傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性課件

傳染病診斷技術(shù)

國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

許文波

國家麻疹/脊灰實(shí)驗(yàn)室病毒病預(yù)防控制所,中國疾病預(yù)防控制中心傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性對(duì)于傳染病的預(yù)防、控制和治療，最關(guān)鍵的是對(duì)疾病的早期診斷。無論是細(xì)菌性的還是病毒性的傳染病，快速、準(zhǔn)確地診斷出傳染病病因和傳播途徑對(duì)于傳染病的預(yù)防、控制尤其重要一些新出現(xiàn)的傳染性疾病，尤其是病毒性傳染病的發(fā)生頻率越來越高，給人民的健康安全帶來嚴(yán)重威脅。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性新發(fā)和突發(fā)傳染病病毒診斷用的標(biāo)本病毒分離鑒定所用的細(xì)胞病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)類型診斷試劑國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的展望臨床中的病毒病診斷分子流行病學(xué)在病毒病診斷中的應(yīng)用國家麻疹、脊灰和HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)和研究領(lǐng)域傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性1.新發(fā)和突發(fā)傳染病

Emergingandre-emergingviraldiseases

:一種新的疾病以前沒有鑒定出來已經(jīng)知道的疾病的發(fā)病率或地理分布明顯增加或擴(kuò)大已經(jīng)存在的病毒發(fā)生重組形成一個(gè)新病毒SARS-coronavirusNipahvirusHendravirusAustralianbatlyssavirusMenanglevirusJapaneseencephalitisvirusChikungunyavirusDenguevirusesAdv14Adv11變異株(和Adv14重組)Enterovirus712009-H1N1Flu(SwineFlu)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病原微生物危險(xiǎn)感染性的致病因子，無論是直接感染人類，還是間接地散播到環(huán)境中去，對(duì)人類、動(dòng)物或植物都是一個(gè)現(xiàn)實(shí)的或潛在的危險(xiǎn)。AnimalsHumansPlants傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性Chernobyl傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性2.病毒診斷所用的標(biāo)本-a

-標(biāo)本質(zhì)量對(duì)于病毒診斷至關(guān)重要

對(duì)于診斷急性病毒性感染最好是采集于疾病發(fā)生的部位、或傳播部位的標(biāo)本。標(biāo)本（除血清外）運(yùn)輸應(yīng)在4℃冷藏,如果超過24小時(shí),標(biāo)本應(yīng)保存于-70℃或更低。血清學(xué)診斷的急性期標(biāo)本通常應(yīng)在發(fā)病最初幾天獲得，恢復(fù)期標(biāo)本在2-4周后獲得。一些病毒感染也可從唾液或尿中檢測(cè)到抗體。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性2.病毒診斷用的標(biāo)本-b

標(biāo)本的正確收集、處理至關(guān)重要-1（成功的第一步）

病毒分離和用于提取RNA標(biāo)本的采集時(shí)間，位置及質(zhì)量直接關(guān)系到能否成功分離到病毒或RNA的活性，而標(biāo)本保存與運(yùn)輸不當(dāng)也會(huì)影響病毒的分離。為提高病毒的分離率。在用于病毒分離的樣品采集的數(shù)量、類型和地點(diǎn)方面，實(shí)驗(yàn)室與流行病醫(yī)生應(yīng)達(dá)成共識(shí)。一般來說，病毒分離用樣品應(yīng)與血樣同時(shí)采集，以便做血清學(xué)診斷。

血液、CSF、尸檢組織標(biāo)本,糞便標(biāo)本,咽拭子、鼻咽拭子和下呼吸道分泌物吸取液傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒實(shí)驗(yàn)室維持良好的細(xì)胞系特別重要細(xì)胞系經(jīng)常被支原體污染

支原體污染會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的培養(yǎng)，因?yàn)檫@種污染不抑制細(xì)胞生長，即使在顯微鏡下觀察也很難察覺。與細(xì)菌和真菌相比，支原體污染比較容易蔓延到其他培養(yǎng)中，而且很多對(duì)細(xì)菌污染有效的抗生素，支原體卻并不敏感。

3.病毒分離鑒定所用的細(xì)胞－１傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性樹立“預(yù)防為主”的思想保證細(xì)胞來源干凈確?；|(zhì)和器材無菌嚴(yán)格無菌操作細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)避免交談操作結(jié)束時(shí)消毒臺(tái)面每傳15代的細(xì)胞應(yīng)更換所有細(xì)胞培養(yǎng)材料丟棄前應(yīng)高壓消毒3.病毒分離鑒定所用的細(xì)胞－2傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性L20BadenovirusCPERD-AadenovirusCPEＶＥＲＯＣＥＬＬＬＩＮＥＶＥＲＯ－ＣＰＥ－ＲＶ傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

病毒復(fù)制的檢測(cè)抗原檢測(cè)核酸檢測(cè)血清學(xué)抗體檢測(cè)4.病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)類型每種方法各有優(yōu)勢(shì),依據(jù)病毒來定檢測(cè)策略傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性4.病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)類型-病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測(cè)抗體/抗原檢測(cè)病毒檢測(cè)核酸ELISA/HI/PA蛋白印跡免疫熒光病毒分離ELISA中和試驗(yàn)電鏡基因芯片中和試驗(yàn)RT-PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCR套式PCRLAMP免疫熒光基因芯片每種方法各有優(yōu)勢(shì),依據(jù)病毒來定檢測(cè)策略Newmoleculartoolsforepidemiologystudiesanddiagnosis傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒復(fù)制的檢測(cè)

1）細(xì)胞病變-病毒分離和鑒定

2）血吸附實(shí)驗(yàn)

3）干擾試驗(yàn)。

4）其它檢測(cè)方法

5）Shellviralculture6）基因工程細(xì)胞學(xué)

7）電子顯微鏡

8）標(biāo)本的直接檢測(cè)

9）檢測(cè)固定的細(xì)胞

10)感染型細(xì)胞的檢查

11)光學(xué)顯微鏡

12）細(xì)胞學(xué)檢查

13）組織學(xué)檢查

14)核酸檢測(cè)病毒包涵體傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性抗原檢測(cè)-1

用于病毒抗原檢測(cè)的方法包括IFA、IHC、ELISA優(yōu)點(diǎn)：

可在接到標(biāo)本幾個(gè)小時(shí)內(nèi)獲得結(jié)果，檢測(cè)不需活病毒（特別是標(biāo)本運(yùn)輸時(shí)間較長時(shí)）

在下列情況可進(jìn)行抗原檢測(cè)有病毒抗原表達(dá)；有特異性抗體；抗原有變異，但在不同株之間有共同抗原位點(diǎn)；抗原在運(yùn)輸貯藏時(shí)穩(wěn)定。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性抗原檢測(cè)-2

標(biāo)本：呼吸道（鼻咽拭子或鼻咽洗液，氣管呼吸道灌洗液）病毒：呼吸道合胞病毒，流感病毒A，B。副流感病毒1-3

麻疹和腺病毒,風(fēng)疹標(biāo)本：皮膚和黏膜拭子病毒：水痘病毒，皰疹病毒標(biāo)本：結(jié)膜或角膜拭子病毒：皰疹病毒,腺病毒標(biāo)本：糞便病毒：腺病毒（腸道血清型），輪狀病毒,腸道病毒?等標(biāo)本：血病毒：CMV（pp65），乙肝病毒（表面抗原），HIV（p24）

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性用于病毒診斷的核酸檢測(cè)標(biāo)本

血液、CSF、尸檢組織標(biāo)本,糞便標(biāo)本,咽拭子、鼻咽拭子和下呼吸道分泌物吸取液傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性血清學(xué)診斷-1測(cè)定病毒抗體是最早應(yīng)用于病毒學(xué)診斷的方法之一，仍然在病毒學(xué)診斷中占有重要的地位。血清學(xué)診斷對(duì)那些不能培養(yǎng)或培養(yǎng)緩慢或較困難的病毒尤其重要。血清學(xué)方法的敏感性十分重要，ELISA法應(yīng)用廣泛。

1）病毒抗體反應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化

2)再感染和再激活時(shí)抗體的變化

3）慢性感染的血清學(xué)

4）血清學(xué)方法

A結(jié)合試驗(yàn)：

B抗原分離試驗(yàn)：

C功能測(cè)定試驗(yàn)

D凝集試驗(yàn)

5）特異性IgM,IgA和IgG抗體

6）唾液和尿液中的抗體檢測(cè)

7）CSF中抗體檢測(cè)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性血清學(xué)診斷-2

病毒的急性期感染

Epstein-BarrvirusaCytomegalovirus(mononucleosissyndrome)aHepatitisViruses(A-E)bMeaslesaRubellaaMumpsaParvovirusB19aEncephalitisvirusesaRabiesHemorrhagicfevervirusesaDengueaHumanimmunodeficiencyvirusHumanT-celllymphotrophicvirustypesIandIIA：檢測(cè)特異IgMB：用于HAV和抗HBV核心抗原的IgM檢測(cè)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性血清學(xué)診斷-3

測(cè)定對(duì)特定病毒的免疫水平

VZVHSVEpstein-Barrvirus(IgGtotheviralcapsidantigen)RubellaMeaslesParvovirusB19HepatitisAvirus(totalantibodies)HepatitisBvirus(anti-HBs)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

常用的病毒ELISA檢測(cè)方法主要有兩種：CaptureELISAIndirectELISA

一般認(rèn)為抗體捕捉法ELISA比間接ELISA法優(yōu)越，無需對(duì)血清進(jìn)行預(yù)處理傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性血清學(xué)檢測(cè)—IgM/IgG抗體檢測(cè)間接法ELISA檢測(cè)IgM/IgG抗體原理圖（IgM檢測(cè)時(shí)，血清需進(jìn)行預(yù)吸附以去除IgG抗體和類風(fēng)濕因子）傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性ELISA捕獲法檢測(cè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體原理圖血清學(xué)檢測(cè)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性新技術(shù)-多種病原的同時(shí)檢測(cè)目前廣泛使用的免疫學(xué)試驗(yàn)方法只能獲得單個(gè)病原體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不明原因疫情需要按順序進(jìn)行排查耗費(fèi)時(shí)間和價(jià)格較高試驗(yàn)方法不統(tǒng)一昂貴的自動(dòng)化信息量少。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性多種病毒抗體的同時(shí)檢測(cè)可同時(shí)得到多種參數(shù)短時(shí)間內(nèi)價(jià)格低廉用統(tǒng)一的方式簡(jiǎn)單的自動(dòng)化傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性新技術(shù):短時(shí)間內(nèi)可同時(shí)得到多種病原體檢測(cè)結(jié)果相對(duì)價(jià)格低廉試驗(yàn)方法統(tǒng)一易于自動(dòng)化，操作簡(jiǎn)單。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性基本原理首先將不同病原體的抗原包被于球形固相載體上傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性對(duì)球型固相載體進(jìn)行編碼

用不同的熒光色的深度來表示不同的抗原在700納米時(shí)其吸收值最大傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性混合包被

的抗原與待測(cè)血清中抗體結(jié)合加入熒光標(biāo)記二抗照射:488納米的激光綠色熒光(定量):標(biāo)記物指示抗體多少

紅色熒光(定性):決定被檢物是是哪種病原體

流程圖傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性檢測(cè):原理(2)照射:488納米的激光傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性檢測(cè):原理(3)綠色:熒光標(biāo)記物多少抗體

(定量)紅色:包被的抗原哪種抗原

(定性)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性檢測(cè):報(bào)告輸出格式定量定性傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性檢測(cè)需要流式細(xì)胞儀傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性多種檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用-ToRCH

一些病原體能感染孕期婦女導(dǎo)致新生兒先天畸形如：弓形蟲風(fēng)疹病毒巨細(xì)胞病毒單純皰疹病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

主要依靠臨床診斷——導(dǎo)致誤診，病原構(gòu)成不明確，難以發(fā)現(xiàn)新病原引起的疾病負(fù)擔(dān)

特異診斷主要依靠病原分離——慢，靈敏度不高暴發(fā)應(yīng)急病因?qū)W診斷效率低——常不能確定病原，或時(shí)間長、病原多、工作量大水、食品、空氣標(biāo)本細(xì)菌檢測(cè)靈敏度低——無法開展常規(guī)監(jiān)測(cè)、危險(xiǎn)度評(píng)估、暴發(fā)流行中溯源

分離菌落依靠血清鑒定和生化反應(yīng)——慢，通量低，只能選擇部分“疑似”菌落進(jìn)行鑒定，偏主觀、存在漏檢5.診斷試劑國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的展望1-商品化試劑嚴(yán)重滯后傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性引起五大癥侯群的常見病原微生物發(fā)熱呼吸道癥候群病毒：人流感病毒、呼吸道合胞病毒、人腺病毒、人副流感病毒、人偏肺病毒、人冠狀病毒、人博卡病毒等細(xì)菌：肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎克雷伯桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、A組鏈球菌、軍團(tuán)菌、肺炎衣原體、肺炎支原體等腹瀉癥候群細(xì)菌：沙門菌、志賀菌、彎曲菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、致病性弧菌（霍亂弧菌、副溶血弧菌、其他致病弧菌）、致瀉性大腸桿菌（EPEC、ETEC、EIEC、EHEC）、嗜水氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌等。病毒：輪狀病毒、腸道腺病毒、諾如病毒、札如病毒、星狀病毒、小雙節(jié)RNA病毒等。寄生蟲：溶組織內(nèi)阿米巴、賈第蟲、隱孢子蟲等發(fā)熱伴出疹癥候群病毒：水痘-帶狀皰疹病毒、人類小DNA病毒B19、登革熱病毒、腸道病毒、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒等。細(xì)菌：鏈球菌、傷寒副傷寒沙門菌、伯氏疏螺旋體等發(fā)熱伴出血癥候群細(xì)菌：鼠疫桿菌、腦膜炎奈瑟菌、鉤端螺旋體、豬鏈球菌、溶血性鏈球菌、立克次體等。病毒：漢坦病毒、登革病毒、新疆出血熱病毒等腦炎腦膜炎癥候群細(xì)菌：腦膜炎奈瑟菌、b型流感嗜血桿菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌、豬鏈球菌、大腸桿菌、隱球菌等。病毒：乙腦病毒、腮腺炎病毒、腸道病毒、單純皰疹病毒等。寄生蟲：弓形蟲、囊蟲、瘧原蟲（腦型瘧疾）等傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

5.診斷試劑國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的展望-2

現(xiàn)階段病毒學(xué)診斷已成為醫(yī)院里的常規(guī)服務(wù)，特別是下列因素的影響，加速了臨床醫(yī)院和CDC病毒病診斷的發(fā)展。

1）

HIV的流行和AIDS的治療

2）

病毒感染與器官移植

3）

多種抗病毒制劑的應(yīng)用，依賴于正確的診斷

4）診斷技術(shù)的發(fā)展:單克隆抗體（Mcab）、基因工程抗原和PCR技術(shù)的應(yīng)用，使診斷時(shí)間大大縮短。

5）多種方法應(yīng)用于病毒病感染的診斷。病毒培養(yǎng)、檢測(cè)抗體、檢測(cè)抗原、核酸等。

6)病毒病的強(qiáng)化控制,消除和消滅但大部分病毒診斷技術(shù)仍集中省級(jí)CDC、大醫(yī)院或大的醫(yī)療研究中心傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

5.診斷試劑國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的展望-3

在一些臨床領(lǐng)域病毒實(shí)驗(yàn)室診斷具有重要的位置免疫缺陷的病人、器官移植的接受者、HIV或AIDS.急性呼吸道感染、兒童胃腸道感染。感染單核細(xì)胞增多癥，急慢性病毒性肝炎、嚴(yán)重的眼部感染。新生兒或胎兒先天性感染。發(fā)熱和出疹性疾病通過病毒學(xué)檢測(cè)直接或間接確定和評(píng)價(jià)一個(gè)新的治療方案。例如對(duì)HIV或AIDS的抗病毒治療中依賴于血漿的HIVRNA的含量、基因型別和表型及對(duì)藥物的抵抗。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

5.

診斷試劑國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的展望-4

診斷病毒學(xué)在公共衛(wèi)生方面的重要性監(jiān)測(cè)和分析新的病毒分離株,包括新的血清型或基因型，監(jiān)測(cè)可能的輸入病毒或預(yù)測(cè)可能的流行。早期診斷麻疹和風(fēng)疹為強(qiáng)化免疫提供科學(xué)依據(jù)，防止暴發(fā)和流行。鑒定蟲媒腦炎，幫助制訂控制蚊子的措施。檢測(cè)Norwalk病毒和其他杯狀病毒（caliciviruses）幫助制訂和控制食物和水傳播的胃腸道炎。

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性“阜陽13例不明原因肺炎死亡病例”病例高度散發(fā)不具有傳染性，可能為感染性疾病只在一例中發(fā)現(xiàn)疹子以“重癥肺炎”為主要臨床表現(xiàn)病情進(jìn)展迅速，大部分入院幾小時(shí)-2天死亡病因不明討論會(huì):EV71感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起的心肺衰竭可能性最大“疫情概況”傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性阜陽不明原因肺炎死亡病原學(xué)鑒定4月18，中國CDC組織專家組流行病學(xué)臨床資料實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)EV71是此次疾病的主要致病原證實(shí)4月23日分析判定病原和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方向?yàn)?HEV71傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性手足口病

第38種需上報(bào)的傳染性疾病2008.05.02手足口病皮疹分布

1.頰粘膜和手指;2.手掌

3.足底

4.唇粘膜

5.咽峽炎12345EV71;無皮疹的重癥病例5傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性2005年8月17日傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性468例發(fā)熱呼吸道傳染病爆發(fā)主要臨床表現(xiàn)構(gòu)成圖傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

6.臨床中的病毒病診斷

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性6.臨床中的病毒病診斷

皰疹病毒感染呼吸道感染胃腸道病毒感染病毒性腦膜炎和腦炎病毒性肝炎人乳頭瘤病毒（HumanPapillomaviruses）人類多瘤病毒（HumanPolyomaviruses）病毒引起的出疹性疾病腸道病毒感染病毒先天性或新生兒感染逆轉(zhuǎn)錄病毒Retroviruses外部傳入病毒的感染傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性皰疹病毒感染α-皰疹病毒HSV和VZV，可感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起腦炎、腦膜炎和脊髓炎。可通過培養(yǎng)和抗原檢測(cè)來診斷，新鮮的水泡更易于分離病毒。HSV對(duì)兔腎，豚鼠胚胎細(xì)胞；貂肺細(xì)胞和Vero細(xì)胞培養(yǎng)敏感。VZV培養(yǎng)較困難，只在人胚纖維細(xì)胞中和猴腎上生長。FA可快速診斷HSV和VZV，也可用PCR法檢測(cè)。血清學(xué)：需雙份血，特別是血清學(xué)交叉反應(yīng)，不能區(qū)分初次和無癥狀（復(fù)發(fā)）。HSV-Ⅰ型和Ⅱ型特異性診斷方法已建立。VZV：如果在未能獲得病毒培養(yǎng)和抗原檢測(cè)結(jié)果時(shí)，血清陽轉(zhuǎn)可診斷。如果IgM陽性證明可能是原發(fā)感染或激活。ELISA，IFA和乳膠凝集法已廣泛應(yīng)用于VZV免疫力的測(cè)定。

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性皰疹病毒感染β-皰疹病毒CMV、HHV6、HHV7這些病毒在人群中廣泛感染多為無癥狀，但有時(shí)特別是免疫抑制者中引起嚴(yán)重疾病。問題是檢測(cè)的結(jié)果是否伴隨病理損害，組織學(xué)檢查可提供依據(jù)。CMV只在人胚纖維細(xì)胞中生長，7-21天才能出現(xiàn)CPE。Shellviral診斷CMV可在24-28小時(shí)出結(jié)果，在臨床上快速診斷尤其重要。CMV培養(yǎng)結(jié)果陽性不一定代表引起疾病，無癥狀者唾液和尿液中都能釋放病毒，對(duì)診斷意義不大。但血液中的培養(yǎng)更確切，因?yàn)闊o癥狀者血清中無CMV（免疫抑者除外）。但血清陽性的免疫抑制者可無癥狀或提示有感染引起的癥狀。FA和IP法快速檢測(cè)血中白細(xì)胞上的PP65抗原。CMV在正常機(jī)體里常表現(xiàn)為單核細(xì)胞樣增多癥，通常檢測(cè)CMV-IgM做為一種簡(jiǎn)便的診斷。EBV感染可導(dǎo)致CMVIgM假陽性，CMV引起的單核增多癥可從尿和血中培養(yǎng)到CMV或PCR檢測(cè)PP65基因。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性皰疹病毒感染β-皰疹病毒CMV的核酸檢測(cè)法：用PCR和地高辛標(biāo)記的核酸雜交法檢測(cè)CMV的DNA。通常檢測(cè)血中DNA證實(shí)急性期感染，并且血清DNA陽性的個(gè)體提示正在臨床感染期或近期感染過。（免疫抑制個(gè)體者除外）。定量檢測(cè)血中CMVDNA量對(duì)該抗病毒治療尤為重要。CMV的ELISA血清學(xué)診斷方法：不用于（免疫抑制個(gè)體），但用于檢測(cè)獻(xiàn)血者、受血者、器官捐獻(xiàn)者和接受者的CMV的免疫狀態(tài)。CMV在免疫抑制的個(gè)體：在器官或骨髓移植后，沒有完美的方法診斷CMV感染綜合征。CMV局部感染的診斷：CMV感染肺炎或胃腸炎等并不一定伴隨病毒血癥，最好的方法采取局部組織檢查，診斷中檢查中樞系統(tǒng)感染最好是檢測(cè)CSF中DNA（PCR法）CMV在移植后癥狀前的診斷：術(shù)者4個(gè)月內(nèi)每1-2周進(jìn)行血清中CMV檢測(cè)，PCR最敏感，也可用核酸雜交，PP65抗原檢測(cè)法。細(xì)胞培養(yǎng)最不敏感。評(píng)判抗CMV治療的效果：先天性CMV感染通過培養(yǎng)或PCR檢測(cè)出生后第1周尿中的病毒，也可檢測(cè)羊水（但時(shí)間要準(zhǔn)確）人單皰病毒6和7型。HHV6引起嬰兒紅疹，也可引起發(fā)熱、腦炎、肝炎，骨髓轉(zhuǎn)移失敗。HHV7也可引起出疹。兩者廣泛存在，多為無癥狀排泄病毒，在嬰兒血清抗體陽轉(zhuǎn)可診斷急性感染，PCR可檢測(cè)到外周血單核細(xì)胞中HHV6。

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性皰疹病毒感染1）α-皰疹病毒2）β-皰疹病毒3）γ-皰疹病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性皰疹病毒感染γ-皰疹病毒現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)EVB和HHV-8（KAPOSI’SSarcomnvirus）對(duì)人致病，在淋巴和上皮細(xì)胞中增殖后潛伏在淋巴細(xì)胞中。EB病毒引起單核細(xì)胞增多癥，依據(jù)血中特異性VCA（Capsidantign）,EA(earlyAg)和NA(nucleaAg)的抗體產(chǎn)生狀況來診斷。VCA-IgM陽性代表急性感染，Anti-EA只在部分急性期病人檢測(cè)到，Anti-EA和Anti-NA對(duì)確定感染的時(shí)間有意義。VCAIgG用于人群免疫狀態(tài)的調(diào)查。和其它皰疹病毒一樣，在免疫個(gè)體也可引起嚴(yán)重的疾病，在AIDS中也引起原發(fā)性CNS淋巴瘤（PCR檢測(cè)），EB引起PTLD移植后（淋巴增殖紊亂）

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性呼吸道感染標(biāo)本采集：鼻咽分泌物、洗漱液、咽拭子、氣管鏡獲得的氣管吸液標(biāo)本和灌洗液。方法:

1)吸道病毒的培養(yǎng)

2)呼吸道病毒抗原的檢測(cè)

3)呼吸道病毒的核酸檢測(cè)方法傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性胃腸道病毒感染

輪狀病毒、腺病毒（血清型40、41）、caliciviruses、astroviruses、toroviruses這些病毒的診斷多依賴于電子顯微鏡檢查，抗原檢測(cè)和核酸技術(shù)。乙酸油?；蛄祖u酸負(fù)染電鏡可直接檢測(cè)到糞便中的病毒，caliciviruses用免疫熒光，多用于專項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室?？乖瓩z測(cè)：ELISA和乳膠凝集法應(yīng)用于糞便中的病毒檢測(cè)。在感染期輪狀病毒在糞便中可達(dá)1011粒/g。核酸檢測(cè)：RT-PCR和PCR已應(yīng)用于檢測(cè)，但無抗原檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)多，但此方法可能對(duì)環(huán)境中的病毒和分子流行病學(xué)更有用。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒性腦膜炎和腦炎㈠腦膜炎①腸道病毒性腦膜炎②HSV腦膜炎大多為伴隨HSV-2，復(fù)發(fā)時(shí)病毒培養(yǎng)為陰性,PCR敏感性和特異性更好些。③VZV腦膜炎㈡腦炎：①HSV腦炎②蟲媒病毒腦炎③狂犬病毒㈢引起腦炎和腦膜炎的病毒EVB、HHV-6、B-VIRUS、麻疹、腮腺炎、風(fēng)疹、流感、腺病毒、㈣在免疫抑制個(gè)體中引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染①CMV引起腦炎和在中AIDS引起radiculomyelitis，CMV

很難從CSF中培養(yǎng)出來,但可用PCR檢測(cè)，通過PCR定量，可區(qū)分是CNS感染或無癥狀感染前期。

②EB病毒在AIDS中引起CNS淋巴瘤，PCR法可檢測(cè)CSF中的EB病毒。③PCR診斷JC病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒性肝炎

6種肝炎病毒A、B、C、D、E和G是已知的。甲肝檢測(cè)IgM抗體，癥狀出現(xiàn)后既產(chǎn)生IgM并持續(xù)數(shù)月，IgG抗體則檢測(cè)其對(duì)甲肝免疫力及以前的感染史（或接種史）乙肝

有數(shù)個(gè)不同的血清學(xué)方法檢測(cè)HBV的感染。檢測(cè)HBs表面抗原證實(shí)現(xiàn)在乙肝的感染，如果HBs抗原陽性超過6個(gè)月，診斷為乙肝病毒攜帶者。在HBV感染后產(chǎn)生HBV抗體和HBC抗體，抗HBc抗體是首先出現(xiàn)的，并意味著臨床感染，抗HBs隨后產(chǎn)生，兩者都可持續(xù)數(shù)年。

HBc-IgM抗體陽性證明，急性HBV感染，特別是在窗口期，HBS和HBS抗體都陰性時(shí)更有意義。疫苗接種后只產(chǎn)生HBs抗體，此也提示對(duì)HBV有免疫力。

HBe抗原是C抗原的組成部分，E抗原陽性意味著病毒在復(fù)制，是活動(dòng)期，抗

HBe抗體在HBV攜帶者中陽性時(shí)提示不在活動(dòng)期。

PCR檢測(cè)是最敏感的方法，也可定量測(cè)定DNA量。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒性肝炎

丙肝ELISA檢測(cè)最常用，如陽性多用放免沉淀來證實(shí)RT-PCR也用于定量RNA檢測(cè)，可監(jiān)測(cè)治療效果。核酸雜交和序列分析也應(yīng)用于HCV基因型別的鑒定并對(duì)治療方案進(jìn)行訂正。

D、E和G型肝炎檢測(cè)HDV抗體，只在HBV感染的個(gè)體中有HDV，可通過RT-PCR檢測(cè)。HEV通常用ELISA法，IgM陽性提示近期感染。HGV診斷方法還未商品化。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性人類多瘤病毒

HumanPolyomavirusesJC和BK病毒是兩種對(duì)人致病的病毒JC病毒引起進(jìn)行性多發(fā)性腦病，常見于AIDS患者

BK病毒引起出血性膀胱炎多見于骨髓移植的者BK生長于人胚腎細(xì)胞，JC只生長于人胎腦或人胎細(xì)胞中。PCR已用于檢測(cè)CSF中的JC和尿中的BK。

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性人乳頭瘤病毒

HumanPapillomavirusesHPV和宮頸癌有關(guān)，特別是感染16、18、31和45型HPV與宮頸癌高度相關(guān)HPV不能細(xì)胞培養(yǎng)。如發(fā)現(xiàn)在宮頸papanicolaou氏涂片上有HPV的細(xì)胞特征，提示有HPV感染。PCR和核酸雜交已應(yīng)用于檢測(cè)臨床標(biāo)本中的HPVDNA宮頸拭子的HPV檢查已應(yīng)用于高危人群，最常用的基因編碼區(qū)是L1MAJORCPSID（在所有型別HPV常見）型別鑒定通過不同特異性DNA探針來進(jìn)行，也可做定量DNA檢測(cè)HPV是否作為常規(guī)宮頸癌的預(yù)防性檢查還在研究之中。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒引起的出疹性疾病

常見于麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎、小DNA病毒B19、腸道病毒。除了B19外上述病毒都可用細(xì)胞培養(yǎng)診斷，但現(xiàn)多被其它快速診斷方法所取代。ELISA法查特異性IgM抗體已廣泛應(yīng)用于麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎和B19的早期診斷，也可通過雙份血清抗體的陽轉(zhuǎn)和4倍升高來診斷也用IgG抗體來評(píng)價(jià)4種病毒的特異性免疫力。麻疹和風(fēng)疹在出疹3天內(nèi)75%患者IgM陽性，4-28天100%陽性。查CSF中IgM也可診斷急性麻疹腦炎，風(fēng)疹腦炎和腮腺炎腦炎。通過檢測(cè)血和CSF中麻疹I(lǐng)gG抗體的滴度和比值可診斷SSPE。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性病毒引起的出疹性疾病

B19感染早期可引起溶血危機(jī)時(shí)血清中可能查不到IgM，但可通過PCR查到B19-DNA。在免疫抑制個(gè)體中B19造成造血干細(xì)胞的慢性感染，導(dǎo)致再生障礙性貧血，這種慢性感染者可能不產(chǎn)生B19抗體，但可通過檢測(cè)血中B19DNA來診斷。

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性麻疹病例的臨床診斷發(fā)熱>38OC，出現(xiàn)斑丘疹和至少伴有以下一種癥狀：咳嗽，鼻炎或結(jié)膜炎或醫(yī)務(wù)人員疑為麻疹EchovirusesEcho病毒Measles麻疹ParvovirusB19細(xì)小病毒B19Dengue登革熱HHV-6皰疹病毒6型Rubella

風(fēng)疹Others

其它傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性發(fā)熱伴出疹，發(fā)熱≥37.5℃，持續(xù)一天以上，伴有全身或局部的皮膚或粘膜出疹。腸道病毒（HEV71，CA16）登革熱病毒麻疹、風(fēng)疹、B19

其它發(fā)熱伴出疹癥候群傷寒、副傷寒鏈球菌伯氏疏螺旋體（萊姆?。┧粋魅静≡\斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性RelativelevelsofantibodyIgMsensitivity~70%071421283542-7-14-210246810RashonsetDaysafterrashonsetIgGIgMInfectionvirusexcretion用于IgM抗體檢測(cè)的血清標(biāo)本要在初次接觸病人時(shí)馬上采集，以及出疹后28天內(nèi)采集用于病毒分離的標(biāo)本,需出疹５天內(nèi)采集咽拭子或尿液麻疹病毒感染體液免疫過程必要日期:最后接種日期出疹日期出生日期傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

流行時(shí)間：春季合適的氣候條件，呈規(guī)律性季節(jié)發(fā)作傳播途徑：主要靠氣溶膠來傳播。上呼吸道黏膜和鼻咽淋巴組織是病毒進(jìn)入機(jī)體的入口所致疾?。簢H疾病分類委員會(huì)將風(fēng)疹分為兩種：風(fēng)疹和先天性風(fēng)疹綜合癥

——大多數(shù)嬰幼兒或成年人風(fēng)疹病毒的感染屬于一過性和無明顯癥狀的亞臨床感染

——孕婦如在妊娠早期感染風(fēng)疹病毒，所生的新生兒可患先天性心臟畸形、耳聾、發(fā)育障礙等稱為先天性風(fēng)疹綜合癥（CRS）風(fēng)疹病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性該圖示意了典型風(fēng)疹病毒感染的免疫反應(yīng)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性臨床標(biāo)本－血清急性期單份血急性期，恢復(fù)期雙份血ELISAIgM對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行病毒監(jiān)測(cè)的流程圖-血清標(biāo)本ELISAIgG(+)近期風(fēng)疹感染(－)近期無風(fēng)疹病毒感染如果采集血清是出疹5天內(nèi)的，需再采集第2份血標(biāo)本重新檢測(cè)恢復(fù)期病人血清中風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體滴度比急性期有4倍或4倍以上升高或急性期抗體陰性而恢復(fù)期抗體陽轉(zhuǎn)。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行病毒監(jiān)測(cè)的流程圖-病原學(xué)標(biāo)本直接對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR或rRT-PCR病毒分離及其鑒定臨床標(biāo)本－鼻咽拭子病毒分離（Vero/SLAM細(xì)胞）盲傳2代，共培養(yǎng)3代檢測(cè)核酸進(jìn)行鑒定收獲病毒凍存到－70c將保存的病毒運(yùn)送到國家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行序列分析RNA提取

RT-PCR或熒光定量RT-PCR

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性胎兒和新生兒的病毒感染的試驗(yàn)

近年由于超聲波的形態(tài)學(xué)檢查、獲得胎兒標(biāo)本技術(shù)的改進(jìn)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使圍產(chǎn)期的病毒學(xué)診斷已有了較大的進(jìn)步。只需極少量標(biāo)本即可檢測(cè)到病毒的核酸或抗體因?yàn)镮gM抗體不能通過胎盤，如果發(fā)現(xiàn)胎兒或新生兒有IgM抗體可證明其為先天感染（懷孕20周后胎兒有產(chǎn)生IgM的能力）。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性用于診斷胎兒和新生兒病毒感染的試驗(yàn)

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性小RNA病毒科（Picornaviridae）人腸道病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性CourtesyofLindaM.Stannard,UniversityofCapeTown,S.A.h~30nm二十面體對(duì)稱無包膜人腸道病毒的毒粒結(jié)構(gòu)傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性手足口病(HFMD)

病原:手足口病可由多種腸道病毒所引起，其中包括CoxA5,A10,A16,A19,EV71,以及部分?？刹《竞涂滤_奇B組病毒,以CoxA16和

EV71最為常見傳播途徑:糞-口途徑傳播:唾液與糞便;

呼吸道傳播:空氣飛沫;

接觸傳播

皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。

HFMD為全球性傳染病，在全球廣泛分布，無明顯的地域分布,但近年EV71在東南亞一帶流行,引起較多的重癥和死亡病例。傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性經(jīng)水傳播的病原體的感染途徑

河流海洋排毒水海產(chǎn)品污水處理廠休閑、娛樂直接、間接接觸灌溉盤子門把手洗主要研究?jī)?nèi)容-1針對(duì)脊灰病毒、NPEV、輪狀病毒、諾如病毒傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性7.分子流行病學(xué)在病毒病診斷中的應(yīng)用通過鑒定病毒的分子特征對(duì)流行病學(xué)方法進(jìn)行補(bǔ)充,特別是無流行病學(xué)資料時(shí).確認(rèn)/鑒別病毒的來源確定病毒的傳播途徑提供評(píng)估控制策略效果的方法輔助分析不尋常的或嚴(yán)重的病例，例如SSPE,MIE,CRS。評(píng)估病毒的傳播模式提供評(píng)估控制策略效果的有效指標(biāo)。幫助建立診斷方法幫助抗病毒制劑的研制（中和抗體）發(fā)展疫苗（篩選毒株，和中和位點(diǎn)）傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性MajorGlobalMeaslesD5VirusTransmissionPathways2006-08*SuspectedtransmissionpathwaysTransmissionpathwayswithEpilinksAcknowledgement:DataprovidedbyWHOMeasles/RubellaLaboratoryNetworkandMeaslessurveillanceprogrammesKeyD5Jul07Apr07Jan07D5EndemicApr06>Nov06Feb08Apr08Feb08*AsofAugust200878July08>May06D5?傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性WHOVaccinePreventableDiseaseLabNetworkPotentialvirustransmissionpatterns!79

傳染病診斷技術(shù)國產(chǎn)化和產(chǎn)業(yè)化的必要性

ThedesignationemployedandthepresentationofmaterialonthismapdonotimplytheexpressionofanyopinionwhatsoeveronthepartofthesecretariatoftheWorldHealthOrganisationconcerningthelegalstatusofanycountry,territory,cityorareaorofitsauthorities,orconcerningthedelimitationofitsfrontiersorboundaries.Dottedlinesonmapsrepresentapproximateborderlinesforwhichtheremaynotyetbefullagreement.專項(xiàng)參考實(shí)驗(yàn)室