疑難血型鑒定與疑難配血

關于疑難血型鑒定與疑難配血血型----血液中各種成分的遺傳多態(tài)性標志----血型包括紅細胞血型、白細胞血型、血小板血型、血清蛋白型……等----稀有血型-----按美國稀有血型供者庫規(guī)定，在人群中的頻率<1‰者，稱稀有血型；在人群中的頻率<1/萬者，稱極稀有血型-----我國對稀有血型尚無明確標準，一般認為Rh陰性就屬稀有血型。第2頁,共62頁，2024年2月25日，星期天疑難血型----疑難血型是一種血型難以檢定或判定的現(xiàn)象----在血型分類中沒有疑難血型，文獻中也查不到疑難血型的定義。----一份樣本的血型檢定是否疑難，除了樣本本身的特殊性外，還與實驗室設備，技術人員水平和經驗等多種因素有關。----臨床輸血中，一般只涉及ABO和RhD血型，不涉及其他血型系統(tǒng)的疑難血型。第3頁,共62頁，2024年2月25日，星期天ABO血型：根據紅細胞膜上有無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型人血清中含抗B抗體，B型人血清中含抗A抗體，O型人血清中含抗A和抗B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：采用抗A和抗B試劑血清以凝集實驗來檢定紅細胞上有無對應的A抗原或B抗原。反定型：采用A型試劑紅細胞和B型試劑紅細胞檢測血清中有無相應的抗A抗體和抗B抗體。同時從正定型和反定型兩項實驗來檢定樣本的ABO血型。第4頁,共62頁，2024年2月25日，星期天O型紅細胞的作用可以提示抗-H(如孟買型)、某些IgM類不規(guī)則抗體，冷凝素或自身抗體。第5頁,共62頁，2024年2月25日，星期天ABO血型檢定方法----玻片法簡單、快速，基本沒有實驗條件的限制----試管法準確可靠----微板法適用于大批量樣本實驗不同的方法用途不同，實驗條件不同第6頁,共62頁，2024年2月25日，星期天玻片法:把混合物均勻涂開，使其覆蓋面積大約20mm×20mm。緩慢連續(xù)傾斜轉動玻片或紙片1分鐘～5分鐘，觀察結果。試管法：細胞的濃度2%-5%、最佳離心力（既不能大也不能小）結果觀察：上清液有無溶血現(xiàn)象，細胞扣有無凝集塊。微板法：細胞的濃度2%-5%、離心力（既不能大也不能?。┙Y果觀察：上清液有無溶血現(xiàn)象，細胞扣有無凝集塊。第7頁,共62頁，2024年2月25日，星期天用洗滌充分的紅細胞----可以去除紅細胞上黏附的蛋白的干擾----可以去除樣本血漿中含對試劑成分反應的物質。試管方法為經典方法離心機離心力校正。第8頁,共62頁，2024年2月25日，星期天疑難血型的特點--------正定型凝集弱于2+或反定型弱于1+（正常凝集3+—4+）----正反定型不一致----

抗-A，B與抗-A/抗-B的凝集強弱不平行或凝集呈mf。第9頁,共62頁，2024年2月25日，星期天干擾血型正確檢定的常見因素生理因素----年齡----ABO亞型----先天無抗體----冷凝集素第10頁,共62頁，2024年2月25日，星期天實驗技術原因----樣本混淆----靜脈輸液處采樣----試劑質量問題或漏加試劑----實驗操作不規(guī)范第11頁,共62頁，2024年2月25日，星期天臨床治療----大量輸液----靜脈輸入高分子藥物

靜脈輸入高分子藥物如甘露醇、右旋糖酐，羥乙基淀粉等，可導致紅細胞呈錢串狀，干擾結果判定。----近期輸過異型紅細胞（包括宮內輸血）或異型血漿----異基因造血干細胞移植

第12頁,共62頁，2024年2月25日，星期天疾病原因----白血病或某些其他造血系統(tǒng)惡性疾患，白血病血型“變異”變少不變多，疾病緩解后，血型抗原恢復。----肝臟疾病、結核病等血漿蛋白紊亂干擾ABO正定型呈錢串樣。----丙球蛋白過低血癥----真性紅細胞增多癥、多發(fā)性骨髓瘤等----不規(guī)則抗體----感染

革蘭陰性（G－）菌感染第13頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第14頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第15頁,共62頁，2024年2月25日，星期天啟動疑難血型分析思路推薦方法：三步法參考《輸血免疫學實驗技術》人衛(wèi)社第一步：排除人為因素或操作失誤。首先需要排除在技術上可能發(fā)生的錯誤，規(guī)范地做重復試驗----重新采集血樣----核對試劑、器材

核對試劑----復檢ABO血型第16頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第二步：了解臨床資料，分析可能的原因----病人年齡小于1歲或大于60歲嗎？----病人的丙球蛋白濃度減低嗎？----病人的診斷是白血病、腸道阻塞、胃癌、結腸或直腸癌瘤嗎？----病人做過骨髓移植手術嗎？----病人是一位經產婦嗎？----病人近期輸過血嗎？第17頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第三步：排除不可能的原因，歸納不能排除的原因，設計驗證試驗。舉例說明紅細胞抗原減弱或丟失----ABO亞型----正定型ABO抗原減弱紅細胞額外反應----亞型抗體----自身抗體----獲得性B抗原（類B）混合凝集（mf）第18頁,共62頁，2024年2月25日，星期天紅細胞抗原減弱或丟失----ABO亞型實驗結果：正定型與反定型不一致，正定型被檢紅細胞凝集弱解決辦法----加抗-AB、抗A1、抗-H（抗-AB、-H與抗-A或抗-B的凝集強弱不一致）第19頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共62頁，2024年2月25日，星期天----吸收/放散試驗----高效價的人源血清----血型物質檢測----DNA鑒定亞型統(tǒng)計？第22頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2.正定型ABO抗原減弱實驗結果：正定型與反定型不一致，或正定型被檢紅細胞凝集弱，或正定型呈mf樣。提示：臨床診斷白血病或其他造血系統(tǒng)惡性疾患（如MDS），一般反定型不受干擾，（不會增強或出現(xiàn)額外反應）偶見RhD抗原減弱者。一般病情緩解后血型抗原強度恢復第23頁,共62頁，2024年2月25日，星期天解決辦法----抗原-抗體增強技術（4℃孵育1小時替代離心看結果）-----加抗-AB----吸收/放散試驗----血型物質檢測----DNA鑒定與亞型的區(qū)別第24頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共62頁，2024年2月25日，星期天紅細胞額外反應1.亞型抗體實驗結果：抗-Aw+，抗-B0，AC2+，BC4+，OC0，正定型被檢紅細胞凝集弱解決辦法----加抗-AB、抗A1、抗-H----吸收/放散試驗----血型物質檢測----DNA鑒定第26頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2.不規(guī)則抗體實驗結果：抗-A4+，抗-B0，AC0，BC3+，OC2+，臨床提示：有輸血史或妊娠史解決辦法：----加-H和抗-AB----抗體篩選與鑒定第28頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第29頁,共62頁，2024年2月25日，星期天3.自身抗體實驗結果：抗-A+，抗-B+，AC+，BC+，OC+，直抗+。臨床提示：AIHA，自身紅細胞被自身抗體致敏后在含蛋白的ABO定型血清中可能發(fā)生非特異性凝集解決辦法：----37℃鹽水洗滌紅細胞至直抗陰性后檢定血型。----紅細胞經甘氨酸/HCl或二磷酸氯喹放散至直抗陰性后檢定血型。第30頁,共62頁，2024年2月25日，星期天2.紅細胞額外反應----獲得性B抗原（類B）臨床提示：細菌感染（尤其是腸道細菌感染），以前為O型或A型。實驗結果：解決方法----用酸化（pH6.0）抗-B檢測（無凝集）----吸收放散實驗，吸收抗-B的能力弱，區(qū)別于亞型*臨床追蹤，感染控制后“類B”現(xiàn)象消失第31頁,共62頁，2024年2月25日，星期天第32頁,共62頁，2024年2月25日，星期天混合凝集（mf）混合凝集（mf）：部分紅細胞凝集（大凝集塊）部分紅細胞均勻分布（背景渾濁）----近期輸異型血----造血干細胞移植第33頁,共62頁，2024年2月25日，星期天ABO血型不同的造血干細胞移植后，如果植入存活，受者逐漸轉變?yōu)楣┱哐偷倪^程中，可能呈嵌合體狀態(tài)。如果供者O型，受者非O型，受者的A或B抗原逐漸減弱，抗體逐漸被檢出。是移植物存活的指標之一。第34頁,共62頁，2024年2月25日，星期天三個月內輸異型血，一般直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性血型鑒定：毛細管離心法（分離年輕和衰老紅細胞）DNA鑒定（供者白細胞在受者外周血中存活期短，一般不干擾受者DNA鑒定）第35頁,共62頁，2024年2月25日，星期天RhD誤定----D抗原陽性誤定陰性，D抗原陰性誤定陽性----特例弱D----D抗原遮斷

第36頁,共62頁，2024年2月25日，星期天解決疑難血型攻略采用最經典的試管方法用洗滌充分的紅細胞制備懸液增加高效價人源抗血清檢測增加抗-AB、抗-H和抗A1檢測吸收放散實驗DNA檢測直抗試驗*。第37頁,共62頁，2024年2月25日，星期天血型檢定，抗體篩查和交叉配血三步也是確保安全有效輸血的三關，交叉配血是最后一關，也是“三關”中最重要的一關。只要交叉配血真正相合（相容），將血液輸給患者才是安全的。第38頁,共62頁，2024年2月25日，星期天主側配血----患者血清與供者紅細胞配血次側配血----供者血清與患者紅細胞配血----全血要求交叉配血----血漿則只要求ABO同型輸注。----不含血漿的紅細胞只要求主側配血第39頁,共62頁，2024年2月25日，星期天一般情況下，只要ABO、RhD血型檢定正確供/受者ABO、RhD同型配血，多數(shù)情況是相合的如果不相合，則視為“疑難配血”一般只有配血相合，才能輸血配血不相合，不能輸血特殊情況例外第40頁,共62頁，2024年2月25日，星期天交叉配血的方法聚凝胺配血？抗球蛋白試劑配血？卡式配血？第41頁,共62頁，2024年2月25日，星期天AABB推薦方法TheAntiglobulinTestOtherMethodstoDetectAntigen-AntibodyReactionsSolid-PhaseRedCellAdherenceTestsColumnAgglutinationTechnologyEnzyme-LinkedImmunosorbentAssay第42頁,共62頁，2024年2月25日，星期天

《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二篇臨床血液學檢驗第六章血型血清學檢查p246-271第七節(jié)交叉配血試驗p262一、交叉配血方法p262-264（一）鹽水介質配血法（二）酶技術配血法（三）抗人球蛋白配血法(四)LISS配血法(五)微柱凝膠卡配血法詳見本章第四節(jié)第六部分。第四節(jié)血清學常用檢查六、凝聚膠試驗P258第八節(jié)微柱凝膠試驗可用于交叉配血p265第43頁,共62頁，2024年2月25日，星期天抗球蛋白試驗(也成Coombs試驗），它是以抗人球蛋白試劑作為連接橋，使不完全抗體致敏的紅細胞連接并發(fā)生凝集。第44頁,共62頁，2024年2月25日，星期天微柱凝膠實驗（簡稱MCGT）1986年法國的YvesLapierre首先發(fā)明此方法,1994年獲美國FDA批準使用----凝膠過濾技術和免疫學的產物----是抗人球蛋白試驗的技術延伸原理：一定濃度的凝膠如篩子，把產生凝集的細胞團塊阻擋于凝膠頂部，沒有產生凝集的單個細胞則能夠通過離心沉降于微管底部。第45頁,共62頁，2024年2月25日，星期天微柱凝膠實驗

4+ 3+

2+

1+

+/- - 溶血雙群第46頁,共62頁，2024年2月25日，星期天；陽性陰性第47頁,共62頁，2024年2月25日，星期天微管凝膠檢測技術的關鍵是凝膠，通過凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大?。荒z試劑中已經加好了抗球蛋白，從而簡化了操作過程，只需加入樣本即可；高敏感性、高特異性和可重復性等優(yōu)點；假陰性？假陽性？質量的可靠性?LISS的應用？第48頁,共62頁，2024年2月25日，星期天聚凝胺是一種由四個銨聚合而成的高陽離子聚合體。紅細胞血型抗原與相應的抗體在低離子介質中快速孵育致敏后，加入帶正電荷的聚凝胺大分子聚合物后，中和紅細胞表面唾液酸所帶的負電荷，減弱紅細胞間的靜電斥力，縮短紅細胞間的距離，促使紅細胞凝集或聚集。它可使正常紅細胞聚集，而在加入檸檬酸鹽時又可使聚集的紅細胞散開。當紅細胞上有IgG抗體結合時，聚凝胺所造成的凝集是不可逆的，加入檸檬酸鹽時不會散開，呈現(xiàn)出肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第49頁,共62頁，2024年2月25日，星期天凝聚胺不是一個特異性的試驗,如果凝聚胺結果陽性，必須用抗球蛋白試驗做確認。用凝聚胺試驗技術交叉配血，出現(xiàn)不配合時，要用抗人球蛋白試驗重復。結果不一致，以抗人球蛋白試驗結果為準。參考文獻：中國輸血叢書《輸血免疫血液學實驗技術》，人民衛(wèi)生出版社，2011，：75-76第50頁,共62頁，2024年2月25日，星期天任何一種實驗方法都不可能百分之百準確無誤，都有假陽性或假陰性。假陰性可能導致患者被輸入并非真正相合的紅細胞，從而導致患者發(fā)生免疫學反應，（急性或遲發(fā)生性溶血性輸血反應，或紅細胞輸進體內后壽命縮短）。假陽性則造成人力和資源的浪費。第51頁,共62頁，2024年2月25日，星期天聚凝胺試劑漏檢抗體舉例骨髓瘤患者有多次輸血史，因抗篩陽性送檢（抗球蛋白卡法）。血型鑒定：

B型,CcDEe直抗：1+抗篩結果：

抗體鑒定是-Jka抗體，提供Jka抗原陰性血液。第52頁,共62頁，2024年2月25日，星期天抗球蛋白試劑漏檢抗體舉例溶血性貧血患者有多次輸血史，因抗篩（卡式）陰性，凝聚胺配血不合送檢。血型鑒定：

O型,CcDEE直抗：1+

抗篩Ⅰ

Ⅱ

Ⅲ

陰性對照陽性對照鹽水00000poly2+02+03+AHG00003+MGT00003+在聚凝胺介質中試驗反應結果符合抗-e格局抗體鑒定證明是-e，提供e抗原陰性血液。第53頁,共62頁，2024年2月25日，星期天不同的情況采取不同的檢測技術----常規(guī)----急診----輸血無效----輸血反應建立適合本實驗室的免疫血液學檢測技術----醫(yī)院實驗室----血站實驗室第54頁,共62頁，2024年2月25日，星期天鹽水法：IgM抗體、ABO血型的復核；凝聚胺試驗和抗人球蛋白試驗：IgG抗體篩查抗人球蛋白試驗仍然不可替代，遇到異常的實驗結果時，應以抗人球蛋白法為準。第55頁,共62頁，2024年2月25日，星期天主側配血不相合的原因

1.患者血清的原因----針對供者紅細胞的同種抗體。----自身抗體----冷凝集素：實驗操作在37℃進行。