《乙醇酸甲酯的HPLC法測定》10000字

乙醇酸甲酯的HPLC法測定摘要：本研究通過實驗探討了對于乙醇酸甲酯的高效液相色譜研究方法，本次實驗的液相色譜儀為安杰倫1260高效液相色譜儀,色譜柱為eliteHypersilODS25μm，流動相為乙腈和水配比，流速為1.30毫升每分鐘，二十五攝氏度設置為柱溫箱的溫度，檢測波長為二百二十納米。結(jié)果表明，乙醇酸甲酯在百分之一到五十的濃度范圍之間線性良好，R2=0.99991。檢出混合溶液中乙醇酸甲酯平均含量為百分之四點六四，相對標準偏差為百分之一點六二。每次進樣量為五微升，實驗中通過嘗試多種方案，不斷地改進實驗中所用到的方法，找到比較合適的方案，通過制作標準曲線對待測物質(zhì)進行檢測分析。最終得出的結(jié)果表明該方法簡便、快捷、高效，適用于乙醇酸甲酯與乙醛酸等混合體系的分離測定。關鍵詞：高效液相色譜法；乙醇酸甲酯；乙醛酸目錄摘要……….………2目錄……...…..…………….……..…31緒論…………..……..……….31.1乙醇酸甲酯..……………….31.2乙醇酸甲酯的性質(zhì)……………..….31.3乙醇酸甲酯的合成方法………………...31.3.1乙二醛合成……………………...41.3.2甲醛甲醛羰化一酯化合成法………………...41.3.3甲縮醛和甲酸法……………...41.3.4偶聯(lián)法…………...51.3.5氯乙酸法…………...53.課程研究的目的和意義……………….………….………….…..63.1課程研究的目的………….…63.2課程研究的意義………….…64.主要研究內(nèi)容和方案…..…………………..….....64.1主要研究內(nèi)容……………….64.2實驗方法…………………….65.設計流程………….……………....76.主要參考文獻………………….....71.緒論1.1乙醇酸甲酯乙醇酸乙二甲酯產(chǎn)品作為一種重要的有機化學合成中間體,具有廣泛的市場經(jīng)濟性和用途,其主要組成分子結(jié)構組成及其結(jié)構相對特殊:它們可以具有與醇的h,羥基和酯的有機反應性基本能團,因此同時還可以具有與乙醇和酯的多種有機化學性質(zhì),并且在高溫空氣中乙醇可以直接與其發(fā)生水解反應,氧化縮合反應等,是重要的有機化工原料。乙醇酸乙二甲酯廣泛應用于許多醫(yī)學科研應用領域,包括生物化學,醫(yī)藥,農(nóng)藥,食品,日化工業(yè)和中間體。乙醇酸二苯甲酯易中和溶于酸性硝酸甲酯纖維素,乙酸甲酯纖維素和堿性聚乙酸乙烯酯。它們還含有許多不同種類的植物纖維素,膠,橡膠和其他材料的極佳溶劑。[5]將乙醇酸甲酯與其他醇類混合可以得到不同的酯。乙二醇不僅在許多領域都有廣泛的應用,包括化學工業(yè),醫(yī)藥和染料,而且更重要的是,它在有機合成中用作中間體。同時,它可用于合成某些抗載體添加劑,以增強潤滑劑的耐壓性和耐磨性。乙二醇是一種化學中間體,具有以下的用途:乙二醇的還原,水解乙醇酸。在對乙醇酸甲酯的廣泛應用和研究開發(fā)中,它不僅能夠表現(xiàn)出自己的特點和應用,而且更重要的一點是,它同時也是一種酯堿和其類似物的重要相互作用,可以被廣泛地用作合成其他各種有機化合物的中間體。有很多產(chǎn)物產(chǎn)品都是來自于原材料乙醇酸甲酯,因此,乙醇酸甲酯有望擴大市場,因為目前在本地和海外都只能買到相對稀少的化學產(chǎn)品。這些種類繁多的產(chǎn)品很大程度上的了開拓了對于乙醇酸甲酯的科研方向。1.2乙醇酸甲酯的性質(zhì)物理性質(zhì)乙醇酸乙二甲酯溶液屬于一種無色的油狀液體,帶有一種令人愉快的自然香味。熔點74,沸點150;密度D4=1.168。眾所周知乙醇酸甲酯是一種水溶性的,因此它在任意一定比例下均可溶于乙醇和乙醚中?；瘜W性質(zhì)1）四環(huán)碳酸鹽氧化脫氫反應:四環(huán)乙醇酸基苯甲酯的四環(huán)碳酸鹽氧化脫氫反應可以產(chǎn)生四環(huán)丙二酸基苯甲酯。丙二酸二苯甲酯與一個酸性陽離子交換的溶膠在70°c下直接進行酯化反應并經(jīng)制備后可得到羥基丙二酸二甲酯,其中的酸性單酯離子轉(zhuǎn)化酶效率大約為84.6%。在均相的Rh配合物和碘化物促進劑的存在下,乙醇酸甲酯催化碳化并生成乙酸甲酯和乙醛。該碳化反應可以用作生產(chǎn)丙二酸單甲酯的無氯方式。2）一種氨化加成反應:dl-氨基甘氨酸j通過其對乙醇酸和苯甲酯的一種氨化加成反應可以進行氨化生成。這樣一個簡單的復合氨基酸就已經(jīng)可以讓它使用得非常普遍。3）乙醇酸氫化反應:乙醇酸甲酯經(jīng)過添加氫化合成乙二醇,一種重要的有機化學成分:該反應用于生產(chǎn)乙二醇,因為該酯易于分解。乙二醇的收率很難超過30%。近年來,隨著氫化催化劑性能的不斷提高,乙二醇的選擇得到了極大的改善。4）水解反應:乙醇酸甲酯的水解產(chǎn)生乙醇酸和甲醇。乙醇酸是聚乙醇酸的自動抑制劑。聚乙醇酸是一種可生物降解的物質(zhì),是一種可以被人體吸收的藥物。5）抗氧化和脫水:從乙醇酸甲酯到乙二酸甲酯抗氧化和脫水。當水中存在一定量的磷酸銅時,它會被分解為水形成乙醛酸。1.3乙醇酸甲酯的合成方法1.3.1乙二醛合成此方法使用的材料為乙二醛和甲醇,Al(NO3)9H2O用作催化劑。在一百六十度高溫下進行反應。這個反應30分鐘內(nèi)，我們即可獲得一種乙醇酸甲酯。達98%。乙醇酸甲酯約占97%。反應方程式:該法由于反應時的環(huán)境化學條件溫和,反應分子轉(zhuǎn)換過程速度快,選擇性要求較高。然而,乙二醛和苯作為主要化學原料和高含量的有毒化學物質(zhì),會直接中毒刺激傷害人體面部皮膚和口腔黏膜,乙二醛40%中毒需要額外花費8000元左右,不利于企業(yè)進行大幅度規(guī)?；墓I(yè)化生產(chǎn)。1.3.2甲醛羰化一酯化合成法在溫度高于七十點九兆帕和更高的環(huán)境條件下,首先可以形成一種甲醛的水溶液和碳氧基,在此基礎上再通過諸如濃硫酸或三氟化硼之類的催化劑，經(jīng)過相互作用后，產(chǎn)生了乙醇酸。而使用乙醇酸發(fā)生一種親核取代最終可以獲取乙醇酸甲酯。的反應方程式:或在主要甲酯催化劑的混合存在下,甲醇和乙酸碳氧基的反應可以形成透明的乙二甲基甲酯化合物,然后再通過使用泡沫酸乙二甲酯和乙基甲醛路易斯催化劑或離子交換劑在樹脂等的混合存在下,形成新的乙醇酸乙基甲酯。1.3.3甲縮醛和甲酸法E.L.

yeakey等人首先采取了甲縮醛,甲酸為主要原料,條件是因為甲縮醛含有某種無機過氧化物,并于設定好的條件下，通過實驗的方法來反應獲得乙醇酸甲酯。例如,使用(ch3o)2ch2、多聚乙醇甲醛,還有(ch3)3cooc(ch3)3,以一個高溫一百三十度的方式加熱兩個小時,然后把其溫度調(diào)到一百五十度再繼續(xù)加熱一個小時,最終通過這個反應，我們獲得了乙醇酸乙酯、還有乙二醇,不僅如此,還獲得了乙醇酸甲酯。這些反應的產(chǎn)物它們都很容易被乙二醇溶解,并且因此這些反應產(chǎn)物分離十分困難。1.3.4偶聯(lián)法根據(jù)描述,這種方法主要原料為甲酸甲酯,搭配乙醛或者聚甲醛,選取酸性條件下催化后合成乙醇酸甲酯。它的反應方程式為:1.3.5氯乙酸法該方法采用的是使用氯乙酸與苛性鈉的溶液進行混合。在高溫沸水洗滌浴中加熱,在低溫下進行蒸發(fā),氯化鈉過濾,在高溫油浴中加熱以獲得稠的溶劑或液體,然后在其中添加甲硫酚和濃硫酸,可逆地獲得乙醇酸甲酯,用碳酸鈉中和,它的上升允許靜置過夜的產(chǎn)品已經(jīng)被減壓后進行分餾,獲得乙醇酸甲酯。反應方程式:1.3.6甲醛與氫氰酸加成法在硫酸的催化下,甲醛和氫氰酸進行另外的反應以獲得羥基乙腈,然后將其水解以水解以獲得百分之八十的收率的甲基乙酸甲酯。陳道塤等人以百分之三十七的工業(yè)甲醛氫氰酸反應,得到百分之四十到五十的羥乙腈濃度。在百分之六十到九十八濃度的硫酸存在下,溫度為一百一十五到一百三十度,水解反應四到七個小時,將所得乙醇酸從溶液中萃取并在低壓下蒸餾,得到約百分之四十五濃度的乙醇酸。羥乙腈約為百分之九十八。硫酸甲酯的硫酸甲酯產(chǎn)率約為百分之九十七,以催化羥基乙腈在七十攝氏度下水解反應兩個小時,以及與甲醇在九十度下酯化反應兩個小時。但是該過程相對復雜,因此不符合大量工業(yè)生產(chǎn)的需求。原料氫氰酸具有劇毒,因此也不符合綠色無害的宗旨。1.3.7甲縮醛與CH?O自由基加成法反應式該反應在酸性氣體的催化下,輔以過氧化物(CH3)3COOC(CH3)3,可以促進甲縮醛配合甲醛,引發(fā)自由基加成,但是它的生成物種類比較繁雜,而且選擇性比起其他方法較低,乙醇酸甲酯的回收率只有百分之十三。1.3.8草酸二甲酯加氫還原該反應反應的溫度為一百八十度。氫氣為十三點二兆帕,收率非常高,達到百分之百。本實驗主要采用某種金屬有機催化劑作為反應所需要的催化劑,它不僅十分溫和,乙醇酸甲酯的吸收率更是可以達到百分之九十五。這種方法所要采取的幾種類型的催化劑都是屬于有機物質(zhì)和貴金屬,它們所需要制備的催化劑和工藝比較繁雜、并且在價格方面比較昂貴,想要回收更是難上加難。日本公司采用了負載型銅并且在其中搭配了銀作為催化劑,以這種方式合成的草酸二甲酯能夠?qū)崿F(xiàn)轉(zhuǎn)化率可以達到百分之九十,乙醇酸甲酯收收率可以達到百分之六十八。以納米銅反應而產(chǎn)生的銀作為催化劑,研究了利用草酸二甲酯一步氧化或者加氫反應方法,壓力條件為四點五兆帕,此方法選擇性可達百分之八十九,收率在百分之六十八以上。這種制備方法的最大優(yōu)勢是草酸二甲酯只需要一步便可輕松地獲得乙醇酸甲酯,并且選擇性很高,收率也在可接受范圍只內(nèi),這種設計路線對于工業(yè)生產(chǎn)來說是比較有利的.1.4乙醇酸甲酯的研究現(xiàn)狀與分析方法1.4.1乙醇酸甲酯的研究現(xiàn)狀在我們國家,煤制乙二醇這種工藝發(fā)展蓬勃,已經(jīng)逐漸走向成熟,實現(xiàn)了從研發(fā)階段到工業(yè)使用階段的跨越。隨著煤制乙二醇工藝的不斷改進,對于它的衍生產(chǎn)物乙醇酸甲酯,人們逐漸開始重視它的研究與利用。乙醇酸甲酯的優(yōu)勢在于,不僅它的操作環(huán)境比較安全,而且造成的污染較少,有利于環(huán)境的保護。這些優(yōu)勢都說明它是一條十分具有發(fā)展?jié)摿Φ木G色合成路線。對于乙醇酸甲酯更加合理、規(guī)范的使用不僅能夠為煤制乙二醇工藝帶來巨大的效益改變,而且能夠大大降低乙醛酸的生產(chǎn)所需成本。1.4.2乙醇酸甲酯的分析方法目前,對于活性乙醇酸的色譜分析方法,主要技術包括:溶液顏色比較法、GC法、高效率的液相色譜法、NMR法、IC法、高效毛細管電泳。其中,比色法(spectrophotography)主要依據(jù)濃硫酸和萘酚還有羥基乙酸之間的顯色反應,但是眾所周知,有許多物質(zhì)在濃硫酸與萘酚同時使用的條件下都可以顯色,因此這種法在定量分析中沒有足夠的準確度。乙醇酸這種物質(zhì)具有熱不穩(wěn)定性,不僅如此,它還具有活潑性羥基,化學性質(zhì)十分活潑,想要使用此方法（GC）,必須要通過硅烷化后,獲得衍生物再對其含量進行分析。但是如果使用這種方法進行處理,分析后結(jié)果的重現(xiàn)性會明顯下降,并且此種方法成本明顯升高。實驗表明,將高效液相色譜法應用乙醇酸甲酯水解反應中,不僅操作簡潔方便,還具有高效和準確的優(yōu)勢,測定的契合度很高。1.4.3乙醇酸的研究現(xiàn)狀乙醇酸的分析方法目前主要有:GC法、高效液相色譜法、分子發(fā)光光譜分析法、IC法、高效毛細管電泳法和NMR法等。其中，分子發(fā)光光譜分析法基于顯色反應，然而多種化學物質(zhì)在H2SO4與萘酚同時存在時會產(chǎn)生反應，所以此法定量分析的準確性不高。1.5乙醛酸的研究現(xiàn)狀乙醛酸,它的化學成分在其化學分子中主要就是具有二乙醛基和羧基這兩種化學官能性基團,它也就是一種化學結(jié)構最為簡單的二乙醛酸,不僅在高溫空氣中不僅能夠與醋酸乙醛脫氫發(fā)生縮合加成反應,還在高溫空氣中能與醋酸乙醛脫氫發(fā)生酯化縮合反應,它的這些化學特征,使其被各種化工香料、醫(yī)學、地質(zhì)學、皮膚病的生產(chǎn)、紙張的生產(chǎn)研制以及醫(yī)藥生產(chǎn)、食品化學添加劑等各個化學行業(yè)廣泛研究采用。對于酸性乙醛酸,最為典型的氧化合成乙酸方法主要有:醋酸香蘭素氧化合成、制造尿囊素以及苯乙酮產(chǎn)品的生產(chǎn)。在最近的幾年里,工業(yè)生產(chǎn)對于乙醛酸的使用需求逐漸增加,具有非?？捎^的市場需求。因此,對于乙醛酸精確定量的制造具有非常重要的價值和意義,對于相關產(chǎn)品行業(yè)的市場需求也是極為迫切的。1.6乙醛酸的分析手段查找各種文獻發(fā)現(xiàn),在目前條件下,對于乙醛酸的測試方法有很多種,它們是光譜學,potentiometrictitration,毛細管電泳和高效液相色譜。光譜法確定了羥胺鹽酸鹽和醛加成產(chǎn)物的紫外線吸收特性。但是該方法對于各方面條件的需求較高,比較難以使用。醛基無法準確地區(qū)分不同的分子模型在滴定過程中的有效性,potentiometrictitration是一種采用酸堿中性反應原理,通過添加二甲基乙酰胺溶劑而可以獲得滴定突變,從這個反應方法我們可以準確地區(qū)分出強酸和弱化的酸。但是,該種方法暫時還無法區(qū)分具有類似于乙醛酸的電離常數(shù)和其他較弱的強堿。已經(jīng)有一些文獻表明使用了高效毛細管電泳和毛細管帶電泳等方法來檢驗草酸、乙醛酸。但是,電泳分離重現(xiàn)性差的關鍵技術障礙尚未能夠為工業(yè)提供一個令人感到滿意的解決辦法。其中有兩種檢測方式可以使用具有高效液相色譜的二甲基乙醛酸。第一類是將hplc離子作為反應物或者是外標間的離子抑制劑。接方法結(jié)合使用來直接測定。[4]但是,在該過程中對乙醛酸的保留期比較短并且其靈敏性降低。但是當樣本的背景非常復雜,很難有效地區(qū)分乙醛酸與復雜的基質(zhì)。另一種高性能液相色譜法是乙醛酸產(chǎn)氫,并用2,4-二硝基苯肼(dnph)以使用這種氫氣來制備該種氫氣,以確定其在紫外-可見光下的強特性吸收。已在文獻中使用已經(jīng)報道乙醛酸發(fā)生反應方法。但是,本文中并未提及乙醛酸在dnph衍生物的過程中所產(chǎn)生的羥基異構體。同時,通過研究衍生過程中的一系列條件,建立了一種快速,準確的HPLC檢測糖基酸的方法。1.7乙醛酸的合成方法硝酸氧化法曾舟華等開發(fā)了一種硝酸空氣氧化工藝法來制備乙醛酸的釜液再次循環(huán)。在反應釜上方新增設一套釜液循環(huán)吸收柱、泵、變頻器組合而成。不必再需要隨意地改變原來的生產(chǎn)工藝車間及其設備的布局,就可以能直接地利用原來的反應釜,將硝酸氫甲基氧化乙二醛反應過程中生成的no,用空氣中的氧化物轉(zhuǎn)換為no2,noz進入吸收柱,被冷釜液吸收后再重新返回到反應釜,與乙二醛反應時失去的氧又轉(zhuǎn)換為no。不僅大大減少了對硝酸的消耗量和nox尾氣的排放,還大大提高了產(chǎn)品對乙醛酸的吸收。鮑應元等人和研究人員開發(fā)了一種合成乙二醛-硝酸酯的氧化反應法和有機合成一種乙醛酸的氧化反應液的熱處理工藝技術及其生產(chǎn)設備。將二次減壓反應配制所得的天然乙醛酸中選用含量一定濃度為10%~25%的乙醛濃縮液為反應液,經(jīng)過一級減壓濃縮機和蒸發(fā)器二次加熱減壓分離濃縮,除去大多數(shù)低溫高沸點的乙醛酸性原料雜質(zhì),再經(jīng)二次減壓結(jié)晶處理加熱減壓分離,除去部分剩余乙醛副產(chǎn)物乙乙草酸,然后經(jīng)過二次減壓濃縮進行減壓分離濃縮,除去其它部分酸性原料雜質(zhì).將配制所得的乙醛濃縮液用少量人工純化乙醇水溶液進行減壓稀釋,配制可以生產(chǎn)和合成一定含量濃度的天然乙醛和草酸類原料產(chǎn)品,從而達到可以充分達到二次減壓分離和人工提純生產(chǎn)乙醛酸的重要意義和應用目的。所述濃縮設備主要裝置包括一級稀釋濃縮液的蒸發(fā)器、結(jié)晶稀釋分離濃縮裝置、二級稀釋濃縮分離裝置和一級濃縮液的三級稀釋分離裝置。葉龍等將100份有機亞硝酸水和鈉質(zhì)量的溶液濃度分別為40%的有機乙二醛硝酸水溶液、10~20份有機亞硝酸水和鈉質(zhì)量的溶液濃度分別平均為30%的有機鹽酸氫鈉溶液和10~25份有機亞硝酸水質(zhì)量濃度分別為5%~20%的有機亞硝酸水和鈉溶液,然后依次加入攪拌到所述相應的快速攪拌機和容器中,升溫至45~55℃,加入0.12~0.62份有機亞硝酸鈉,即可迅速獲得有機引發(fā)的開發(fā)性化學體系;然后在55~65℃、常壓和快速連續(xù)攪拌的加熱條件下,用有機氣泡或沸石向所述各個引發(fā)發(fā)性體系中依次通入適量的有機氧氣,同時向所述各個引發(fā)發(fā)性體系均勻地依次滴入添加30~40份有機含氧水和濃度為30%~45%的濃亞硝酸;在采用高溫快速攪拌的加熱條件下,升溫至75~85℃,保溫1~2h;再依次繼續(xù)加入1~4份濃度相當于氨水質(zhì)量的濃亞硝酸,濃度作用范圍分別為30%~45%,繼續(xù)保溫1~2h,制得一份乙醛酸。這種生產(chǎn)方法主要是一種同時具有使用硝酸劑的實際使用量相對較少、氮氧化物大氣排放影響較小、產(chǎn)率高、有利于企業(yè)實現(xiàn)原料工業(yè)化生產(chǎn)等多大優(yōu)勢的生產(chǎn)方法。乙二醛空氣或氧氣氧化法劉春秀等其他人將一種利用化學沉積-有機沉淀法和有機溶液相對性還原法聯(lián)合生產(chǎn)的金屬烯系列羥基乙醛酸合物作為有機催化劑,以有機氧氣形式進行羥基乙二醛的有機氧化而得以合成羥基乙醛酸。結(jié)果表明,與目前傳統(tǒng)的乙醛沉積-溶液沉淀法制取反應設備相比,采用乙醛溶液相變性還原反應法制取設備的乙醛催化劑金的實際催化負載穩(wěn)定能力要求相對于傳統(tǒng)催化劑金的實際穩(wěn)定性能力要求更高,表現(xiàn)是因為乙醛具有較高的催化活性,當反應溶液濃度ph=7.7,反應進行過程溶液中的催化溫度大約為25°℃時,乙醛酸收率最高可以直接達到6.2%。蘇琳琳等通過利用晶種化學物質(zhì)還原和利用晶種化學傳播媒體兩種生長反應方式的先進工藝技術制備了不同顆粒大小和各種尺寸的金屬碳納米塑料顆粒,將其原料作為化學負載物質(zhì)并放置在化學活性炭上以迅速獲得原料au/c作為催化劑,應用于液相化學催化制備氧化羥基乙二醛和液相制備羥基乙醛酸的化學反應。實驗研究結(jié)果顯示,金黃銅納米粒與催化劑之間仍然存在著明顯的主要大小粒度尺寸改變效應,其中金黃銅納米催化顆粒的主要大小尺寸是由3.5nm3在負載下所改變形成的1%au/c使該催化劑的催化活性最高。其他方法鮑應元等[17]領導研究人員開發(fā)了一種對聚苯乙醛酸的有機復合反應氧化和合成聚苯丙烯的有機合成應用工藝。將活性乙二醛乙酯水溶液與活性鹽酸乙酯水溶液進行混合后于40~7o℃下,在其他引發(fā)誘導催化劑上進行加入其他誘導催化劑而停止引起的水解反應;于50~7o℃下,分別在活性乙醛酸水解溶液和活性過氧化氫水解溶液中進行加熱,再將其中的溫度控制系數(shù)調(diào)節(jié)至70~85°℃,保溫0.5~3h,得到活性乙醛酸水解反應液。將羥基乙醛酸脫水反應液經(jīng)過高溫減壓、濃縮、結(jié)晶處理分離為乙草酸,得到本次實驗產(chǎn)品。該復合氧化吸收工藝主要采用的是硝酸-過渡二氧化氫酸的復合吸附氧化反應體系,提高了部分乙二醛在復合氧化化學反應過程中的化學選擇性,抑制了其他物質(zhì)生成氨和草酸的化學副作用,提高了部分乙二醛在工業(yè)空氣環(huán)境中的復合轉(zhuǎn)化吸收效果,同時它也大大降低了工業(yè)生產(chǎn)物中生成乙二醛和生成草酸等有機化學金屬雜質(zhì)的大量排放,改善了工業(yè)生產(chǎn)物的空氣質(zhì)量,提高了部分乙醛酸在工業(yè)空氣環(huán)境中的復合吸附氧化效果;以硝酸過氧化氫代替取代部分生成硝酸,減少了部分硝酸的合理使用量和工業(yè)廢氣的大量產(chǎn)生,有利于環(huán)保。1.5高效液相色譜法簡介又叫高效液相色譜法或超快液相色譜法。采用高壓下的液體作為流動相柱色譜法。液相色譜中各種溶質(zhì)的擴散系數(shù)應該為氣相色譜的10-5~10-4;所用流動相的黏度比空氣相色譜大約100倍左右;液體流動相的構造對柱內(nèi)吸附分配平衡的重要性影響非常大,往往會成為我們在選擇分離時進行最優(yōu)化條件時的主要考慮因素,而氣相色譜中的流動相對分離時進行的影響通常是完全可以被忽略的。按照固定相與流動相之間的一個相對極性的尺寸來分類,高壓液相色譜一般可以細分為正相色譜和逆向色譜。正相色譜以硅膠或其他極性鍵合相為主要填料,以非極性溶劑為主要沖洗材料;一般來說,流動相的極性要遠遠小于固定相。逆向相色譜以極性較小的化學物質(zhì)為基礎來做固定相,流動性反應則極性更強。反相沖洗色譜常見的固定相主要應用指的也就是以烷基硅膠為主要基質(zhì)的各種烷基組成鍵的聯(lián)合相,如十八烷基鍵的聯(lián)合相;而水沖洗性溶劑色譜大部分都是采用烷基乙腈-液的水或烷基甲醇-液的水沖洗體系,能夠有效促進存在分子量和化學極性之間密度相差較大的各類色譜樣品不同成份的各組分之間進行反相沖洗和化學分離。高壓柱的液相色譜分析法主要特點具有以下幾個優(yōu)點:①柱在高壓柱的流動相比柱在低溫高壓下的工作流速快,大大縮短了液相色譜的工作分析量和工作持續(xù)時間;②柱在低溫高壓下也完全可以直接選擇使用惰性微粒(一般30~40μm,最低值一般可達10μm)高效固定相,使柱的分析工作效率可以得到很大幅度提高,柱的色譜分辨率可以得到很大很小幅度地顯著改善;③柱的靈敏度很高可自由選擇,靈敏度高,能連續(xù)測定組分的檢測器。由于HPLC法適用于熱穩(wěn)定性差,高沸點試樣的分析,而可克服GC的不足,被認為是與GC互補的兩大現(xiàn)代分離分析技術。2.1.6高效液相色譜法的主要類型吸附色譜(AdsorptionChromatography)分配色譜(PartitionChromatography)離子色譜(IonChromatography)體積排阻色譜(SizeExclusionChromatography)親和色譜(AffinityChromatography)2.試驗部分2.1儀器與試劑乙腈，分析純，阿達瑪斯試劑公司；乙醇酸甲酯，98%，阿達瑪斯試劑公司；乙醛酸水溶液；水，去離子水；Agilent1260Infinity型高效液相色譜儀；色譜柱HypersilODS2（4.6mm×250mm，5μm）；檢測器，可變波長掃描紫外檢測器（VWD）超聲波清洗機。流動相的配制：流動相A（水）先經(jīng)過微孔濾膜真空過濾后，超聲脫氣備用，流動相B（乙腈）為色譜純，直接備用。2.2試驗方法2.2.1樣品處理取待測樣品1.5ml加入注射器中，安裝0.22μm過濾膜，經(jīng)過濾膜過濾后加入樣品瓶中，震蕩搖勻。2.2.2實驗操作將樣品置于自動化進樣器的一個樣品盤中,在聯(lián)機工作站中設置好每次進樣的位置,進樣量為5.0μl,按照各種色譜條件的不同,使用多種色譜條件連續(xù)地進樣多次,根據(jù)資料優(yōu)化和分析的條件,找到最合理的色譜條件,在最適應的條件下將配制好的標準溶液,通過外標方法作出它的色譜標準曲線,采用峰面積增量法與峰保留比較法對來進行定性、定量的分析。3.結(jié)果與討論3.1檢測波長的確定根據(jù)相關文獻[3]所述,乙醇酸乙苯甲酯在202nm波長處應具有最大的分子吸收峰,在這里考慮到其中的分子流動相關性是基于乙腈和乙醇水溶液,檢測的吸收波長范圍可以重新設定大約為220nm。3.2色譜條件的建立3.2.1色譜柱的選擇實驗中所采用的流動相是一種水-乙腈體系,需要一款質(zhì)量高并能夠經(jīng)受熱沖洗的色譜柱,否則當流動相反復沖洗時,色譜柱就會因為自身的碳鏈相互作用而逐步坍塌,導致其流動相和固定相之間的摩擦力日益降低和減弱,從而可以使得色譜柱的質(zhì)量和壽命大大縮短。在通過分析和對比一些常用的色譜柱后,發(fā)現(xiàn)hypersilods2c18色譜柱的峰型以及分離效果較好,并且經(jīng)過多次的進樣后發(fā)現(xiàn)了該物質(zhì)的分離過程中,峰型與分離度未發(fā)生明顯變化,因此,選擇HypersilODS2C18色譜柱為實驗所用色譜柱。3.2.2流動相的選擇分別用水、甲醇-水、乙腈-水作為流動相研究分離結(jié)果，試驗得出：使用純水作為流動相，柱效較低；使用甲醇-水作為流動相，甲醇的會有強的本底吸收，對檢測器結(jié)果的干擾較大；用乙腈-水作為流動相，兩組分的分離效果較好，得到的峰型比較窄且對稱。3.2.3流速的選擇通過對0.5ml/min-1.5ml/min之間的各個流速進行測試,發(fā)現(xiàn)隨著各個流速的下降和減小,各個組分的峰值保留時間逐步增加,樣品之間的分離度逐步增大。綜合地考慮各個組分的水平和分離程度以及進入出峰期的時間,選用一般為1.3ml/min較為適宜,流速過大會導致各組分峰相互干擾,而流速過小會造成柱壓過小,峰型拖尾并且不對稱。3.2.4流動相組成比例的選擇流動相A與流動相B的比例對于乙醇酸甲酯和乙醛酸的分離效果影響較大。試驗嘗試的A與B混合比例分別為100：0、90：10、80：20、70：30、60：40、50：50和30：70的流動相。試驗發(fā)現(xiàn)：隨著乙腈含量越來越大，峰的分離度明顯降低，保留時間縮短，綜合考慮保留時間與分離效果，選定70：30作為流動相配比為較好選擇。3.2.5柱溫的選擇對比20℃、25℃、30℃這三個柱溫箱溫度下的乙醇酸甲酯峰型與分離度，發(fā)現(xiàn)基本沒有變化，考慮適度提升柱溫箱的溫度可以減少儀器靜電而產(chǎn)生的干擾，還可以減少由于室溫變化的不確定性產(chǎn)生的重復性誤差，從而使方法更加準確可信。因此，綜上考慮，選擇25℃為實驗溫度較為適宜。3.3線性實驗精密移取100%乙醇酸甲酯5，2，0.5，0.2，0.1mL于10ml容量瓶中，以流動相稀釋定容之后，制得50%，20%，5%，2%，1%五個濃度不同的標準溶液，用這些溶液分別進樣，以標準溶液的濃度為橫坐標，峰面積作為縱坐標，繪制出標準曲線，見圖1.

圖1乙醇酸甲酯標準曲線由圖1可知，乙醇酸甲酯濃度在1%-50%的范圍之間，線性良好。3.4精密度實驗精密吸取5%乙醇酸甲酯標準溶液1ml，加入樣品瓶中，按照設定好的色譜條件，連續(xù)進樣5針，測得結(jié)果相對標準偏差為1.36%，說明該檢測方法精密度較好。3.5重復性實驗取待測樣品，經(jīng)過0.22μm濾膜后制備5份樣品待測溶液，分別移取100μL進樣測定，通過外標法標準曲線進行定量，5份樣品中的平均含量為4.64%，相對標準偏差為1.62%，由此可見此方法重復性良好。4.結(jié)論用高效液相色譜法測定乙醇酸甲酯和乙醛酸混合溶液，各組分之間分離效果較好，方法簡便，分離檢測速度較快，精密度和重復性良好，可以用于乙醇酸甲酯反應體系中乙醇酸甲酯與乙醛酸的定性定量分析

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