ADM基因轉染MSCs移植對心衰大鼠心臟功能及心肌重構的影響的開題報告

ADM基因轉染MSCs移植對心衰大鼠心臟功能及心肌重構的影響的開題報告一、研究背景及意義心衰是心臟病的一種嚴重形式，是由于心臟功能減弱以致不能滿足身體的需要而引起的一系列癥狀和體征，如氣促、疲勞、體重增加等。心衰是世界范圍內的一種重要公共衛(wèi)生問題，其患病率和死亡率不斷上升。雖然已有多種治療方法，包括藥物治療、心臟起搏器、心臟轉流術等，但治愈仍是一個難題。干細胞移植治療心衰是一種新興的治療方法。近年來，研究表明多能干細胞和造血干細胞在心臟再生中的潛在應用價值，但其臨床應用仍受到一些限制。因此，研究成熟的骨髓間充質干細胞（MSCs）作為基因載體，將相關基因導入MSCs，可大幅度提高移植干細胞的生存率，有效促進心血管再生，改善心衰大鼠心臟功能，從而成為一種潛在的治療方案。二、研究目的本研究旨在探究ADM基因轉染MSCs移植對心衰大鼠心臟功能及心肌重構的影響，并進一步明確其作用機制。三、研究計劃1.實驗內容(1)建立心衰大鼠模型：利用連續(xù)6周冠狀動脈狹窄模型制備心衰大鼠模型；(2)分離及培養(yǎng)MSCs：從大鼠骨髓中分離純化MSCs，進行擴增、鑒定及培養(yǎng)；(3)構建ADM基因質粒：采用PCR擴增ADM基因，將其克隆進入質粒載體中；(4)ADM基因轉染MSCs：采用脂質體介導的方法將ADM基因質粒轉染MSCs，過表達轉染效率；(5)制備ADM基因轉染MSCs移植液：將轉染成功的MSCs收集制備成移植液；(6)心肌移植：將制備好的ADM基因轉染MSCs移植液直接注射至心肌組織內；(7)檢測心衰大鼠心肌功能：采用M模式超聲心動圖儀檢測心衰大鼠心臟功能，統(tǒng)計LVFS、LVEF值；(8)追蹤MSCs移植存活情況：采用熒光素酶體外實驗（IVIS）檢測MSCs存活情況；(9)檢測心肌重構指標：采用實時熒光定量PCR和Westernblot檢測心肌重構指標基因表達情況。2.實驗時間表(1)前期準備工作：2個月(2)建立心衰大鼠模型及分離MSCs：2個月(3)構建ADM基因質粒及ADM基因轉染MSCs：2個月(4)制備ADM基因轉染MSCs移植液及心肌移植：1個月(5)檢測心衰大鼠心肌功能和心肌重構指標：1個月。3.實驗預期結果(1)制備成功ADM基因載體和ADM基因轉染MSCs；(2)ADM基因轉染MSCs移植能夠顯著改善心衰大鼠心肌功能；(3)ADM基因轉染MSCs移植具有促進心肌細胞增殖和減少心肌重構的作用。四、研究難點與創(chuàng)新點1.研究難點（1）心衰大鼠模型的構建；（2）MSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定；（3）ADM基因載體構建及脂質體介導轉染MSCs；（4）注射后MSCs存活情況檢測。2.研究創(chuàng)新點（1）應用ADM基因轉染MSCs移植治療心衰的方法進行研究；（2）追蹤MSC