3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（二）課件-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修三

3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（二）想從自然界中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當(dāng)需要分離的微生物在混合的菌群中不是優(yōu)勢(shì)種群時(shí)，僅通過(guò)一般的微生物純培養(yǎng)很難實(shí)現(xiàn)。PCR需要耐高溫的DNA聚合酶。理論上，自然界微生物中存在耐高溫的DNA聚合酶，但是這樣的微生物類型并不常見。微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其它種類生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基3.1.2.4選擇培養(yǎng)基思考討論——選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)尿素[CO（NH2）2]含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)生中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會(huì)被土壤中的某些細(xì)菌分解為NH3，NH3再轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。討論1．如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？2．該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？微生物的選擇培養(yǎng)即通過(guò)選擇培養(yǎng)基（液體/固體）培養(yǎng)微生物，使特定菌群的比例提高，從而引向純培養(yǎng)純培養(yǎng)物的獲取除了采用平板劃線法接種還可以采用稀釋涂布平板法接種3.1.2.5微生物的選擇培養(yǎng)1．取樣將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。2．梯度稀釋①取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。②將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。③將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布。④用涂布器將菌液均勻地涂布在選擇培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。3．涂布平板（接種）待涂布的菌液被選擇培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃培養(yǎng)1～2d。在適宜稀釋度的平板上可以分離得到單菌落。（觀察記錄菌落特征）4．培養(yǎng)5．觀察3.1.2.6微生物的數(shù)量測(cè)定用稀釋涂布平板法進(jìn)行純培養(yǎng)，可用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，推測(cè)出樣品中大約有多少活菌統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上看到的只是一個(gè)菌落一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)樣品稀釋度直接影響平板上的菌落數(shù)目同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求平均值3.1.2.6微生物的數(shù)量測(cè)定若105倍稀釋下三個(gè)平板上的菌落數(shù)依次為26、30、31，接近計(jì)數(shù)臨界值。此時(shí)可以設(shè)置新的稀釋倍數(shù)：5×104，使平板上的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果更加準(zhǔn)確。若105倍稀釋下三個(gè)平板上的菌落數(shù)依次為38、42、195。由于三個(gè)平板上的計(jì)數(shù)結(jié)果偏差過(guò)大，應(yīng)考慮重新實(shí)驗(yàn)。借助血細(xì)胞/細(xì)菌計(jì)數(shù)板，利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)3.1.2.6微生物的數(shù)量測(cè)定血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（厚、深）細(xì)菌計(jì)數(shù)板（薄、淺）探究·實(shí)踐——土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)提出問(wèn)題土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌？基礎(chǔ)知識(shí)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL土壤取樣梯度稀釋培養(yǎng)基配制與滅菌接種培養(yǎng)與觀察細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)，絕大多數(shù)分布在距地表3～8cm的土壤層。因此，取樣時(shí)，一般要鏟去表層土。你打算在什么樣的土壤中取樣？用無(wú)菌水稀釋測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量，一般需要1×104、1×105和1×106倍稀釋進(jìn)行平板培養(yǎng)。第一次實(shí)驗(yàn)適當(dāng)放寬，以保證能選取菌落數(shù)為30～300之間的平板。配制尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿及相關(guān)工具滅菌30～37℃培養(yǎng)1～2d每隔24h菌落計(jì)數(shù)一次，選擇菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄結(jié)果觀察記錄菌落特征（如形狀、大小和顏色等）涂布平板接種。設(shè)置對(duì)照。防止培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致的菌落遺漏。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究·實(shí)踐——土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)問(wèn)題：培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落中的細(xì)菌都可以分解尿素嗎？探究·實(shí)踐——土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)若取土樣5g，稀釋1×105倍，取0.1mL稀釋液涂布在三個(gè)平板上，培養(yǎng)后三個(gè)平板上的菌落數(shù)依次為46、47、54。求每克土樣中有多少細(xì)菌。解：三個(gè)平板上的菌落數(shù)平均值=（46＋47＋54）個(gè)/3=49個(gè)；接種用稀釋液的種群密度=49個(gè)÷0.1mL=490個(gè)/mL；因?yàn)橐呀?jīng)高倍稀釋，所以稀釋液1mL≈1g，因此稀釋液中種群密度可記作490個(gè)/g；未稀釋前菌液的種群密度=490個(gè)/g×105=4.9×107個(gè)/gCVm×—接種用稀釋液的種群密度到社會(huì)中去活菌計(jì)數(shù)廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生、水源污染度的檢驗(yàn)和土壤含菌量的測(cè)定等方面。如果你感興趣，可以從下列項(xiàng)目中選做一個(gè)，并走訪相關(guān)部門或企業(yè)，了解它們是如何進(jìn)行檢測(cè)的。1．空氣中微生物總數(shù)的檢測(cè)2．水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)3．牛奶中細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)4．土壤中真菌（或放線菌）的分