游離DNA提取原理和方法

關(guān)于游離DNA提取原理和方法游離DNA介紹提取原理提取流程各緩沖液介紹第2頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天血中游離DNA簡(jiǎn)稱循環(huán)核酸指循環(huán)血中游離于細(xì)胞外的部分降解了的機(jī)體內(nèi)源性DNA。游離DNA大部分都是雙鏈DNA分子，血中游離DNA片段遠(yuǎn)小于基因組DNA，片段長(zhǎng)度集中在0.18～21kb之間。疾病的早期診斷，預(yù)后，檢測(cè)。游離DNA介紹第3頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天提取DNA總的原則:

1保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；2其他生物大分子的污染應(yīng)降低到最低程度；3核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；4其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。第4頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法比較第5頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天第6頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天破壞紅細(xì)胞,通常利用紅細(xì)胞與白細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的差異,先使紅細(xì)胞裂解,經(jīng)離心后收集白細(xì)胞白細(xì)胞裂使膜蛋白和核蛋白變性,游離DNA,通常是采用離子型表面活性劑使蛋白質(zhì)變性除去變性蛋白質(zhì)：通常采用蛋白沉淀劑沉淀變性蛋白質(zhì),使DNA留在上清液中在高鹽環(huán)境下使DNA從有機(jī)溶劑如無(wú)水乙醇中析出

原理本試劑盒采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)。樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽，高PH值時(shí)從硅膠膜上洗脫下來(lái)。第7頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天外周血細(xì)胞裂解上層溶液血清抽提干燥溶解離心洗滌酒精沉淀DNA溶液提取流程第8頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天各緩沖液介紹第9頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.SDS：十二烷基硫酸鈉3.Tris-HCl和NaCl：緩沖液4.EDTA

作用：細(xì)胞裂解時(shí),調(diào)節(jié)溶液的PH,維持一定的離子濃度作用：a.溶解細(xì)胞膜、核膜上脂質(zhì)成分

b.使蛋白質(zhì)變性，與蛋白質(zhì)結(jié)合成為復(fù)合物而沉淀下來(lái)

作用：是二價(jià)金屬螯合劑，使影響DNA的DNA酶中的鈣離子和鎂離子和EDTA結(jié)合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA。1.ProteinaseK:作用：能在SDS和EDTA的存在下保持很高的活性，降解蛋白質(zhì)，將DNA游離

主要試劑介紹5.酒精

作用：任意比和水相混溶，奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合第10頁(yè),共12頁(yè)，2024年2月25日，星期天DNA以弱堿性的Tris或者TE溶解。不存在金屬離子的干擾，故在提取或保存DNA時(shí)，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的保存：吸附柱：結(jié)構(gòu)：特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質(zhì)穿過(guò)。特點(diǎn)：高鹽低pH值結(jié)合核酸，低鹽高pH值洗脫。

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