一次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗

第第頁一次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗一次性使用衛(wèi)生用品是教唆用一次后即丟棄的，與人體直接或間接接觸的，并為達到人體生理衛(wèi)生或衛(wèi)生保?。?*或抑菌）目的而使用的各種日常生活用品，產品性狀可以是固體也可以是液體。例如，一次性使用手套或指套（不包括醫(yī)用手套或指套）、紙巾、濕巾、衛(wèi)生濕巾、衛(wèi)生棉（棒、簽、球）、化妝棉（紙、巾）、紙質餐飲具、電話膜、帽子、口罩、內褲、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品（包括衛(wèi)生護墊）、尿布等排泄物衛(wèi)生用品（不包括皺紋衛(wèi)生紙等廁所用紙）、避孕套等，以及衛(wèi)生部所發(fā)布的其他一次性使用衛(wèi)生用品。2.1.11.1樣品采集于同一批號的三個運輸包裝中至少抽取12個*小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另2/4樣品（可就地封存）必要時用于復檢。抽樣的*小銷售包裝不應有分裂，檢驗前不得啟開。2.1.11.2樣品微生物污染鑒定2.1.11.2.1**菌落總數(shù)與初始污染菌檢測法（1）樣品的處理在100級凈化條件下用無菌方法打開用于檢測的至少3個包裝，從每個包裝中取樣，精準稱取10g±1g樣品。剪碎后加入到200ml**生理鹽水（如產品中含有抑菌或**成份，須加入相應的中和劑）中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產品用原液直接作樣液（如產品中含有抑菌或**成份，須在樣液中加入相應的中和劑）。如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導致不能吸出充足樣液時，稀釋液量可按每次50ml遞增，直至能吸出充足測試用樣液。（2）活菌培育計數(shù)待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液接種5個平皿，參照2.1.1.3進行活菌培育計數(shù)。（3）結果報告當總菌落數(shù)在100以內，按實有數(shù)報告，大于100時采納二位有效數(shù)字。假如樣品菌落總數(shù)超過標準值，按下述方法進行復檢和結果報告。（4）復檢方法取留存的復檢樣品依前法復測2次，2次結果平均值都達到標準規(guī)定者，則判定被檢樣品合格；如其中仍有1次結果平均值超過標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。2.1.11.2.2大腸菌群檢測方法（1）操作步驟取樣液5ml接種50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管，置35℃±2℃培育24h，若不產酸也不產氣，則報告為大腸菌群陰性。如產酸產氣，則劃線接種伊紅亞甲藍瓊脂平板，置35℃±2℃培育18h～24h，察看平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。取疑似菌落1～2個作革蘭染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管，置35℃±2℃培育24h，察看產氣情況。（2）結果報告乳糖膽鹽發(fā)酵管產酸產氣，乳糖發(fā)酵管產酸產氣，在伊紅亞甲藍平板上有典型大腸菌落，革蘭染色為陰性無芽孢桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。2.1.11.2.3銅綠假單胞菌檢測方法（1）操作步驟取樣液5ml，加入到50mlSCDLP培育液中，充分混勻，置35℃±2℃培育18h～24h。如有銅綠假單胞菌生長，培育液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培育液常呈黃綠色或藍綠色。從培育液的薄菌膜處挑取培育物，劃線接種十六烷**基溴化銨瓊脂平板，置35℃±2℃培育18h～24h，察看菌落特征。銅綠假單胞菌在此培育基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落四周培育基略帶粉紅色，其他菌不長。取可疑菌落涂片作革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性菌者應進行下列試驗：氧化酶試驗：取一小塊干凈的白色濾紙片放在**平皿內，用無菌玻棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，30s內顯現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。綠膿菌素試驗：取2個～3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培育基斜面，35℃±2℃培育24h，加入三氯甲烷3ml～5ml，充分振蕩使培育物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲烷呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1ml，振蕩后靜置片刻。如上層顯現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。硝酸鹽還原產氣試驗：挑取被檢菌純培育物接種在硝酸鹽胨水培育基中，置35℃±2℃培育24h，培育基小倒管中有氣者即為陽性。明膠液化試驗：取可疑菌落純培育物，穿刺接種在明膠培育基內，置35℃±2℃培育24h，取出放于4℃～10℃，如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。42℃生長試驗：取可疑培育物，接種在一般瓊脂斜面培育基上，置42℃培育24h～48h，有銅綠假單胞菌生長為陽性。（2）結果報告被檢樣品經(jīng)增菌分別培育后，證明為革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。2.1.11.2.4金黃色葡萄球菌檢測方法（1）操作步驟取樣液5ml，加入到50mlSCDLP培育液中，充分混勻，置35℃±2℃培育24h。自上述增菌液中取1或2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培育基上，置35℃±2℃培育24h～48h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透亮，表面光滑，四周有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革蘭染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽孢與莢膜。鏡檢符合上列情況應進行下列試驗：甘露醇發(fā)酵試驗：取上述菌落接種甘露醇培育液，置35℃±2℃培育24h，發(fā)酵甘露醇產酸者為陽性。血漿凝固酶試驗：玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內顯現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗。試管法：吸取1：4新鮮血漿0.5ml，放**小試管中，加入等量待檢菌24**湯培育物0.5ml。混勻，放35℃±2℃溫箱或水浴中，每半小時察看一次，24h之內呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培育物各0.5ml作為陽性與陰性對比。（2）結果報告凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。2.1.11.2.5溶血性鏈球菌檢測方法（1）操作步驟取樣液5ml加入到50ml葡萄糖肉湯，35℃±2℃培育24h。將培育物劃線接種血瓊脂平板，35℃±2℃培育24h察看菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透亮或不透亮，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，四周有無色透亮溶血圈。挑取典型菌落作涂片革蘭染色鏡檢，應為革蘭陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2ml（0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液），加入0.8ml**生理鹽水，混勻后再加入待檢菌24**湯培育物0.5ml和0.25%氯化鈣0.25ml，混勻，放35℃±2℃水浴中，2min察看一次（一般10min內可凝固），待血漿凝固后連續(xù)察看并記錄溶化時間。如2h內不溶化，連續(xù)放置24h察看，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為陰性。桿菌肽敏感試驗：將被檢菌菌液涂于血平板上，用**鑷子取每片含0.04單位桿菌肽的紙片放在平板表面上，同時以已知陽性菌株作對比，在35℃±2℃下放置18h～24h，有抑菌帶者為陽性。（2）結果報告鏡檢革蘭陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈，鏈激酶和桿菌肽試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。2.1.11.2.6**菌落總數(shù)檢測方法（1）操作步驟待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作**計數(shù)。共接種5個平皿，每個平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培育基15ml～25ml倒入每個平皿內混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平皿置25℃±2℃培育7d，分別于3d、5d、7d察看，計算平板上的菌落數(shù)，假如發(fā)覺菌落擴散，以前一次的菌落計數(shù)為準。（2）結果報告菌落呈片狀生長的平板不宜采納；計數(shù)符合要求的平板上的菌落，按下式計算結果：式中：XF為樣品**菌落總數(shù)，cfu/g或cfu/ml；Nt為5塊沙氏瓊脂培育基平板上的**菌落總數(shù)；K為稀釋度。當菌落數(shù)在100以內，按實有數(shù)報告，大于100時采納二位有效數(shù)字。假如樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按下述方法進行復檢和結果報告。（3）復檢方法將留存的復檢樣品依前法復測2次，2次結果平均值都達到標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結果平均值超過標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。2.1.11.2.7**定性檢測方法（1）操作步驟取樣液5ml加入到50ml沙氏培育基中，25℃±2℃培育7d，逐日察看有無**生長。（2）結果報告培育管混濁應轉種沙氏瓊脂培育基，證明有**生長，可報告被檢樣品檢出**。2.1.11.3產品**性能、抑菌性能及其穩(wěn)定性鑒定**性能與抑菌性能試驗取樣部位，依據(jù)被試產品生產者的說明而確定。2.1.11.3.1**性能測試方法（1）試驗菌與菌液制備1）試驗菌：**：金黃色葡萄球菌（ATCC6538），大腸桿菌（8099或ATCC25922）；酵母菌：白色***（ATCC10231）。2）染菌樣片制備：取菌株第3代～14代的營養(yǎng)瓊脂培育基斜面新鮮培育物（18h～24h），用5mL0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，后用上述PBS稀釋至所需濃度，取100μl滴于樣片（2.0cm×3.0cm）上，使回收菌數(shù)達1×104cfu/片）～9×104cfu/片。3）菌液制備：取菌株第3代～14代的營養(yǎng)瓊脂培育基斜面新鮮培育物（18h～24h），用5ml0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用上述PBS稀釋至所需濃度.（2）中和劑鑒定試驗：參照2.1.1.5中和劑載體定量鑒定試驗方法進行。（3）**試驗參照2.1.1.7.5載體浸泡定量**試驗方法進行。1）操作步驟將試驗菌24h斜面培育物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100μl滴于對比樣片上，回收菌數(shù)為1×104cfu/片）～9×104cfu/片）。取被試樣片（2.0cm×3.0cm）和對比樣片（與試樣同質材料，同等大小，但不含**材料，且經(jīng)**處理）各4片，分成4組置于4個**平皿內。取上述菌懸液，分別在每個被試樣片和對比樣片上滴加100μl，均勻涂布，開始計時，作用2min、5min、10min、20min，用無菌鑷分別將樣片投入含5ml相應中和劑的試管內，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2個～3個稀釋度，分別吸取0.5ml，置于兩個平皿，用涼至40℃～45℃的營養(yǎng)瓊脂培育基（**）或沙氏瓊脂培育基（酵母菌）15ml作傾注，轉動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，35℃±2℃培育48h（**）或72h（酵母菌），作活菌菌落計數(shù)。試驗重復3次，按下式計算**率：式中：X為**率，%；NC為對比樣品平均菌落數(shù)，cfu/片；NS為被試樣品平均菌落數(shù)，cfu/片。（4）評價標準**率≥90%，產品有**作用。2.1.11.3.2溶出性抗（抑）菌產品抑菌性能測試方法（1）操作步驟將試驗菌24h斜面培育物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100μl滴于對比樣片上或5ml樣液內，回收菌數(shù)為1×104cfu/片或ml～9×104cfu/片或ml）。取被試樣片（2.0cm×3.0cm）或樣液（5ml）和對比樣片或樣液（與樣片同質材料，同等大小，但不含**材料，且經(jīng)**處理）各4片（置于**平皿內）或4管。取上述菌懸液，分別在每個被試樣片或樣液和對比樣片或樣液上或內滴加100μl，均勻涂布/混合，開始計時，作用2min、5min、10min、20min，用無菌鑷分別將樣片或樣液（0.5ml）投入含5mlPBS的試管內，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2個～3個稀釋度，分別吸取0.5ml，置于2個平皿，用涼至40℃～45℃的營養(yǎng)瓊脂培育基（**）或沙氏瓊脂培育基（酵母菌）15ml作傾注，轉動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，35℃±2℃培育48h（**）或72h（酵母菌），作活菌菌落計數(shù)。試驗重復3次，按下式計算抑菌率:式中：X為抑菌率，%；NC為對比樣品平均菌落數(shù)，cfu/片；NS為被試樣品平均菌落數(shù)，cfu/片。（2）評價標準抑菌率≥50%～90%，產品有抑菌作用，抑菌率≥90%，產品有較強抑菌作用。2.1.11.3.3非溶出性抗（抑）菌產品抑菌性能測試方法參照2.1.7.6振蕩燒瓶試驗方法進行2.1.11.3.4穩(wěn)定性測試方法（1）測試條件1）自然留樣：將原包裝樣品置室溫下按使用說明書規(guī)定的時間抽樣進行抑菌或**性能測試。2）加速試驗：將原包裝樣品置54℃～56℃恒溫箱內14d或37℃～40℃恒溫箱內3個月，保持相對濕度≥75%，抽樣進行抑菌或**性能測試。（2）評價標準1）自然留樣，其**率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產品的**或抑菌作用有效期為自然留樣時間。2）54℃加速試驗，其**率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產品的**或抑菌作用有效期為室溫保存至少1年。3）37℃加速試驗，其**率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產品的**或抑菌作用有效期為室溫下至少保持2年。2.1.11.4產品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法（可參見GB15979—2023）2.1.11.5產品毒理學鑒定2.1.11.5.1鑒定指標當原材料、生產工藝等發(fā)生變化可能影響產品毒性時，應按下表2—7依據(jù)不同產品種類供給有效的（經(jīng)政府認定的第三方）成品毒理學測試報告。表2—7產品毒理學試驗選項產品種類皮膚刺激試驗**粘膜刺激試驗皮膚變態(tài)反應試驗手套或指套、內褲??**（或抑菌）液體產品?依據(jù)用途選擇*?濕巾、衛(wèi)生濕巾?依據(jù)用途選擇*依據(jù)材料選擇口罩?婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品??尿布等排泄物衛(wèi)生用品??避孕套??*用于**粘膜的產品須做**粘膜刺激試驗，但無須做皮膚刺激試驗。2.1.11.5.2試驗方法皮膚刺激試驗、**粘膜刺激試驗和皮膚變態(tài)反應試驗方法按2.3的方法測試。固體產品的樣品制備方法依照2.1.11.5.3樣品制備進行。注：1）用于皮膚刺激試驗中的空白對比應為：生理鹽水和斑貼紙。2）在皮膚變態(tài)反應中，致敏處理和激發(fā)處理所用的劑量保持一致。2.1.11.5.3樣品制備（1）皮膚刺激試驗和皮膚變態(tài)反應試驗以橫斷方式剪一塊斑貼大小的產品。對于干的產品，如尿布、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品，用生理鹽水潤濕后貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋。濕的產品，如濕巾，則可以按要求裁剪合適的面積，直接貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋。（2）**粘膜刺激試驗1）干的產品（如婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品）：以橫斷方式剪取充足重量的產品，按1g/10ml的比例加入**生理鹽水，密封于萃取容器中攪拌后置于37℃±1℃下24h。冷卻到室溫，攪拌后析取樣液備檢。2）濕的產品（如衛(wèi)生濕巾）：在進行**粘膜刺激試驗的當天，擠出濕巾里的添加液作為樣片。2.1.11.5.4判定標準按2.3中的相應部分作為試驗結果判定原則。2.1.11.6**效果生物監(jiān)測評價方法2.1.11.6.1環(huán)氧乙烷**或**參照2.1.5.6環(huán)氧乙烷**器**效果鑒定試驗進行。（1）環(huán)氧乙烷**效果評價用生物指示菌為枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）。在菌量為5×105cfu/個～5×106cfu/個、環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L±30mg/L、作用溫度為54℃±2℃、相對濕度為60%±10%條件下，其殺滅90%微生物所需時間D值應為2.5min～5.8min，存活時間≥7.5min，殺滅時間≤58min。（2）每次測試至少布放10片生物指示劑，放于*難殺滅處。**完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培育液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培育基作定量檢測，將未處理陽性對比菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃培育。陽性對比應在24h內有菌生長。定性培育樣品如連續(xù)察看7d全部無菌生長，可報告生物指示劑培育陰性，**合格。定量培育樣品與陽性對比相比殺滅對數(shù)值達到3.0也可報告**合格。2.1.11.6.2電離輻射**或**（1）生物指示菌短小桿菌芽孢E601（ATCC27142），在菌量為5×105cfu/個～5×106cfu/個時，其D10值應為1.7kGy。（2）檢測方法每次測試至少選5箱，每箱產品布放3片生物指示劑，將待檢箱置*小劑量處。**完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培育液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培育基作定量檢測，將未處理陽性對比菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃培育。（3）結果判定陽性對比應在24h內有菌生長。定性培育樣品如連續(xù)察看7d全部無菌生長，可報告生物指示劑培育陰性，**合格。定量培育樣品與陽性對比相比殺滅對數(shù)值達到3.0也可報告**合格。2.1.11.6.3壓力蒸汽**或**參照GB15981—1995《**與**效果的評價方法與標準》**篇：壓力蒸汽**效果