靈芝菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

靈芝菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本標準規(guī)定了靈芝菌種生產(chǎn)的范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、場地環(huán)境、設(shè)施設(shè)備、生產(chǎn)技術(shù)、菌種生產(chǎn)檔案、標識、包裝、運輸及貯存。本標準適用于工廠化生產(chǎn)企業(yè)或?qū)I(yè)合作社生產(chǎn)靈芝母種、原種和栽培種。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準則GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則食用菌菌種管理辦法（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部令第62號）術(shù)語和定義GB/T12728中確定的術(shù)語和定義適用于本文件。菌種生長在適宜基質(zhì)上具結(jié)實性的菌絲培養(yǎng)物。包括母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）。母種經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。也稱為一級種。原種由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。也稱為二級種。栽培種由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。栽培種只能用于栽培，不可再次擴大繁殖菌種。也稱為三級種。場地環(huán)境生產(chǎn)場地選擇選擇地勢平坦、排灌方便、土壤肥沃、通風良好的場所作為生產(chǎn)場地。要求周邊環(huán)境清潔，無生活垃圾堆放和填埋場，無工業(yè)固體廢棄物、危險廢棄物堆放和填埋場等。生產(chǎn)場地應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。生產(chǎn)用水生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。設(shè)施設(shè)備基本設(shè)施具備配料室、裝袋室、滅菌室、接種室、培養(yǎng)室（通風好，有紗窗）、貯藏室等設(shè)施?；驹O(shè)備粉碎機、磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、操作臺、超凈工作臺或接種箱、空調(diào)、除濕機、培養(yǎng)架、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡等。生產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機、裝袋機。生產(chǎn)技術(shù)母種生產(chǎn)6.1.1培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：稱取200g馬鈴薯切成小塊加1000ml水煮沸20～30min，紗布過濾取濾液定容至1000ml，加入20g葡萄糖和15～20g瓊脂粉。6.1.2分裝和滅菌將配制好的PDA培養(yǎng)基分裝至Φ18mm×180mm或Φ20mm×200mm的玻璃試管中，裝量為試管長度的1/3左右。試管口應(yīng)保持干凈，分裝后塞入棉塞或硅膠塞，并用牛皮紙包扎。包扎好的直立放在高壓滅菌鍋內(nèi)高壓蒸汽滅菌，121℃保持20～30min。6.1.3制作斜面滅菌后的試管冷卻至60℃左右，將試管傾斜擺放在操作臺桌面上，試管口比試管底部高1.0～1.5cm，做成培養(yǎng)基斜面，斜面長度約為試管長度的2/3。6.1.4無菌檢測隨機抽取3%～5%的試管斜面，在30℃下培養(yǎng)24～48h，檢查有無微生物菌落，無菌落的為合格。6.1.5接種在超凈工作臺或接種箱內(nèi)接種，接種前用紫外滅菌燈照射30min以上，接種人員要注意清潔衛(wèi)生，嚴格按無菌操作要求，手部和試管菌種表面應(yīng)用醫(yī)用酒精消毒。接種用具使用前用酒精燈灼燒滅菌。開始接種時，左手握斜面試管，試管口置于酒精燈火焰上方3cm處的無菌區(qū)，用右手迅速拔開試管塞，并用接種鉤或接種鏟在轉(zhuǎn)接母種試管中挑取3～5mm直徑的菌塊迅速轉(zhuǎn)接到待接斜面培養(yǎng)基上，接種位置為培養(yǎng)基斜面前端1cm處。接種后迅速塞上試管塞。將接種好的斜面培養(yǎng)基用牛皮紙包扎試管口，并貼標有菌號和接種日期的標簽。6.1.6培養(yǎng)接種后的試管置于23℃～28℃培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室恒溫避光培養(yǎng)8d～10d，當菌絲長滿試管斜面，即可用于生產(chǎn)原種。原種、栽培種生產(chǎn)6.2.1培養(yǎng)料培養(yǎng)料應(yīng)符合NY5099的規(guī)定。配方一：木屑78%，麥麩20%，石膏1%，磷肥1%。配方二：棉籽殼80%，麥麩18%，石膏1%，石灰1%配方三：棉籽殼50％，木屑30％，麩皮17％，蔗糖1％，石膏1％，石灰1％。6.2.2拌料按照培養(yǎng)料配方準確稱取生產(chǎn)所需各種原材料。將原料加水混合后充分拌勻。培養(yǎng)料含水量控制在60%～65%（料水比1：1.2～1.3）。6.2.3裝袋拌料結(jié)束后應(yīng)立即裝袋。原種采用規(guī)格為（12～17）cm×（22cm～28cm）×0.005cm的低壓聚乙烯或高壓聚丙烯塑料袋，栽培種采用規(guī)格為（15～17）cm×（35cm～38cm）×0.005cm的低壓聚乙烯或高壓聚丙烯塑料袋。裝料要求松緊適中，用線繩打活結(jié)或套環(huán)加海綿蓋體等方式封口，料袋裝好后應(yīng)及時裝鍋滅菌。6.2.4滅菌采用常壓蒸汽滅菌升溫要快，要在4h內(nèi)升溫至100℃，料袋中心溫度達到100℃后保持18h～22h；若采用高壓蒸汽滅菌，滅菌時要求關(guān)閉排氣閥后高壓滅菌鍋內(nèi)溫度達到121℃～126℃后保持2.5h～3.0h，根據(jù)滅菌條件和滅菌料袋的數(shù)量可以適當延長或縮短滅菌時間。6.2.5冷卻滅菌結(jié)束后，待滅菌鍋內(nèi)溫度降至60℃～70℃，趁熱將料袋搬運到潔凈的接種室內(nèi)自然冷卻。6.2.6接種接種在接種室或者接種箱內(nèi)進行。接種室和接種箱在使用前應(yīng)使用消毒劑熏蒸等方式進行消毒。料袋搬入接種室或者接種箱后，連同接種工具進行二次消毒。待料袋中心溫度冷卻至28℃以下接種。接種前，用75%酒精或其它衛(wèi)生消毒劑對栽培種瓶（袋）外壁進行擦拭消毒。接種時要嚴格按照無菌操作要求進行操作。原種接種：每個原種接入2cm～3cm大小母種2～3塊；栽培種接種：每個栽培種接入至少15g原種。接種后重新用線繩扎好袋口或者在套環(huán)上迅速蓋好海綿蓋體。接種室和接種箱在每次使用后，及時做好清理和清潔工作，排除廢氣和清理廢物。6.2.7培養(yǎng)接種后的菌袋放在培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng)。培養(yǎng)室要求環(huán)境干凈衛(wèi)生，且通風、避光、保溫條件良好，溫度控制在23℃～28℃。培養(yǎng)室在菌棒移入前應(yīng)進行徹底打掃和噴灑殺蟲劑，關(guān)閉門窗后用消毒劑熏蒸消毒，使用的殺蟲劑和消毒劑應(yīng)符合NY/T1276和GB/T8321（所有部分）的規(guī)定。6.2.8培養(yǎng)期檢查培養(yǎng)3d后開始不定期檢查，及時清理污染雜菌、生長不良等不合格菌袋。菌種生產(chǎn)檔案應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的規(guī)定。標識、包裝、運輸及貯存標識菌種包裝儲運標志應(yīng)符合GB/T191規(guī)定，標簽內(nèi)容應(yīng)包括菌種名稱、編號、級別、生產(chǎn)單位、接種日期。包裝母種采用木盒或有高強度的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙或報紙等輕質(zhì)材料填滿。原種和栽培種用高強度紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙或報紙等輕質(zhì)材料填滿。箱（盒）內(nèi)附產(chǎn)品合格證書