境樣品中的有機(jī)污染物。用于檢測(cè)食品中的農(nóng)藥殘留、添加劑、營(yíng)養(yǎng)成分等。用于藥物的分離、純化、質(zhì)量控制以及代謝產(chǎn)物的分析。用于蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離和檢測(cè)，以及細(xì)胞和組織的分析。環(huán)境監(jiān)測(cè)食品分析藥物分析生命科學(xué)研究02高效液相色譜的分類(lèi)以硅膠為固定相，常用粒徑為5-10μm。適用于分離中等極性和小分子物質(zhì)。硅膠柱以氧化鋁為固定相，常用粒徑為10-30μm。適用于分離大分子物質(zhì)和極性物質(zhì)。氧化鋁柱以活性炭為固定相，常用粒徑為30-100μm。適用于分離非極性物質(zhì)和中等極性物質(zhì)?；钚蕴恐垂潭ㄏ囝?lèi)型分類(lèi)利用固定相的吸附作用，將不同物質(zhì)吸附在固定相上，再通過(guò)洗脫液將其洗脫下來(lái)，實(shí)現(xiàn)分離。吸附色譜法分配色譜法離子交換色譜法利用不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同，實(shí)現(xiàn)分離。利用固定相上的離子交換劑與流動(dòng)相中的離子之間的相互作用，實(shí)現(xiàn)分離。030201按分離機(jī)制分類(lèi)固定相粒度大于50μm，適用于分離大分子物質(zhì)和顆粒狀物質(zhì)。粗粒度色譜法固定相粒度小于5μm，適用于分離小分子物質(zhì)和極性物質(zhì)。細(xì)粒度色譜法按固定相粒度分類(lèi)03高效液相色譜的工作原理壓力梯度分離原理是指通過(guò)改變流動(dòng)相的壓力來(lái)控制溶質(zhì)的分離過(guò)程。在高壓下，流動(dòng)相流速較快，溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間的分配平衡被打破，從而實(shí)現(xiàn)溶質(zhì)的分離。壓力梯度分離原理主要應(yīng)用于反相高效液相色譜中，通過(guò)改變流動(dòng)相的極性和壓力來(lái)調(diào)節(jié)溶質(zhì)的保留時(shí)間和分離效果。壓力梯度分離原理吸附-洗脫分離原理是指溶質(zhì)在固定相上的吸附和洗脫過(guò)程。在流動(dòng)相和固定相之間，溶質(zhì)會(huì)根據(jù)它們與固定相的相互作用力不同而產(chǎn)生不同的吸附效果，從而實(shí)現(xiàn)分離。吸附-洗脫分離原理主要應(yīng)用于正相高效液相色譜中，通過(guò)選擇合適的固定相和流動(dòng)相，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同溶質(zhì)的吸附和洗脫，從而達(dá)到分離目的。吸附-洗脫分離原理分配平衡原理是指溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間的分配平衡。在一定條件下，溶質(zhì)在兩相之間的分配達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，從而實(shí)現(xiàn)溶質(zhì)的分離。分配平衡原理主要應(yīng)用于正相和反相高效液相色譜中，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相和固定相的性質(zhì)，控制溶質(zhì)的分配平衡，實(shí)現(xiàn)分離效果。分配平衡原理VS離子交換平衡原理是指離子在流動(dòng)相和固定相之間的交換平衡。離子交換固定相通過(guò)與流動(dòng)相中的離子進(jìn)行交換，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同離子的選擇性吸附和洗脫，從而達(dá)到分離目的。離子交換平衡原理主要應(yīng)用于離子交換高效液相色譜中，通過(guò)選擇合適的離子交換固定相和流動(dòng)相，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同離子的選擇性吸附和洗脫，從而達(dá)到分離效果。離子交換平衡原理04高效液相色譜的實(shí)驗(yàn)操作

實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器材和試劑準(zhǔn)備確保所有實(shí)驗(yàn)器材和試劑都已準(zhǔn)備好，并符合實(shí)驗(yàn)要求。實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)置確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境符合實(shí)驗(yàn)要求，如溫度、濕度等。安全防護(hù)措施確保實(shí)驗(yàn)人員了解并采取必要的安全防護(hù)措施。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的色譜柱，并確保其質(zhì)量合格。選擇合適的色譜柱按照色譜柱說(shuō)明書(shū)正確安裝色譜柱，確保密封性和穩(wěn)定性。安裝色譜柱實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，按照說(shuō)明書(shū)正確拆卸色譜柱，以便進(jìn)行清洗和維護(hù)。拆卸色譜柱色譜柱的安裝與拆卸選擇合適的流動(dòng)相根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的流動(dòng)相，并確保其純度和適應(yīng)性。流動(dòng)相的過(guò)濾和脫氣在流動(dòng)相使用前進(jìn)行過(guò)濾和脫氣處理，以去除雜質(zhì)和氣泡。流動(dòng)相的梯度洗脫根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置合適的流動(dòng)相梯度洗脫程序。流動(dòng)相的選擇與處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的進(jìn)樣量，確保樣品能夠被充分分離和分析。進(jìn)樣量的選擇清洗和干燥進(jìn)樣器，確保其干凈無(wú)污染。進(jìn)樣器的準(zhǔn)備將樣品注入進(jìn)樣器中，按照規(guī)定的操作程序進(jìn)行進(jìn)樣。進(jìn)樣操作進(jìn)樣操作123使用色譜工作站采集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，如峰高、峰面積等。數(shù)據(jù)采集對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行平滑、基線(xiàn)校正、峰識(shí)別等處理。數(shù)據(jù)處理根據(jù)處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并進(jìn)行誤差分析和結(jié)果解讀。結(jié)果分析數(shù)據(jù)處理與分析05高效液相色譜的注意事項(xiàng)與維護(hù)避免高壓高效液相色譜系統(tǒng)在運(yùn)行時(shí)會(huì)產(chǎn)生高壓，操作時(shí)應(yīng)特別小心，避免直接接觸流動(dòng)相和儀器內(nèi)部。避免有毒物質(zhì)使用的化學(xué)試劑和樣品應(yīng)確保無(wú)毒或低毒，以減少對(duì)操作人員的危害。良好的通風(fēng)在操作過(guò)程中，特別是在處理有害或易燃易爆的試劑時(shí)，應(yīng)保持良好的通風(fēng)，以降低事故風(fēng)險(xiǎn)。安全注意事項(xiàng)03020103校準(zhǔn)儀器參數(shù)為確保儀器準(zhǔn)確性，應(yīng)定期校準(zhǔn)儀器參數(shù)，如壓力、流量和溫度等。01定期清洗為防止堵塞和污染，應(yīng)定期清洗儀器內(nèi)部管道和過(guò)濾器。02檢查密封圈密封圈是儀器的重要部件，應(yīng)定期檢查其狀態(tài)，如有磨損或老化應(yīng)及時(shí)更