豬鏈球菌主要毒力基因的多重PCR檢測及其核糖體基因多態(tài)性研究的開題報(bào)告

豬鏈球菌主要毒力基因的多重PCR檢測及其核糖體基因多態(tài)性研究的開題報(bào)告開題報(bào)告研究題目：豬鏈球菌主要毒力基因的多重PCR檢測及其核糖體基因多態(tài)性研究研究背景和意義：豬鏈球菌是一種危害豬健康的重要病原體，能引起豬丹毒、膿毒病等多種疾病，嚴(yán)重影響豬養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前，豬鏈球菌的檢測方法主要包括培養(yǎng)、免疫學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測等。功能多樣性研究顯示，豬鏈球菌致病性與其毒力基因的種類和分布密切相關(guān)。因此，快速而準(zhǔn)確的檢測豬鏈球菌毒力基因及其多態(tài)性狀況，對于預(yù)防和控制該病有著重要的意義。研究目的：本研究旨在開發(fā)一種高靈敏度、高特異性的多重PCR檢測方法，對豬鏈球菌主要毒力基因進(jìn)行檢測，并對其核糖體基因進(jìn)行多態(tài)性研究。研究內(nèi)容：1.建立豬鏈球菌毒力基因的多重PCR檢測方法，包括stx1、stx2、eaeA、hlyA等毒力基因的檢測；2.豬鏈球菌核糖體基因的選擇和多態(tài)性研究，包括16SrRNA、23SrRNA等基因的多態(tài)性狀況探究；3.優(yōu)化并驗(yàn)證PCR反應(yīng)條件，確定不同類型豬鏈球菌的檢測靈敏度、特異性等重要參數(shù)。研究方法：1.從臨床病原菌中篩選出具代表性的豬鏈球菌毒力基因序列，并進(jìn)行多序列比對和進(jìn)化樹分析；2.設(shè)計(jì)特異性引物對豬鏈球菌毒力基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離、純化和測序；3.選取代表性的核糖體基因序列進(jìn)行多序列比對、編碼蛋白結(jié)構(gòu)及功能預(yù)測，并設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；4.優(yōu)化PCR反應(yīng)體系，包括引物濃度、溫度、循環(huán)數(shù)等關(guān)鍵因素的設(shè)定，驗(yàn)證PCR反應(yīng)的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等參數(shù)。研究預(yù)期結(jié)果：本研究將開發(fā)一種高效、快速的PCR檢測方法，能夠?qū)ωi鏈球菌的毒力基因進(jìn)行準(zhǔn)確檢測，并能夠?qū)ζ浜颂求w基因進(jìn)行多態(tài)性研究，以期為豬鏈球菌的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)。研究期限：12個(gè)月預(yù)算和經(jīng)費(fèi)來源：本研究預(yù)算為20萬元，經(jīng)費(fèi)來源為學(xué)校科研項(xiàng)目基金。研究團(tuán)隊(duì)：本研究由學(xué)校生物技術(shù)研究中心負(fù)責(zé)，主要研究人員為博士后甲、乙、丙；研究團(tuán)隊(duì)成員共計(jì)5人，包括導(dǎo)師1名、技術(shù)人員2名、博士后三名。參考文獻(xiàn)：1.Feng,P.,Lampel,K.A.,Karch,H.,&Whittam,T.S.(2018).Genetics:MolecularevolutionoftheEscherichiacoliO157:H7genome.MicrobiologyandMolecularBiologyReviews,82(2),e00017-18.2.Gyles,C.L.(2007).Shigatoxin-producingEscherichiacoli:anoverview.JournalofAnimalScience,85,E45-E62.3.Joerger,R.D.(Ed.).(2011).Foodbornepathogens:microbiologyandmolecularbiology.CaisterAcademicPress.4.Paton,J.C.,&Paton,A.W.(1998).PathogenesisanddiagnosisofShigatoxin-producingEsc