細胞表位的研究

關于細胞表位的研究2第一部分

T細胞表位的基本概念第2頁,共50頁，2024年2月25日，星期天3抗原結合價Antigenicvalence

能與抗體分子結合的抗原表位的總數(shù)。半抗原——

單價抗原完全抗原——

多價抗原表位

Epitope

抗原決定基

AntigenicDeterminant

決定抗原特異性的特殊化學基團，是與抗體或抗原受體結合的基本結構單位。1、抗原表位的概念第3頁,共50頁，2024年2月25日，星期天42、抗原表位的類型順序表位（sequentialepitope)/線性表位

由連續(xù)性線性排列的短肽構成。構象表位(conformationtialepitope)/非線性表位短肽或多糖殘基在序列上不連續(xù)性排列，在空間上形成特定的構象。第4頁,共50頁，2024年2月25日，星期天5T細胞表位與B細胞表位第5頁,共50頁，2024年2月25日，星期天63、共同抗原表位(commonepitope)不同抗原間含有的相同或相似的表位。交叉反應(cross-reaction)

抗體或致敏淋巴細胞對具有相同或相似表位的不同抗原的反應。第6頁,共50頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共50頁，2024年2月25日，星期天MHCclassIpeptidesof8-10aminoacidsMHCclassIIpeptidesof>13aminoacidsb2-Ma-chainPeptidea-chainb-chainPeptide4.MHC分子和抗原肽的相互作用第8頁,共50頁，2024年2月25日，星期天

抗原肽和MHC相互作用的分子基礎

*錨定殘基（anchorresidue）

在抗原肽-MHC分子復合物中，抗原肽的兩個或兩個以上專司和MHC分子結合的氨基酸殘基稱為錨定殘基。

第9頁,共50頁，2024年2月25日，星期天YIMHC分子YIMHC分子PSASIKSPSAIKS共用模體第10頁,共50頁，2024年2月25日，星期天MHCI類分子胞外區(qū)的結構第11頁,共50頁，2024年2月25日，星期天抗原肽和HLA相互作用的分子基礎MHC限制性;CD4與CD8表位的差別；人和其他動物的差別第12頁,共50頁，2024年2月25日，星期天13第13頁,共50頁，2024年2月25日，星期天14T細胞表位的研究方法1.多肽片段的來源

降解；表達；人工合成2.MHC分子的結合

直接結合；預測3.抗原特異性T細胞的來源

感染或者免疫動物或病人

篩選方法

細胞系的建立4.檢測指標活化；增殖；細胞因子；殺傷作用第14頁,共50頁，2024年2月25日，星期天15T細胞表位的研究意義1.檢測刺激細胞使用Tetramer技術MHC2.疫苗表位疫苗3.治療第15頁,共50頁，2024年2月25日，星期天16第二部分SARS-CoVS蛋白T細胞表位的研究第16頁,共50頁，2024年2月25日，星期天17第17頁,共50頁，2024年2月25日，星期天1.SARS-CoVSDNA疫苗Zhi-yongYang(NIH)Nature.2004,428(1)第18頁,共50頁，2024年2月25日，星期天2.免疫方法8wfemaleBALB/cprimeatweek050ugDNAboosttwiceatweek3,62-3wafterprime4-6wafterboost1-2wafterboosttoobservetheeffectofprimeimmunizationtoobservetheeffectofboostimmunizationtoobservetheeffectoflongtermimmunization:mousesacrificed50ugDNAi.mi.m第19頁,共50頁，2024年2月25日，星期天3.單細胞懸液的準備

淋巴結脾肺剪碎（消化），研磨，200目篩網(wǎng)過濾，裂解紅細胞，2×106/ml第20頁,共50頁，2024年2月25日，星期天4.SARS-CoVS蛋白多肽169條,17-19aa,10aa重疊

(NIHNIAIDVRC)P1S1-17P2S8-25P3S16-22P168S1200-1216P169S1207-1255第21頁,共50頁，2024年2月25日，星期天1.S抗原刺激以后IFN-

（圖A）和IL-2的產生（圖B）

結果與討論Theemptycirclesrepresenttheresultsintheabsenceofpeptidesandsolidcirclesrepresenttheresultsinthepresenceofpeptides.第22頁,共50頁，2024年2月25日，星期天23第23頁,共50頁，2024年2月25日，星期天24Fig.2.VerificationofpotentialSARSCoVSepitopesPotentialSARSCoVSepitopesP50,P51,P59andP60inpool3,andP141,P144,P151andP152inpool8wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAimmunizedBALB/cmice.IFN-γproductionwasdetectedbyELISA(A)andELISPOT(B),respectively.Eachsymbolrepresentstheresultsofanindividualexperiment(n=3~7).Inaddition,intracellularcytokinestaining(C)wasperformedtodetermineCD4+orCD8+Tcellpopulation.“0”representsthenon-peptidestimulatedcontrol.Numbersatthecornerineachsamplerepresentthepercentageofpositivecells.Representativeresultsofthreeindependentexperimentswereshown.第24頁,共50頁，2024年2月25日，星期天25Fig.3.Identificationofnewsynthetic10aaCD4andCD8epitopesTheoverlappedaminoacidsbetweenP50andP51(N50),andbetweenP59andP60(N60)weresynthesized.PeptidesN50andN60wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAvaccine-immunizedmice.P50andP60wereusedaspositivecontrols,respectively.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedasdescribedabove.Furthermore,N50and60wereserialdilutedtostimulatesplenocytesfromtheDNAimmunizedmice,ELISPOT(C)wasperformedtodetectnumbersofantigenspecificIFN-γproducingcells.Experimentswerecarriedoutinduplicateandrepresentativeresultswereshown.“0”representsnon-peptide-culturednegativecontrol.第25頁,共50頁，2024年2月25日，星期天26Fig.4.SynergisticrolesofpeptideN50andN60inH-2bandH-2drestrictedmiceBALB/candC57BL/6micewereimmunizedbySARSCoVSDNAvaccineasdescribedpreviously.1-2weeksafterfinalboostvaccination,N50andN60wereadministratedaloneorcombinedtostimulatesplenocytesfrombothkindsofheterogeneousmiceatthesametimes.ELISA(A),ELISPOT(B)andFACS(C)wereperformedtodetectIFN-γ.“0”representsnon-peptidecontainednegativecontrol.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第26頁,共50頁，2024年2月25日，星期天27第27頁,共50頁，2024年2月25日，星期天28Fig.6.N50andN60canelicitantigenspecificimmuneresponsesinvivoBALB/cmicewereprimedtwicewiththeDNAvaccines.3weekslater,miceweredividedintofourgroups(n=4),injectedbypeptides(N50andN60,50μgofeach)plusCpGODN(25μg),peptide,CpGODNandPBS,respectively.1-2weeksafterboostvaccination,singlecellsuspensionswerepreparedfromlymphnode(LN),spleenandlung.CellswerestimulatedbypeptideN50andN60plusanti-CD28.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedtodetecttheantigenspecificIFN-γlevelsandcellsineachgroup.FACSwasperformedtodetectthefrequenciesofantigenspecificIFN-γand/orIL-2producingcellsinCD4+(C)andCD8+(D)Tcellpopulations,respectively.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第28頁,共50頁，2024年2月25日，星期天29第29頁,共50頁，2024年2月25日，星期天30第30頁,共50頁，2024年2月25日，星期天第三部分SARS-CoVS蛋白CTL表位殘基的初步研究第31頁,共50頁，2024年2月25日，星期天32第32頁,共50頁，2024年2月25日，星期天錨定位殘基第33頁,共50頁，2024年2月25日，星期天34第34頁,共50頁，2024年2月25日，星期天35第35頁,共50頁，2024年2月25日，星期天36第36頁,共50頁，2024年2月25日，星期天37第37頁,共50頁，2024年2月25日，星期天38第38頁,共50頁，2024年2月25日，星期天39第39頁,共50頁，2024年2月25日，星期天40第40頁,共50頁，2024年2月25日，星期天41