課件速覽-人干擾素α2b的發(fā)酵生產(chǎn)

項(xiàng)目三人干擾素α2b的生產(chǎn)1項(xiàng)目導(dǎo)讀

人干擾素α2b是一種廣譜抗病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的藥物，抗病毒臨床療效顯著，對(duì)乙型肝炎、帶狀皰疹、尖銳濕疣和某些白血病、惡性腫瘤等病毒感染相關(guān)疾病具有良好的治療效果。人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b2重組人干擾素α2b生產(chǎn)方法（基因重組技術(shù)生產(chǎn)）：重組人干擾素α2b由高效表達(dá)人干擾素α2b基因的大腸埃希菌、釀酒酵母或腐生型假單胞菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得。劑型：注射用人干擾素α2b、人干擾素α2b注射液、人干擾素α2b滴眼液、人干擾素α2b栓、人干擾素α2b乳膏、人干擾素α2b凝膠、人干擾素α2b噴霧劑、人干擾素α2b軟膏和人干擾素α2b陰道泡騰片等9種。3人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b學(xué)習(xí)人干擾素α2b生產(chǎn)技術(shù)重點(diǎn)：細(xì)胞破碎技術(shù)、包涵體處理技術(shù)、膜分離技術(shù)和層析技術(shù)4項(xiàng)目實(shí)施說明人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b1.項(xiàng)目描述

公司生產(chǎn)制造部門發(fā)出生產(chǎn)指令，要求生產(chǎn)一批人干擾素α2b原液。人干擾素α2b工程菌發(fā)酵、菌體處理、包涵體處理、離子交換層析、疏水層析和凝膠層析等崗位密切配合，各司其職，按計(jì)劃啟動(dòng)和完成生產(chǎn)工作任務(wù)。2.人干擾素α2b的生產(chǎn)指令5人干擾素α2b發(fā)酵液的生產(chǎn)010204人干擾素α2b發(fā)酵液處理人干擾素α2b的離子交換層析03人干擾素α2b包涵體的處理人干擾素α2b的生產(chǎn)0506人干擾素α2b的疏水層析人干擾素α2b的凝膠層析目錄6項(xiàng)目三人干擾素α2b的生產(chǎn)任務(wù)一人干擾素α2b發(fā)酵液的制備7認(rèn)識(shí)人干擾素α2b，了解其來源及用途，熟悉其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

任務(wù)描述人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b利用人干擾素α2b工程菌發(fā)酵生產(chǎn)制得人干擾素α2b發(fā)酵液。8任務(wù)支撐人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b（一）基因工程制藥基因工程技術(shù)又稱基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)?；蚬こ讨扑幖夹g(shù)是指將目的基因插入質(zhì)粒、病毒等載體中，實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，然后導(dǎo)入宿主細(xì)胞，制成基因工程細(xì)胞，目的基因在基因工程細(xì)胞中擴(kuò)增和表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)分離純化后制成藥物的技術(shù)。9

1953年我國(guó)第一個(gè)基因工程藥物（重組人干擾素α1b）1989年沃森（Watson）和克里克（Crick）提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)FDA批準(zhǔn)第一個(gè)基因重組生物制品（重組人胰島素）1982年重組人白介素-2、重組人生長(zhǎng)激素、重組人促紅素、重組人胰島素、粒細(xì)胞刺激因子和重組新型冠狀病毒疫苗…….???（一）基因工程制藥10基因工程細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)—酵母（如畢赤酵母）原核表達(dá)系統(tǒng)（如大腸埃希菌）真核表達(dá)系統(tǒng)—昆蟲細(xì)胞（如果蠅細(xì)胞）真核表達(dá)系統(tǒng)—?jiǎng)游锛?xì)胞（如CHO細(xì)胞）表達(dá)基因重組蛋白質(zhì)的基因工程細(xì)胞（一）基因工程制藥111.基因工程細(xì)胞培養(yǎng)液的特點(diǎn)表達(dá)位置固液混合易失活基因工程菌--胞內(nèi)表達(dá)（包涵體）基因工程動(dòng)物細(xì)胞--胞外表達(dá)雜質(zhì)繁多：大、中、小分有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜、性質(zhì)各異的生物活性物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較多，易染雜菌--熱源超標(biāo)生物活性物質(zhì)易變--活性降低（二）基因工程藥物的生產(chǎn)122.對(duì)分離純化技術(shù)的要求

（1）技術(shù)條件要溫和--保證目的產(chǎn)物的生物活性

（2）選擇性好--有效地離目的產(chǎn)物

（3）收率高--損失少

（4）工藝步驟少--快，產(chǎn)率高

（二）基因工程制藥的生產(chǎn)13基因工程藥物生產(chǎn)工藝過程3.14（三）熟悉人干擾素α2b原液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

原液按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢定，質(zhì)量需符合2020年版《中國(guó)藥典》三部“注射用人干擾素α2b”中人干擾素α2b原液檢定標(biāo)準(zhǔn)。15任務(wù)實(shí)施人干擾素α2b的生產(chǎn)ProductionofRecombinantHumanIFNα2b（一）了解人干擾素α2b

人干擾素α2b系由高效表達(dá)人干擾素α2b基因的大腸埃希菌、釀酒酵母或腐生型假單胞菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化制得。注射用人干擾素α2b系由高效表達(dá)人干擾素α2b基因的大腸埃希菌、釀酒酵母或腐生型假單胞菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的人干擾素α2b凍干制成。16（二）掌握人干擾素α2b生產(chǎn)工藝

由高效表達(dá)人干擾素α2b基因的大腸埃希菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后制得人干擾素α2b。凝膠層析17原液按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢定，質(zhì)量需符合2020年版《中國(guó)藥典》三部“注射用人干擾素α2b”中人干擾素α2b原液檢定標(biāo)準(zhǔn)。（三）熟悉人干擾素α2b原液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)180504030201生產(chǎn)前準(zhǔn)備菌種的活化菌種的擴(kuò)增工程菌發(fā)酵清場(chǎng)（四）人干擾素α2b的發(fā)酵生產(chǎn)19生產(chǎn)前準(zhǔn)備01（四）人干擾素α2b的發(fā)酵生產(chǎn)（1）確認(rèn)與填寫檢查記錄（2）領(lǐng)料與溶液配制菌種的活化02（1）滅菌

活化培養(yǎng)基、吸量管等，以121℃，0.11MPa，20min。（2）超凈臺(tái)滅菌

活化培養(yǎng)基與吸量管等自然冷卻至室溫后，超凈臺(tái)上照射滅菌30min。（3）工作臺(tái)內(nèi)消毒用75%酒精浸泡過的酒精棉對(duì)手及工作臺(tái)面消毒，在酒精燈火焰旁操作。（4）將重組人干擾素α2b工程菌種，移至三角瓶，封口。（5）培養(yǎng)得活化種子液

搖床中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：30℃，220rpm。經(jīng)8h的培養(yǎng)后，。20菌種的擴(kuò)增03（四）人干擾素α2b的發(fā)酵生產(chǎn)超凈臺(tái)中，分別吸取2.5%硫酸鎂溶液和0.11%氯化鈣溶液，加入裝有擴(kuò)增培養(yǎng)基的三角搖瓶，再吸取50%甘油溶液加入，最后加入活化后的種子液。封口，置于搖床中培養(yǎng)。

培養(yǎng)條件：30℃，200rpm，15h。工程菌發(fā)酵04A.將重組人干擾素α2b工程菌液轉(zhuǎn)移至發(fā)酵罐中。B.發(fā)酵培養(yǎng)6h后，迅速將罐溫升至43℃，開始誘導(dǎo).C.誘導(dǎo)培養(yǎng)4h后，打開發(fā)酵罐放料口開關(guān)，收集的發(fā)酵液，離心。D.收集上清液，處理達(dá)標(biāo)后排放。收集菌體于菌體儲(chǔ)存瓶中，標(biāo)記品名、菌體批號(hào)、生產(chǎn)日期、菌體濕重等，－20℃冰箱中保存。E.發(fā)酵結(jié)束后，對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行滅菌處理。21清場(chǎng)05（四）人干擾素α2b的發(fā)酵生產(chǎn)

檢查、整理各項(xiàng)記錄。規(guī)范地存放生產(chǎn)用試劑，清洗器具，維護(hù)設(shè)備，處置廢物和廢液，清潔、消毒工作臺(tái)和潔凈室。最后，填寫清場(chǎng)合格證。注意：請(qǐng)?jiān)谌蝿?wù)實(shí)施過程中規(guī)范填寫《人干擾素α2b發(fā)酵液處理操作記錄》，不可補(bǔ)填和篡改！22知識(shí)學(xué)習(xí)反思與反饋學(xué)習(xí)成果實(shí)踐操作考核與評(píng)價(jià)23拓展任務(wù)檢索基因工程藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)24查閱現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》及相關(guān)資料查閱檢索某基因工程藥物的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門核準(zhǔn)的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。該基因工程藥物信息和總結(jié)人干擾素α2b生產(chǎn)中用到哪些生物藥物分離技術(shù)。設(shè)計(jì)簡(jiǎn)述檢索（一）任務(wù)描述25（二）實(shí)訓(xùn)材料《中國(guó)藥典》三部及相關(guān)資料的紙質(zhì)版或在線版。

查閱專業(yè)書籍、文獻(xiàn)和法律法規(guī)等資料，獲取某種基因工程藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。例如，重組人促紅素、重組乙肝疫苗等藥物，它們與人干擾素α2b類似，均是借助基因工程細(xì)胞，通過一系列提取、純化操作生產(chǎn)制成的基因工程藥物。