磺胺甲基嘧啶單克隆抗體的制備與鑒定的開題報告

磺胺甲基嘧啶單克隆抗體的制備與鑒定的開題報告摘要磺胺甲基嘧啶是一種廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖和人類醫(yī)療的抗菌藥物，但由于其濫用和不合理使用，已經(jīng)導(dǎo)致了許多耐藥性菌株的出現(xiàn)。因此，建立一種可靠的檢測方法對于監(jiān)測和控制其使用和濫用具有重要的意義。本文將利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制備磺胺甲基嘧啶單克隆抗體，并對其進(jìn)行鑒定，為磺胺甲基嘧啶的檢測提供一種新的方法。第一章緒論1.1研究背景磺胺甲氧嘧啶是一種廣泛用于畜禽養(yǎng)殖和人類醫(yī)療的抗菌藥物，具有廣譜抗菌活性。但由于其濫用和不合理使用，已經(jīng)導(dǎo)致了許多耐藥性菌株的出現(xiàn)，對人類和動物的健康造成了嚴(yán)重威脅。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確、可靠的檢測方法對于監(jiān)測和控制其使用和濫用具有重要的意義。1.2研究目的和意義本文將利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制備磺胺甲基嘧啶單克隆抗體，并對其進(jìn)行鑒定。通過建立一種可靠的磺胺甲基嘧啶檢測方法，有助于監(jiān)測和控制其使用和濫用，為保障公共衛(wèi)生和動物健康提供技術(shù)支持。第二章磺胺甲基嘧啶單克隆抗體的制備2.1試劑與儀器試劑：PBS溶液、對羥基苯甲酸(2-Hydroxybenzoylacid)、EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)、NHS(N-Hydroxysuccinimide)、磺胺甲基嘧啶、Freund佐劑、純化的鼠IgG。儀器：電泳儀、平衡離心機(jī)、熒光定量PCR儀。2.2保養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)使用細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)存放在液氮中的腫瘤細(xì)胞。2.3免疫小鼠并收集脾細(xì)胞免疫小鼠：BALB/c小鼠接種免疫：免疫小鼠將2.HB（對羥基苯甲酸-磺胺甲基嘧啶連接物）復(fù)合物注射到脊柱灌注處。收集脾細(xì)胞：通過滅活小鼠，取出脾臟，離心分離脾細(xì)胞。2.4分離并融合小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞制備兔抗鼠IgG介質(zhì)制備兔抗鼠IgG介質(zhì)以進(jìn)行海馬鞭毛狀干白病毒（Hybridoma）的電滲現(xiàn)象，最終將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到。根據(jù)BCIP/NBT標(biāo)記海馬鞭毛狀干白素色素染色，篩選出產(chǎn)生磺胺甲基喜啶單克隆抗體的細(xì)胞株。2.5克隆抗體對產(chǎn)生抗體的細(xì)胞進(jìn)行限稀?；旌夏[瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞減少后，制備親和純化的抗體。第三章磺胺甲基嘧啶單克隆抗體的鑒定3.1通過酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）鑒定抗體選擇最佳相關(guān)抗體。3.2透過熒光測定法鑒定抗體在血清樣品中夾雜熒光測定草藥。不同波長下，分別測定純化抗體樣品和樣本中熒光測定物的熒光強(qiáng)度，計算熒光比值并確定磺胺甲基嘧啶單克隆抗體的熒光特性。3.3采用免疫電泳法鑒定抗體采用免疫電泳法測定磺胺甲氧嘧啶單克隆抗體的特異性。第四章結(jié)論本文利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制備磺胺甲基嘧啶單抗，并進(jìn)行了鑒定。利用酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）等方法對其