生物化學(xué)生物氧化試題及答案及生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)部

實(shí)驗(yàn)一酪蛋白的制備一、目的學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。二、原理．牛乳中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，等電點(diǎn)為4.7。利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理，將牛乳的pH調(diào)至4.7時(shí)，酪蛋白就沉淀出來(lái)。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。三、器材1、離心機(jī)2、．抽濾裝置3、精密pH試紙或酸度計(jì)4、電爐5、燒杯6、溫度計(jì)．四、試劑與材料1、牛奶2500mL2、95％乙醇1200mL3、無(wú)水乙醚1200mL4、0.2mol／LpH4.7醋酸—醋酸鈉緩沖液3000mL5、．乙醇—乙醚混合液2000mL五、操作將100mL牛奶加熱至40℃。在攪拌下慢慢加入預(yù)熱至40℃、pH4.7的醋酸緩沖液100mL。用精密pH試紙或酸度計(jì)調(diào)pH至4.7。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心15分鐘(3000r／min)。棄去清液，得酪蛋白粗制品。用水洗沉淀3次，離心10分鐘(3000r／min)，棄去上清液。在沉淀中加入30mL乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。將沉淀攤開在表面皿上，風(fēng)干；得酪蛋白純晶。準(zhǔn)確稱重，計(jì)算含量和得率。含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％)得率：思考題1、制備高產(chǎn)率純酪蛋白的關(guān)鍵是什么？實(shí)驗(yàn)二小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的比較一、目的1.學(xué)習(xí)分光光度計(jì)的原理和使用方法。2.學(xué)習(xí)測(cè)定淀粉酶活力的方法。3.了解小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的變化。二、原理種子中貯藏的糖類主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解為麥芽糖。2（C6H10O5）n+nH2OnC12H22O11麥芽糖有還原性，能使3，5---二硝基水楊酸還原成棕色的3-氨基-5-硝基水揚(yáng)酸。后者可用分光光度計(jì)測(cè)定。休眠種子的淀粉酶活力很弱，種子吸脹萌動(dòng)后，酶活力逐漸增強(qiáng)，并隨著發(fā)芽天數(shù)增加而增加。本實(shí)驗(yàn)觀察小麥種子萌發(fā)前后淀粉酶活力的變化。三、器材1.25mL刻度試管2.吸管3.離心管4.乳缽5.分光光度計(jì)6.恒溫水浴7.離心機(jī)四、試劑和材料1、小麥種子2、o.1％標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液精確稱量100mg麥芽糖，用少量水溶解后，移入100mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。3.pH6.9，0.02mol/L磷酸緩沖液0.2mol/L磷酸二氫鉀67.5mL與0.2mol/L磷酸氫二鉀82.5混合，稀釋10倍。4、1％淀粉溶液1g可溶性淀粉溶于100mL0.02mol/L磷酸緩沖液中，其中含有0.0067mol/L氯化鈉。5、1％3，5—二硝基水楊酸試劑將1.00g3，5—二硝基水揚(yáng)酸溶于20ml2ML1NaOH溶液和50ml水中，加入30g酒石酸鉀鈉定容至100ml。6、1％氯化鈉溶液五、實(shí)驗(yàn)操作1、種子發(fā)芽小麥種子浸泡2.5小時(shí)后，放入25℃恒溫箱內(nèi)或在、室溫下發(fā)芽。2、酶液提取取發(fā)芽第3或第4天的幼苗15株，放入乳缽內(nèi)，加入1%氯化鈉溶液10mL，用力磨碎。在室溫下放置20分鐘，攪拌幾次。然后將提取液離心（1500r/min）6—7分鐘。將上清液倒人量筒，測(cè)定酶提取液的總體積。進(jìn)行酶活力測(cè)定時(shí)，用緩沖液將發(fā)芽第3或第4天的幼苗稀釋10倍。取干燥種子15粒作對(duì)照（提取步驟同上）。3、酶活力測(cè)定（1）取25mL刻度試管4支，編號(hào)。按下表要求加入各試劑（各試劑須在25℃預(yù)熱10分鐘）試管標(biāo)號(hào)試劑1234干燥種子的酶提取液發(fā)芽第3或第4天的幼苗的酶提取液標(biāo)準(zhǔn)管空白管酶液（mL）0.50.5——標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（mL）——0.5—1％淀粉溶液（mL）1111水（mL）———0.5將各管混勻，放在25℃水浴中，保溫3分鐘后，立即向各管加入1％3，5—二硝基水楊酸溶液2mL。（2）取出各試管，放入沸水浴加熱5分鐘。冷卻至室溫，加水稀釋至25mL。并混勻。在A500nm處測(cè)定各管的吸光度。填入表中試管號(hào)干燥種子的酶提取液發(fā)芽第3或第4天的幼苗的酶提取液標(biāo)準(zhǔn)管空白管A500nm吸光度4、計(jì)算根據(jù)溶液的濃度與光吸收值成正比的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)規(guī)定：25℃時(shí)3min內(nèi)水解淀粉釋放1mg麥芽糖所需的酶量為1個(gè)酶活力單位（u）。酶活力計(jì)算公式為：式中：C酶酶液麥芽糖的濃度，V酶提取酶液的總體積，n酶酶液稀釋倍數(shù)。思考題為什么此酶提純整個(gè)過(guò)程在0—5條件下進(jìn)行？而測(cè)酶的活力時(shí)要在25預(yù)保溫？反應(yīng)后又放入沸水浴中？實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明什么？實(shí)驗(yàn)三紙層析法分離鑒定氨基酸一、目的通過(guò)氨基酸的分離，學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法。二、原理紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值(比移)來(lái)表示的：…在一定的條件下某種物質(zhì)的只Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。三、器材1.層析缸2.毛細(xì)管3.噴霧器4.培養(yǎng)皿5.層析濾紙(新華一號(hào))四、試劑1、擴(kuò)展劑650mL4份水飽和的正丁醇和1份醋酸的混合物。將20mL正丁醇和5mL冰醋酸放入分液漏斗中，與15mL水混合，充分振蕩，靜置后分層，放出下層水層。取漏斗內(nèi)的擴(kuò)展劑約5mL置于小燒杯中做平衡溶劑，其余的倒人培養(yǎng)皿中備用。2、氨基酸溶液0.5％的賴氨酸、脯氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它們的混合液(各組份濃度均為0.5％)。各5mL3、顯色劑50～100mL1％水合茚三酮正丁醇溶液。五、操作1.將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。2.取層析濾紙(長(zhǎng)22cm、寬14cm)一張。在紙的—端距邊緣2～3cm處用用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔2cm作一記號(hào)如圖。3.點(diǎn)樣用毛細(xì)管將各氨基酸樣品分別點(diǎn)在這6個(gè)位置上，干后再點(diǎn)一次。每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑最大不超過(guò)3mm。4.擴(kuò)展用線將濾紙縫成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將盛有約20mL擴(kuò)展劑的培養(yǎng)皿迅速置于密閉的層析缸中，并將濾紙直立于培養(yǎng)皿中(點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線1cm)。待溶劑上升15—20cm時(shí)即取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界線，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干。5.顯色用噴霧器均勻噴上O.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分鐘(100℃)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn)。6.計(jì)算各種氨基酸的只Rf值。思考題1、何謂紙層析法?2、何謂片Rf值?影響Rf值的主要因素是什么?3、怎樣制備擴(kuò)展劑?層析缸中平衡溶劑的作用是什么？實(shí)驗(yàn)四酶的特性一、目的加深對(duì)酶的性質(zhì)的認(rèn)識(shí)。二、內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)由溫度對(duì)酶活力的影響；pH對(duì)酶活力的影響；酶的激活劑及抑制劑；酶的?！?組實(shí)驗(yàn)組成。(一)溫度對(duì)酶活力的影響1、原理酶的催化作用受溫度的影響。在最適溫度下，酶的反應(yīng)速度最高。大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為37-40℃，植物酶的最適溫度為50～60℃。酶對(duì)溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān)。有些酶的干燥制劑，雖加熱到100℃，其活性井無(wú)明顯改變，但在100℃的溶液中卻很快地完全失去活性。低溫能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。2、器材(1)試管及試管架(2)恒溫水浴(3)冰浴(4)沸水浴3、試劑和材料(1)0.2％淀粉的0.3％氯化鈉溶液150mL需新鮮配制(2)稀釋200倍的唾液50mL用蒸餾水漱口，以清除食物殘?jiān)俸豢谡麴s水，半分鐘后使其流入量筒并稀釋200倍(稀釋倍數(shù)可根據(jù)各人唾液淀粉酶活性調(diào)整)，混勻備用。(3)碘化鉀—碘溶液50mL將碘化鉀20g及碘l0g溶于100mL水中。使用前稀釋10倍。4、操作淀粉和可溶性淀粉遇碘呈藍(lán)色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色或紅色。最簡(jiǎn)單的糊精遇碘不呈顏色，麥芽糖遇碘也不呈色。在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來(lái)判斷。取3支試管，編號(hào)后按下表加入試劑：管號(hào)123淀粉溶液(mL)1.51.51.5稀釋唾液(mL)11—煮拂過(guò)的稀釋唾液(mL)——1搖勻后，將1、3號(hào)兩試管放入37℃恒溫水浴中，2號(hào)試管放人冰水中。10分鐘后取出(將2號(hào)管內(nèi)液體分為兩半)，用碘化鉀—碘溶液來(lái)檢驗(yàn)1、2、3號(hào)管內(nèi)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。記錄并解釋結(jié)果，將2號(hào)管剩下的一半溶液放人37℃水浴中繼續(xù)保溫10分鐘后，再用碘液實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如何?(二)pH對(duì)酶活性的影響1、原理酶的恬力受環(huán)境pH的影響極為顯著。不同酶的最適pH值不同。本實(shí)驗(yàn)觀察pH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響，唾液淀粉酶的最適pH約為6.8。2．器材(1)試管及試管架(2)吸管(3)滴管(4)50mL錐形瓶5)恒溫水浴3、試劑和材料(1)新配制的溶于0.3％氯化鈉的0.5％淀粉溶液250mL(2)稀釋200倍的新鮮唾液100mL(3)0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液600mL(4)0.1mol/L檸檬酸溶液400Ml(5)碘化鉀—碘溶液50mL(6)pH試紙pH=5、pH=5.8、pH=6.8、pH=8四種4、操作取4個(gè)標(biāo)有號(hào)碼的50mL錐形瓶。用吸管按下表添加0.2mol／L磷酸氫二鈉溶液和0.1mol/L檸檬酸溶液以制備pH5.0～8.0的4種緩沖液。錐形瓶號(hào)碼0.2mol／L磷酸氫二鈉0.1mol/L檸檬酸pH15.154.855.026.053.955.837.722.286.849.720.288.0從4個(gè)錐形瓶中各取緩沖液3mL，分別注入4支帶有號(hào)碼的試管中，隨后于每個(gè)試管中添加0.5％淀粉溶液2mL和稀釋200倍的唾液2mL。向各試管中加入稀釋唾液的時(shí)間間隔各為1分鐘。將各試管中物質(zhì)混勻，并依次置于37℃恒溫水浴中保溫。待向第4管加入唾液2分鐘后，每隔1分鐘由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化鉀—碘溶液，檢驗(yàn)淀粉的水解程度。待混合液變?yōu)樽攸S色時(shí)，向所有試管依次添加1—2滴碘化鉀—碘溶液。添加碘化鉀—碘溶液的時(shí)間間隔，從第1管起，亦均為1分鐘。觀察各試管中物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色，分析pH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響。三)唾液淀粒酶的活化和抑制1、原理酶的活性受活化劑或抑制劑的影響。氯離子為唾液淀粉酶的活化劑，銅離子為其抑制劑。2、器材(1)恒溫水浴(2)試管及試管架3、試劑和材料(1)0.1％淀粉溶液150mL(2)稀釋200倍的新鮮唾液150mL(3)1％氯化鈉溶液50mL(4)1％硫酸銅溶液50mL(5)1％硫酸鈉溶液50mL(6)碘化鉀—碘溶液100mL4、操作管號(hào)12340.1％淀粉溶液(mL)1.51.51.51.5稀釋唾液(mL)0.50.50.50.5l％硫酸銅溶液(mL)0.5———1％氯化鈉溶掖(mL)—0.5——1％硫酸鈉溶液(mL)——0.5—蒸餾水(mL)———0.537℃恒溫水浴、保溫10分鐘碘化鉀—碘溶液(滴)2～32～32～32～3現(xiàn)象解釋結(jié)果；說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)第3管的意義。（四）酶的專一姓1.原理酶具有高度的專一性。本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶和蔗糖酶對(duì)淀粉和蔗糖的作用為例，來(lái)說(shuō)明酶的專一性。淀粉和蔗糖無(wú)還原性。唾液淀粉酶水解淀粉生成有還原性的麥芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解產(chǎn)生還原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用Benedict試劑檢查糖的還原性。2、器材．(1)恒溫水浴(2)沸水浴(3)試管及試管架3、試劑和材料(1)2％蔗糖溶液150mL(2)溶于0.3％氯化鈉的1%淀粉溶液150mL需新鮮配制間隔各為1分鐘。將各試管中物質(zhì)混勻，并依次置于37℃恒溫水浴中保溫。(3)稀釋200倍的新鮮唾液100mL(4)蔗糖酶溶液100mL將啤酒廠的鮮酵母用水洗滌2～3次(離心法)，然后放在濾紙上自然干燥。取干酵母100g，置于乳缽內(nèi)，添加適量蒸餾水及少量細(xì)沙，用力研磨提取約1小時(shí)，再加蒸餾水使總體積約為原體積的10倍。離心，將上清液保存于冰箱中備用。(5)Benedict氏試劑200mL無(wú)水硫酸銅17.4g溶于100mL熱水中，冷卻后稀釋至150mL。取檸檬酸鈉173g，無(wú)水碳酸鈉100g和600mL水共熱，溶解后冷卻并加水至850mL。再將冷卻的150mL硫酸銅溶液傾入。本試劑可長(zhǎng)久保存。4、操作（1）淀粉酶的專一性管號(hào)1234561％淀粉溶液(滴)4—4—4—2%蔗糖溶液(滴)—4—4—4稀釋唾液(mL)——11——煮沸過(guò)的稀釋唾液(mL)————11蒸餾水(mL)11————37℃恒溫水浴15分鐘Benedict試劑(mL)111111沸水浴2—3分鐘│現(xiàn)象解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果(提示：唾液除含淀粉酶外還含有少量麥芽糖酶)。（2）蔗糖酶的專一性管號(hào)1234561％淀粉溶液(滴)4—4—4—2%蔗糖溶液(滴)—4—4—4蔗糖酶溶液(mL)——11——煮沸過(guò)的蔗糖酶溶液(mL)————11蒸餾水(mL)11————37℃恒溫水浴15分鐘Benedict試劑(mL)111111沸水浴2—3分鐘│現(xiàn)象解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。思考題1、什么是酶的最適溫度及其應(yīng)用意義?2、什么是酶反應(yīng)的最適pH?對(duì)酶活性有什么影響?3、什么是酶的活化劑?4、什么是酶的抑制劑?與變性劑有何區(qū)別?5、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如何證明酶的專一性?實(shí)驗(yàn)五菜花中核酸的分離和鑒定一、目的初步掌握從菜花中分離核酸的方法，和RNA、DNA的定性檢定。二、原理用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低溫下抽提菜花勻漿，以除去酸溶性小分子物質(zhì)，再用有機(jī)溶劑，如乙醇、乙醚等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物質(zhì)。最后用濃鹽溶液(10％氯化鈉溶液)和0.5mol／L高氯酸(70℃)分別提取DNA和RNA，再進(jìn)行定性檢定。由于核糖和脫氧核糖有特殊的顏色反應(yīng)，經(jīng)顯色后所呈現(xiàn)的顏色深淺在一定范圍內(nèi)和樣品中所含的核糖和脫氧核糖的量成正比，因此可用此法來(lái)定性、定量測(cè)定核酸。1、核糖的測(cè)定測(cè)定核糖的常用方法是苔黑酚(即3，5—二羥甲苯法)。當(dāng)含有核糖的RNA與濃鹽酸及3，5—二羥甲苯在沸水浴中加熱10—20分鐘后，有綠色物產(chǎn)生，這是因?yàn)镽NA脫嘌呤后的核糖與酸作用生成糠醛，后者再與3，5—二羥甲苯作用產(chǎn)生綠色物質(zhì)。DNA、蛋白質(zhì)和粘多糖等物質(zhì)對(duì)測(cè)定有干擾作用。2．脫氧核糖的測(cè)定測(cè)定脫氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脫氧核糖的DNA在酸性條件下和二苯胺在沸水浴中共熱10分鐘后，產(chǎn)生藍(lán)色。這是因?yàn)镈NA嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω—羥基—6—酮基戊醛，它再和二苯胺作用產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。100℃DNA+二苯胺試劑藍(lán)色物此法易受多種糖類及其衍生物和蛋白質(zhì)的干擾。上述兩種定糖的方法準(zhǔn)確性較差，但快速、簡(jiǎn)便，能鑒別DNA與RNA，是檢定核酸、核苷酸的常用方法。三、器材1．恒溫水浴2．電爐3，離心機(jī)4．布氏漏斗裝置5．吸管6．燒杯7．量筒8．剪刀四、試劑和材料1、新鮮菜花2、95％已醇600mL3、丙酮400mL4、5％高氯酸溶液200mL5、0.5mo1/L高氯酸溶液200mL6、10％氯化鈉溶液400mL7、標(biāo)準(zhǔn)RNA溶液(5mg／l00mL)50mL8、標(biāo)準(zhǔn)DNA溶液(15mg／100mL)50mL9．粗氯化鈉250g10．海砂5g11．二苯胺試劑60mL將1g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加入2.75mL濃硫酸(置冰箱中可保存6個(gè)月。使用前，在室溫下?lián)u勻)。12．三氯化鐵濃鹽酸溶液25mL13．苔黑酚乙醇溶液200mL1、核酸的分離(1)取菜花的花冠20g，剪碎后置于研缽中，加入20mL95%乙醇和400mg海砂，研磨成勻漿。然后用布氏漏斗抽濾，棄去濾液。(2)濾渣中加入20mL丙酮，攪拌均勻，抽濾，棄去濾液。(3)再向?yàn)V渣中加入20mL丙酮，攪拌5分鐘后抽干(用力壓濾渣，盡量除去丙酮)。(4)在冰鹽浴中，將濾渣懸浮在預(yù)冷的20mL5％高氯酸溶液中。攪拌，抽濾，棄去濾液。(5)將濾渣懸浮于20mL95％乙醇中，抽濾，棄去濾液。(6)濾渣中加人20mL丙酮，攪拌5分鐘，抽濾至于，用力壓濾渣盡量除去丙酮。(7)將干燥的濾渣重新懸浮在40mL10％氯化鈉溶液中。在沸水浴中加熱15分鐘。放置，冷卻，抽濾，留濾液。并將此操作重復(fù)進(jìn)行一次。將兩次濾液合并，為提取物一。(8)將濾渣重新懸浮在20mL0.5mol／L高氯酸溶液中。加熱到70℃、保溫20分鐘(恒溫水浴)后抽濾，留濾液(提取物二)?！?．RNA，DNA的定性檢定二苯胺反應(yīng)管號(hào)12345蒸餾水(mL)1--------DNA溶液(mL)--1------RNA溶液(mL)----1----提取物一(mL)------1--攝取物二(mL)--------1二苯胺試劑（mL）22222放沸水浴中10分鐘后的現(xiàn)象（2）苔黑酚反應(yīng)管號(hào)12345蒸餾水(mL)1--------DNA溶液(mL)--1------RNA溶液(mL)----1----提取物一(mL)------1--攝取物二(mL)--------1三氯化鐵濃鹽酸溶液(mL)22222苔黑酚乙醇溶液(mL)0.20.20.20.20.2放沸水浴中10分鐘后的現(xiàn)象思考題1．核酸分離時(shí)為什么要除去小分子物質(zhì)和脂類物質(zhì)?本實(shí)驗(yàn)是怎樣除掉的?2．實(shí)驗(yàn)中呈色反應(yīng)時(shí)RNA為什么能產(chǎn)生綠色復(fù)合物?DNA產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)?實(shí)驗(yàn)六紫外分光光度法測(cè)定核酸的含量一、目的1.了解紫外分光光度計(jì)的基本原理和使用方法。2.學(xué)習(xí)用紫外分光光度法測(cè)定核酸含量的原理和操作方法。二、原理核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波長(zhǎng)處。一般在A260nm波長(zhǎng)下，每mL含1μgDNA溶液的光吸收值約為0.020，每mL含1μgRNA溶液的光吸收值約為0.022。故測(cè)定未知濃度RNA或DNA溶液A260nm波長(zhǎng)的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。此法操作簡(jiǎn)便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測(cè)定誤差較大，故應(yīng)設(shè)法預(yù)先除去。三、器材1.分析天平2.離心機(jī)3.容量瓶4.紫外分光光度計(jì)5.吸管6.冰浴或冰箱四、試劑1、5%～6%氨水2、鉬酸銨—高氯酸試劑(沉淀劑)如配制200mL可在193mL蒸餾水中加入7mL70%高氯酸和0.5g鉬酸銨。五、操作1.用分析天平準(zhǔn)確稱取待測(cè)的核酸樣品500mg，加少量蒸餾水調(diào)成糊狀，再加入少量的水稀釋。然后用5%～6%氨水調(diào)至pH7，定容到50mL。2.取2支離心管，向第一支管內(nèi)加人2mL樣品溶液和2mL蒸餾水；向第二支管內(nèi)加入2mL樣品溶液和2mL沉淀劑，以除去大分子核酸作為對(duì)照?；靹?。在冰浴或冰箱中放置30分鐘后離心(3000r／min，10分鐘)。從第一管和第二管中分別吸取0.5mL上清液，用蒸餾水定容到50mL。用光程為1cm的石英比色杯，于260mn波長(zhǎng)處測(cè)其光吸收值(A1和A2)。六、計(jì)算如果已知待測(cè)的核酸樣品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，即可將樣品配制成一定濃度的溶液(20～50μg/mL)在紫外分光光度計(jì)上直接測(cè)定。實(shí)驗(yàn)七總氮量的測(cè)定—?jiǎng)P氏定氮法目的學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理和操作技術(shù)。原理常用凱氏定氮法測(cè)定天然有機(jī)物（如蛋白質(zhì)、核酸及氨基酸）的含氮量。含氮的有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳?xì)湓乇谎趸啥趸己退?，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過(guò)程通常稱為“消化”。但是，此反應(yīng)進(jìn)行的比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。甘氨酸的消化過(guò)程表示如下：CHCH2NH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+NH32NH3+H2SO4—————（NH4）2SO4弄濃濃堿可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借水蒸氣將產(chǎn)生的氨蒸留到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氫離子濃度降低，然后用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來(lái)的氫離子濃度為止，最后根據(jù)使用的標(biāo)準(zhǔn)酸的摩爾數(shù)計(jì)算出待測(cè)物中的總氮量。三、儀器1.50mL消化管或100mL凱氏燒瓶2.改進(jìn)型凱氏定氮儀3．50mL容量瓶4．3mL微量滴定管5．分析天平6．烘箱7．電爐8．1000mL蒸餾燒瓶9.小玻璃珠10．遠(yuǎn)紅外消煮爐四、試劑1.消化液(過(guò)氧化氫：濃硫酸：水二3：2：1)200mL2．粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物16gK2S04與CuS04·5H20以3：1配比研磨混合。3．30％氫氧化鈉溶液1000mL4．2％硼酸溶液500mL5．標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(約0．01mol／L)600mL6．混合指示劑(田氏指示劑)50mL由50mL0．1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200mL0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。這種指示劑酸性時(shí)為紫紅色，堿性時(shí)為綠色。變色范圍很窄且靈敏。7．市售標(biāo)準(zhǔn)面粉和富強(qiáng)粉.各2g五、操作方法改進(jìn)型凱氏定氮儀改進(jìn)型凱氏定氮裝置是在傳統(tǒng)凱氏定氮裝置的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上改裝而成，其特點(diǎn)是將蒸汽發(fā)生器、蒸餾器和冷凝器組成一個(gè)整體，體積小，安裝容易，操作簡(jiǎn)便。改進(jìn)型凱氏蒸餾裝置的結(jié)構(gòu)如圖所示。圖改進(jìn)型凱氏蒸餾裝置1.水蒸汽發(fā)生器2.反應(yīng)室3．水蒸汽排氣孔4．排水排氣孔5.外源水入口6．進(jìn)樣口7．加樣漏斗8．冷凝器9．冷凝器出口10.自來(lái)水入口11．通氣室出口13.通氣室出口14．排水柱15．排水柱入口16．排水柱入口17.冷凝水和廢水出口①②③自由夾可分成3部分來(lái)敘述：(1)水蒸汽發(fā)生器和反應(yīng)室水蒸汽發(fā)生器有3個(gè)開口，3、4、5，反應(yīng)室有1個(gè)開口，6。2)冷凝器和通氣室冷凝器有2個(gè)開口，9、10，通氣室有有2個(gè)開口，12、13(3)排水柱排水柱有3個(gè)開口，15、16、17。安裝時(shí)，先將主體部分固定在支架上，其底部放上電爐。然后將5與13；4與16；12與15；6與7用橡皮管連接，并放上自由夾。最后長(zhǎng)橡膠管連接進(jìn)水口10和出水口172．樣品處理某一固體樣品中的含氮量是用l00g該物質(zhì)(干重)中所含氮的g數(shù)來(lái)表示(%)。因此在定氮前，應(yīng)先將固體樣品中的水分除掉。一般樣品烘干的溫度都采用105℃，因?yàn)榉怯坞x的水都不能在100℃以下烘干。在稱量瓶中稱人一定量磨細(xì)的樣品，然后置于105℃的烘箱內(nèi)干燥4小時(shí)。用坩堝鉗將稱量瓶放入干燥器內(nèi)，待降至室溫后稱重，按上述操作繼續(xù)烘干樣品。每干燥1小時(shí)后，稱重—次，直到兩次稱量數(shù)值不變，即達(dá)恒重。精確稱取0.1g左右的干燥面粉作為本實(shí)驗(yàn)的樣品。3．消化取4個(gè)100mL凱氏燒瓶或50mL消化管并標(biāo)號(hào)。各加1顆玻璃珠，在1及2號(hào)瓶中各加樣品0.1g，催化劑(K2S04—CuS04·5H20)200mg，消化液5mL。注意加樣品時(shí)應(yīng)直接送人瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3及4號(hào)瓶中各加0.1mL蒸餾水和與1及2號(hào)瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對(duì)照，用以測(cè)定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)。每個(gè)瓶口放一漏斗，在通風(fēng)櫥內(nèi)的電爐上消化。在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸待瓶?jī)?nèi)水汽蒸完，硫酸開始分解并放出S02白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。消化完畢，等燒瓶中溶物冷卻后，加蒸餾水10mL(注意慢加，隨加隨搖)。冷卻后將瓶中溶物傾入50mL的容量瓶中，并以蒸餾水洗燒瓶數(shù)次，將洗液并人量瓶。用水稀釋到刻度，混勻備用。4，蒸餾(1)蒸餾器的洗滌接通冷凝水，先向蒸汽發(fā)生器中加入一定量的水(以排水口高度為宜)用電爐將其加熱燒開。然后將蒸餾水由加樣室加入反應(yīng)室，水即自動(dòng)吸出，或者將電爐移開片刻，或者打開自由夾，使冷水進(jìn)入蒸汽發(fā)生器，都可使反應(yīng)室中的水自動(dòng)吸出，如此反復(fù)清洗3—5次。清洗后在冷凝管下端放一錐形瓶盛有5mL，12％硼酸溶液和1～2滴指示劑的混合液。蒸餾數(shù)分鐘后，觀察錐形瓶?jī)?nèi)溶液是否變色，如不變色則表明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。(2)蒸餾取50mL錐形瓶數(shù)個(gè)，各加入5mL12％硼酸溶液和1～2滴指示劑，溶液呈淡紫色，用表面皿覆蓋備用。關(guān)閉冷凝水，打開自由夾，使蒸汽發(fā)生器與大氣相通。將一個(gè)盛有硼酸和指示劑溶液的錐形瓶放在冷凝器下，并使冷凝器下端浸沒在液體內(nèi)。用移液管取5mL消化液，細(xì)心地由加樣室下端加入反應(yīng)室，隨后將已準(zhǔn)備好的30％NaOH溶液5mL加入，關(guān)閉自由夾，在加樣漏斗中加少量水做水封。關(guān)閉自由夾打開冷凝水(注意不要過(guò)快過(guò)猛，以免水溢出)。當(dāng)觀察到錐形瓶中的溶液由紫變綠時(shí)(約2—3分鐘)，開始計(jì)時(shí)，蒸餾3分鐘，移開錐形瓶，使冷凝器下端離開液面約1cm，同時(shí)用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外側(cè)，繼續(xù)蒸餾1分鐘，取下錐形瓶，用表面皿覆蓋瓶口。蒸餾完畢后，應(yīng)立即清洗反應(yīng)室，方法如前所述。打開自由夾，將水放出，再加熱，再清洗，如此3—5次。最后將自由夾①、③同時(shí)打開，將蒸汽發(fā)生器內(nèi)的全部廢水換掉。關(guān)閉夾子，再使蒸汽通過(guò)整個(gè)裝置數(shù)分鐘后，繼續(xù)下一次蒸餾。待樣品和空白消化液均蒸餾完畢，同時(shí)進(jìn)行滴定。(3)滴定全部蒸餾完畢后，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠變淡紫色為滴定終點(diǎn)。(4)計(jì)算c為標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液摩爾濃度；v1為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均mL數(shù)；v2為滴定空白消化液用去的鹽酸溶液平均mL數(shù)；w為樣品重量(g)。14為氮的相對(duì)量子質(zhì)量。若測(cè)定的樣品含氮部分只是蛋白質(zhì)，則，樣品中蛋白質(zhì)含量(％)=總氮量x6．25若樣品中除有蛋白質(zhì)外，尚有其他含氮物質(zhì)，則需向樣品中加入三氯乙酸，然后測(cè)定未加三氯乙酸的樣品及加入三氯乙酸后樣品上清液中的含氮量，得出非蛋白氮及總氮量，從而計(jì)算出蛋白氮，再進(jìn)一步算出蛋白質(zhì)含量。蛋白氟=總氮—非蛋白氮蛋白質(zhì)含量(g%)=蛋白氮×6.25思考題1、何謂消化?如何判斷消化終點(diǎn)?2、．在實(shí)驗(yàn)中加入粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物的作用是什么?3．固體樣品為什么要烘干?4．蒸餾時(shí)冷凝管下端為什么要浸沒在液體中?5．如何證明蒸餾器洗滌干凈?6．本實(shí)驗(yàn)應(yīng)如何避免誤差?實(shí)驗(yàn)八血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳目的學(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的操作，了解電泳技術(shù)的一般原理二、原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成，它具有均一的泡沫樣的結(jié)構(gòu)，厚度僅120μm，有強(qiáng)滲透性，對(duì)分子移動(dòng)無(wú)阻力，作為區(qū)帶電泳的支持物進(jìn)行蛋白電泳有簡(jiǎn)便、快速、樣品用量少，應(yīng)用范圍廣，分離清晰，沒有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白，糖蛋白和同工酶的分離及用在免疫電泳中。三、器材1．醋酸纖維薄膜(2×8cm)2．常壓電泳儀3．點(diǎn)樣器(市售或自制)4．培養(yǎng)皿(染色及漂洗用)5．粗濾紙6，玻璃板7．竹鑷8．白磁反應(yīng)板四、試劑1．巴比妥緩沖液(pH8.6，離子強(qiáng)度0.07)1000mL：巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，加水1000mL。2．染色液300mL含氨基黑10B0.25g，甲醇50mL，冰醋酸10mL，水40mL(可重復(fù)使用)。3．漂洗液2000mL含甲醇或乙醇45mL、冰醋酸5mL、水50mL。4，透明液300mL含無(wú)水乙醇7份，冰醋酸3份。五、操作．浸泡用鑷子取醋酸纖維薄膜1張(識(shí)別出光澤面與無(wú)光澤面，并在角上用筆做上記號(hào))放在緩沖液中浸泡20分鐘。2．點(diǎn)樣把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層粗濾紙內(nèi)吸干多余的液體，然后平鋪在玻璃板上(無(wú)光澤面朝上)，將點(diǎn)樣器先在放置在白磁反應(yīng)板上的血清中沾一下，再在膜條一端2—3cm處輕輕地水平地落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血清樣品。3．電泳在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的液面等高，將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上(先剪裁尺寸合適的濾紙條，取雙層濾紙條附著在電泳槽的支架上，使它的一端與支架的前沿對(duì)齊，而另一端浸入電極槽的緩沖液內(nèi)。用緩沖液將濾紙全部潤(rùn)濕并驅(qū)除氣泡，使濾紙緊貼在支架上，即為濾紙橋(它是聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”)。膜條上點(diǎn)樣的一端靠近負(fù)極。蓋嚴(yán)電泳室。通電。調(diào)節(jié)電壓至160V，電流強(qiáng)度0.4—0.7mA／cm(毫安／厘米)膜寬，電泳時(shí)間約為25分鐘。酸纖維裹薄膜電泳裝置示意圖4．染色電泳完畢后將膜條取下并放在染色液中浸泡10分鐘。5．漂洗將膜條從染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗數(shù)次至無(wú)蛋白區(qū)底色脫凈為止，可得色帶清晰的電泳圖譜。醋酸纖維薄膜血清蛋白電泳圖譜從左至右，依次為：血清清蛋白α1，球蛋白，α2球蛋白，β球蛋白，γ球蛋白定量測(cè)定時(shí)可將膜條用濾紙壓平吸干，按區(qū)帶分段剪開，分別浸在體積0.4mol/L氫氧化鈉溶液中半小時(shí)，并剪取相同大小的無(wú)色帶膜條作空白對(duì)照，在A650nm進(jìn)行比色?；蛘邔⒏稍锏碾娪緢D譜膜條放人透明液中浸泡2～3分鐘后取出貼于潔凈玻璃板上，干后即為透明的薄膜圖譜，可用光密度計(jì)直接測(cè)定。思考題1．用醋酸纖維薄膜做電泳支持物有什么優(yōu)點(diǎn)?2．電泳圖譜清晰的關(guān)鍵是什么?如何正確操作?【測(cè)試題】一、名詞解釋1.生物氧化

2.呼吸鏈

3.氧化磷酸化

4.P/O比值5.解偶聯(lián)劑

6.高能化合物

7.細(xì)胞色素

8.混合功能氧化酶二、填空題9．琥珀酸呼吸鏈的組成成分有____、____、____、____、____。10．在NADH氧化呼吸鏈中，氧化磷酸化偶聯(lián)部位分別是____、____、____，此三處釋放的能量均超過(guò)____KJ。11．胞液中的NADH+H+通過(guò)____和____兩種穿梭機(jī)制進(jìn)入線粒體，并可進(jìn)入____氧化呼吸鏈或____氧化呼吸鏈，可分別產(chǎn)生____分子ATP或____分子ATP。12．ATP生成的主要方式有____和____。13．體內(nèi)可消除過(guò)氧化氫的酶有____、____和____。14．胞液中α-磷酸甘油脫氫酶的輔酶是____，線粒體中α-磷酸甘油脫氫酶的輔基是____。15．鐵硫簇主要有____和____兩種組成形式，通過(guò)其中的鐵原子與鐵硫蛋白中的____相連接。16．呼吸鏈中未參與形成復(fù)合體的兩種游離成分是____和____。17．FMN或FAD作為遞氫體，其發(fā)揮功能的結(jié)構(gòu)是____。18．參與呼吸鏈構(gòu)成的細(xì)胞色素有____、____、____、____、____、____。19．呼吸鏈中含有銅原子的細(xì)胞色素是____。20．構(gòu)成呼吸鏈的四種復(fù)合體中，具有質(zhì)子泵作用的是____、____、____。21．ATP合酶由____和____兩部分組成，具有質(zhì)子通道功能的是____，____具有催化生成ATP的作用。22．呼吸鏈抑制劑中，____、____、____可與復(fù)合體Ⅰ結(jié)合，____、____可抑制復(fù)合體Ⅲ，可抑制細(xì)胞色素c氧化酶的物質(zhì)有____、____、____。23．因輔基不同，存在于胞液中SOD為____，存在于線粒體中的SOD為____，兩者均可消除體內(nèi)產(chǎn)生的____。24．微粒體中的氧化酶類主要有____和____。三、選擇題Ａ型題25．氰化物中毒時(shí)被抑制的細(xì)胞色素是：A.細(xì)胞色素b560

B.細(xì)胞色素b566

C.細(xì)胞色素c1D.細(xì)胞色素c

E.細(xì)胞色素aa326．含有煙酰胺的物質(zhì)是：A.FMN

B.FAD

C.泛醌

D.NAD+

E.CoA27．細(xì)胞色素aa3除含有鐵以外，還含有：A.鋅

B.錳

C.銅

D.鎂

E.鉀28．呼吸鏈存在于：A.細(xì)胞膜

B.線粒體外膜

C.線粒體內(nèi)膜

D.微粒體

E.過(guò)氧化物酶體29．呼吸鏈中可被一氧化碳抑制的成分是：A.FAD

B.FMN

C.鐵硫蛋白

D.細(xì)胞色素aa3

E.細(xì)胞色素c30．下列哪種物質(zhì)不是NADH氧化呼吸鏈的組分？A.FMN

B.FAD

C.泛醌

D.鐵硫蛋白

E.細(xì)胞色素c31．在氧化過(guò)程中可產(chǎn)生過(guò)氧化氫的酶是：A.SOD

B.琥珀酸脫氫酶

C.細(xì)胞色素aa3

D.蘋果酸脫氫酶

E.加單氧酶32．哪種物質(zhì)是解偶聯(lián)劑？A.一氧化碳

B.氰化物

C.魚藤酮

D.二硝基苯酚

E.硫化氰33．ATP生成的主要方式是：A.肌酸磷酸化

B.氧化磷酸化

C.糖的磷酸化D.底物水平磷酸化

E.有機(jī)酸脫羧34．呼吸鏈中細(xì)胞色素排列順序是：A.b→c→c1→aa3→o2

B.c→b→c1→aa3→o2

C.c1→c→b→aa3→o2D.b→c1→c→aa3→o2

E.c→c1→b→aa3→o235．有關(guān)NADH哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？A.可在胞液中形成

B.可在線粒體中形成

C.在胞液中氧化生成ATPD.在線粒體中氧化生成ATP

E.又稱還原型輔酶Ⅰ36．下列哪種不是高能化合物？A.GTP

B.ATP

C.磷酸肌酸D.3-磷酸甘油醛

E.1,3-二磷酸甘油酸37．有關(guān)生物氧化哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？A.在生物體內(nèi)發(fā)生的氧化反應(yīng)

B.生物氧化是一系列酶促反應(yīng)C.氧化過(guò)程中能量逐步釋放

D.線粒體中的生物氧化可伴有ATP生成E.與體外氧化結(jié)果相同，但釋放的能量不同38．下列哪種物質(zhì)脫下的氫不進(jìn)入NADH呼吸鏈？A.異檸檬酸

B.β-羥丁酸

C.丙酮酸

D.脂酰輔酶A

E.谷氨酸39．由琥珀酸脫下的一對(duì)氫，經(jīng)呼吸鏈氧化可產(chǎn)生：A.1分子ATP和1分子水

B.3分子ATP

C.3分子ATP和1分子水D.2分子ATP和1分子水

E.2分子ATP和2分子水40．1分子丙酮酸徹底氧化生成水和二氧化碳可產(chǎn)生幾分子ATP？A.3

B.8

C.12

D.14

E.1541．呼吸鏈中不具質(zhì)子泵功能的是：A.復(fù)合體Ⅰ

B.復(fù)合體Ⅱ

C.復(fù)合體Ⅲ

D.復(fù)合體Ⅳ

E.以上均不具有質(zhì)子泵功能42．胞液中1分子乳酸徹底氧化可生成幾分子ATP？A.9或12

B.11或12

C.13或14

D.15或16

E.17或1843．關(guān)于線粒體內(nèi)膜外的H+濃度敘述正確的是：A.濃度高于線粒體內(nèi)

B.濃度低于線粒體內(nèi)

C.可自由進(jìn)入線粒體D.進(jìn)入線粒體需主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)

E.進(jìn)入線粒體需載體轉(zhuǎn)運(yùn)44．心肌細(xì)胞液中的NADH進(jìn)入線粒體主要通過(guò)：A.α-磷酸甘油穿梭

B.肉堿穿梭

C.蘋果酸—天冬氨酸穿梭D.丙氨酸－葡萄糖循環(huán)

E.檸檬酸－丙酮酸循環(huán)45．丙酮酸脫下的氫在哪個(gè)環(huán)節(jié)上進(jìn)入呼吸鏈？A.泛醌

B.NADH－泛醌還原酶

C.復(fù)合體Ⅱ

D.細(xì)胞色素c氧化酶

E.以上均不是46．關(guān)于高能磷酸鍵敘述正確的是：A.實(shí)際上并不存在鍵能特別高的高能鍵

B.所有高能鍵都是高能磷酸鍵C.高能磷酸鍵只存在于ATP

D.高能磷酸鍵僅在呼吸鏈中偶聯(lián)產(chǎn)生E.有ATP參與的反應(yīng)都是不可逆的47．機(jī)體生命活動(dòng)的能量直接供應(yīng)者是：A.葡萄糖

B.蛋白質(zhì)

C.乙酰輔酶A

D.ATP

E.脂肪48．下列哪種維生素參與構(gòu)成呼吸鏈？A.維生素A

B.維生素B1

C.維生素B2

D.維生素C

E.維生素D49．參與呼吸鏈遞電子的金屬離子是：A.鐵離子

B.鈷離子

C.鎂離子

D.鋅離子

E.以上都不是50．關(guān)于單加氧酶哪項(xiàng)是不正確的？A.參與膽色素的生成

B.參與膽汁酸的生成

C.參與類固醇激素的生成D.參與生物轉(zhuǎn)化

E.參與血紅素的生成51．離體肝線粒體中加入氰化物和丙酮酸，其P/O比值是：A.

2

B.

3

C.

0

D.

1

E.

452離體肝線粒體中加入異戊巴比妥和琥珀酸，其P/O比值是：A.

0

B.

1

C.

2

D.

3

E.

453．離體線粒體中加入抗霉素A，細(xì)胞色素C1處于：A.氧化狀態(tài)

B.還原狀態(tài)

C.結(jié)合狀態(tài)

D.游離狀態(tài)

E.活化狀態(tài)54．甲亢患者不會(huì)出現(xiàn)：A.耗氧增加

B.ATP生成增多

C.ATP分解減少

D.ATP分解增加

E.基礎(chǔ)代謝率升高55．下列哪種物質(zhì)不抑制呼吸鏈電子傳遞？A.二巰基丙醇

B.粉蝶霉素A

C.硫化氫

D.寡霉素

E.二硝基苯酚56．關(guān)于細(xì)胞色素哪項(xiàng)敘述是正確的？A.均為遞氫體

B.均為遞電子體

C.都可與一氧化碳結(jié)合并失去活性D.輔基均為血紅素

E.只存在于線粒體57．只催化電子轉(zhuǎn)移的酶類是：A.加單氧酶

B.加雙氧酶

C.不需氧脫氫酶D.需氧脫氫酶

E.細(xì)胞色素與鐵硫蛋白58．關(guān)于呼吸鏈哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？A.呼吸鏈中的遞氫體同時(shí)都是遞電子體B.呼吸鏈中遞電子體同時(shí)都是遞氫體C.呼吸鏈各組分氧化還原電位由低到高

D.線粒體DNA突變可影響呼吸鏈功能E.抑制細(xì)胞色素aa3可抑制整個(gè)呼吸鏈59．不含血紅素的蛋白質(zhì)是：A.細(xì)胞色素P450

B.鐵硫蛋白

C.肌紅蛋白

D.過(guò)氧化物酶

E.過(guò)氧化氫酶60．已知NAD+/NADH+H+和CoQ/CoQH2的氧化還原電位分別是-0.32和0.04，試求一對(duì)氫由NADH傳到CoQ時(shí)氧化磷酸化的能量利用率：A.30%

B.40%

C.44%

D.50%

E.68%61．下列哪種酶以氧為受氫體催化底物氧化生成水？A.丙酮酸脫氫酶

B.琥珀酸脫氫酶

C.SOD

D.黃嘌呤氧化酶

E.細(xì)胞色素C氧化酶62．下列哪種底物脫下的一對(duì)氫經(jīng)呼吸鏈氧化生成水，其P/O比值約為3？A.琥珀酸

B.脂酰輔酶A

C.α-磷酸甘油

D.丙酮酸

E.以上均不是63．關(guān)于超氧化物歧化酶哪項(xiàng)是不正確的？A.可催化產(chǎn)生超氧離子

B.可消除超氧離子

C.含金屬離子輔基D.可催化產(chǎn)生過(guò)氧化氫

E.存在于胞液和線粒體中Ｂ型題（64~67）

A.磷酸肌酸

B.CTP

C.UTP

D.TTP

E.GTP64．用于蛋白質(zhì)合成的直接能源是：65．用于卵磷脂合成的直接能源是：66．用于糖原合成的直接能源是：67．高能磷酸鍵的貯存形式是：（68~74）

A.細(xì)胞色素aa3

B.細(xì)胞色素b560

C.細(xì)胞色素P450D.細(xì)胞色素c1

E.細(xì)胞色素c68．在線粒體中將電子傳遞給氧的是：69．在微粒體中將電子傳遞給氧的是：70．參與構(gòu)成呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ的是：71．參與構(gòu)成呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ的是：72．參與構(gòu)成呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ的是：73．與線粒體內(nèi)膜結(jié)合不緊密易于分離的是：74．與單加氧酶功能有關(guān)的是：（75~79）

A.氰化物

B.抗霉素A

C.寡霉素

D.二硝基苯酚

E.異戊巴比妥75．可與ATP合酶結(jié)合的是：76．氧化磷酸化抑制劑是：77．氧化磷酸化解偶聯(lián)劑是：78．細(xì)胞色素C氧化酶抑制劑是：79．可抑制呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ，阻斷電子傳遞的是：（80~84）A.異咯嗪環(huán)

B.尼克酰胺

C.苯醌結(jié)構(gòu)D.鐵硫簇

E.鐵卟啉80．鐵硫蛋白傳遞電子是由于其分子中含：81．細(xì)胞色素中含有：82．FMN發(fā)揮遞氫體作用的結(jié)構(gòu)是：83．NAD+發(fā)揮遞氫體作用的結(jié)構(gòu)是：84．輔酶Q屬于遞氫體是由于分子中含有：Ｘ型題85．下列屬于高能化合物的是：A.乙酰輔酶A

B.ATP

C.磷酸肌酸D.磷酸二羥丙酮

E.磷酸烯醇式丙酮酸86．呼吸鏈中氧化磷酸化的偶聯(lián)部位有：A.NAD+→泛醌

B.泛醌→細(xì)胞色素b

C.泛醌→細(xì)胞色素c

D.FAD→泛醌

E.細(xì)胞色素aa3→O287．關(guān)于細(xì)胞色素?cái)⑹稣_的有：A.均以鐵卟啉為輔基

B.鐵卟啉中的鐵離子的氧化還原是可逆的C.均為電子傳遞體

D.均可被氰化物抑制

E.均可為一氧化碳抑制88．能以NADP+為輔酶的酶是：A.琥珀酸脫氫酶

B.谷氨酸脫氫酶

C.6-磷酸葡萄糖脫氫酶D.蘋果酸酶

E.丙酮酸脫氫酶89．丙酮酸在徹底氧化時(shí)生成二氧化碳的反應(yīng)有：A.丙酮酸脫氫酶催化的反應(yīng)

B.異檸檬酸脫氫酶催化的反應(yīng)C.α-戊二酸脫氫酶催化的反應(yīng)

D.琥珀酸脫氫酶催化的反應(yīng)E.蘋果酸脫氫酶催化的反應(yīng)90．線粒體外生物氧化體系的特點(diǎn)有：A.氧化過(guò)程不伴有ATP生成

B.氧化過(guò)程伴有ATP生成C.與體內(nèi)某些物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化有關(guān)

D.僅存在于微粒體中E.僅存在于過(guò)氧化物酶體中91．下列哪些底物脫下的氫可被FAD接受？A.脂酰輔酶A

B.β-羥脂酰輔酶A

C.琥珀酸D.α-磷酸甘油

E.

3-磷酸甘油醛92．影響氧化磷酸化的因素有：A.寡霉素

B.二硝基苯酚

C.氰化物

D.ATP濃度

E.胰島素93．細(xì)胞色素P450的作用有：A.傳遞電子

B.加氫

C.加單氧

D.加雙氧

E.脫羧94．下列哪些物質(zhì)脫下的氫可進(jìn)入NADH氧化呼吸鏈？A.異檸檬酸

B.α-酮戊二酸

C.蘋果酸

D.琥珀酸

E.丙酮酸95．關(guān)于ATP合酶下列哪些敘述是正確的？A.位于線粒體內(nèi)膜，又稱復(fù)合體Ⅴ

B.由F1和F0兩部分組成C.F0是質(zhì)子通道

D.生成ATP的催化部位在F1的β亞基上E.F1呈疏水性，嵌在線粒體內(nèi)膜中96．關(guān)于輔酶Q哪些敘述是正確的？A.是一種水溶性化合物

B.其屬醌類化合物

C.其可在線粒體內(nèi)膜中迅速擴(kuò)散

D.不參與呼吸鏈復(fù)合體E.是NADH呼吸鏈和琥珀酸呼吸鏈的交匯點(diǎn)四、問(wèn)答題97．試比較生物氧化與體外物質(zhì)氧化的異同。98．描述NADH氧化呼吸鏈和琥珀酸氧化呼吸鏈的組成、排列順序及氧化磷酸化的偶聯(lián)部位。99．試計(jì)算NADH氧化呼吸鏈和琥珀酸氧化呼吸鏈的能量利用率。100．試述影響氧化磷酸化的諸因素及其作用機(jī)制。101．試述體內(nèi)的能量生成、貯存和利用【參考答案】一、名詞解釋1．物質(zhì)在生物體內(nèi)進(jìn)行的氧化反應(yīng)稱生物氧化。2．代謝物脫下的氫通過(guò)多種酶與輔酶所催化的連鎖反應(yīng)逐步傳遞，最終與氧結(jié)合為水，此過(guò)程與細(xì)胞呼吸有關(guān)故稱呼吸鏈。3．代謝物脫下的氫經(jīng)呼吸鏈傳遞給氧生成水，同時(shí)伴有ADP磷酸化為ATP，此過(guò)程稱氧化磷酸化。4．物質(zhì)氧化時(shí)每消耗1摩爾氧原子所消耗的無(wú)機(jī)磷的摩爾數(shù)，即生成ATP的摩爾數(shù)，此稱P/O比值。5．使氧化與ATP磷酸化的偶聯(lián)作用解除的化學(xué)物質(zhì)稱解偶聯(lián)劑。6．化合物水解時(shí)釋放的能量大于21KJ/mol，此類化合物稱高能化合物。7．細(xì)胞色素是一類以鐵卟啉為輔基的催化電子傳遞的酶類，有特殊的吸收光譜而呈現(xiàn)顏色。8．混合功能氧化酶又稱加單氧酶，其催化一個(gè)氧原子加到底物分子上，另一個(gè)氧原子被氫還原為水。二、填空題9．復(fù)合體Ⅱ

泛醌

復(fù)合體Ⅲ

細(xì)胞色素c

復(fù)合體Ⅳ10．NADH→泛醌

泛醌→細(xì)胞色素c

細(xì)胞色素aa3→O2

30.511．α-磷酸甘油穿梭

蘋果酸－天冬氨酸穿梭

琥珀酸

NADH

2

312．氧化磷酸化

底物水平磷酸化13．過(guò)氧化氫酶

過(guò)氧化物酶

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶14．NAD+

FAD15．Fe2S2

Fe4S4

半胱氨酸殘基的硫16．泛醌

細(xì)胞色素c17．異咯嗪環(huán)18．b560

b562

b566

c

c1

aa3

19．細(xì)胞色素aa320．復(fù)合體Ⅰ

復(fù)合體Ⅲ

復(fù)合體Ⅳ21．F0

F1

F0

F122．魚藤酮

粉蝶霉素A

異戊巴比妥

抗霉素A

二巰基丙醇

一氧化碳

氰化物

硫化氫23．CuZn-SOD

Mn-SOD

超氧離子24．加單氧酶

加雙氧酶三、選擇題Ａ型題25.E