四角蛤蜊種質(zhì)

1四角蛤蜊種質(zhì)本標準規(guī)定了四角蛤蜊（Mactraveneriformis）的定義，名稱與分類、主要形態(tài)特征、繁殖生物學(xué)、細胞遺傳學(xué)特性、分子遺傳學(xué)特性、檢測方法和判定規(guī)則。本標準適用于四角蛤蜊的種質(zhì)檢測與鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18654.2-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢測第二部分：抽樣方法。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適合于本文件。3.1殼高shellheight殼頂至殼腹緣的最大距離。殼背面垂直于殼高的最大距離。4名稱與分類4.1學(xué)名四角蛤蜊[Mactraveneriformis(Reeve,1853)]。4.2分類地位蛤蜊屬（Mactra）。5主要形態(tài)特征5.1外部形態(tài)特征貝殼堅厚，略成四角形。兩殼極膨脹。殼頂突出，位于背緣中央略靠前方，尖端向前彎。貝殼具外皮，頂部白色，幼小個體呈淡紫色，近腹緣為黃褐色，腹面邊緣常有1條很窄的邊緣。生長線明顯粗大，形成凹凸不平的同心環(huán)紋。四角蛤蜊的外部形態(tài)見圖1。2圖1四角蛤蜊外部形態(tài)5.2內(nèi)部構(gòu)造由左右外膜附著殼內(nèi)面包圍整個肉體形成外套腔，套膜分邊緣、中央兩部分；邊緣部分肌肉發(fā)達較肥厚、中央部分薄而透明。外套膜在后端腹側(cè)著，形成兩個水管，水管短而粗，兩個水管緊靠，出水管較入水管細而短，位于入水管背面；兩水管的末端具有觸手。體中部稍后方左右兩側(cè)有兩個鰓瓣，鰓前方左右各有兩片唇瓣、唇瓣之間為口。外套腔偏前方有一略呈扁形的內(nèi)臟塊，其腹面為呈斧刀狀的足。心臟位于殼頂下方，內(nèi)臟塊背側(cè)偏后，呈梭形帶透明狀。5.3可數(shù)性狀5.3.1貝殼2片，左右對稱。5.3.2外套膜2片，左右兩葉。5.3.3鰓瓣左右各2片。5.3.4左殼具主齒1枚，右殼具主齒2枚。6繁殖生物學(xué)6.1性成熟年齡與性腺特征雌雄異體，雌雄外觀上無區(qū)別，生殖腺1個。性成熟年齡為一周年，成熟季節(jié)，雌性生殖腺為乳白色，雄性為桔紅色。6.2性比性比1:1.08左右，雄性多于雌性。6.3繁殖期2次繁殖期，分別為4月～6月及10月上旬。6.4產(chǎn)卵量3齡～4齡四角蛤蜊第一次產(chǎn)卵量約為13×105粒～18×105萬粒。6.5精卵特征沉性卵，卵徑為70μm～80μm。精子分為頭部、中段和尾部三部分。7細胞遺傳學(xué)特性體細胞染色體數(shù)目2n=38。8分子遺傳學(xué)特性8.1四角蛤蜊線粒體DNACOⅠ基因片段（625bp,GenBank序列號：GQ864238.1）1CTTTTAGTTCTATTATTCGTTTAGAATTGGCTGTTCCTGGTGAAAGATTGCTTGATGGTC61AGCTCTATAATTTGGTTGTAACAGCACATGCTTTAGTTATAATTTTTTTTTTAGTAATAC121CTATAATGATGGGAGGTTTTGGAAACTGGTTAGTTCCTTTAATACTAAAAGTTCCTGATA181TGAGTTTTCCTCGTATAAACAATATTAGTTTTTGACTTCTTCCTGTGTCTATGTTACTGT241TATTCGCTTCAGCTTATGTTGAAAGAGGGGCAGGAACTGGGTGAACTATTTATCCTCCTT301TATCTAGCCATATAGGTCATCCTGGGCCTGCTATGGATTATGTTATTTTTTCTCTTCATG361TTGGTGGTCTCTCTTCAATTTTAGCTTCTATTAATTTTTTTACTACTTTCTTGAGAATGC421GTTTGAAGGTGATGTCTTTATATCGTGTTCCATTATTCGTATGGTGTATTGCTGTTACTA481GGTTTTTATTAGTAGTAGCTATGCCTGTTTTAGCTGGTGCTCTTACGATATTACTTACTG541ATCGTAATTTTAATACTTCTTTTTTTGACCCAAATGGAATGGGTGACACTATTTTATTTG601TTCATTTGTTTTGATTTTTTGGTCA8.2四角蛤蜊全基因組N50序列長度為7977.84Kb，長度為939.32Mb。全基因組圖譜見圖2。4圖2四角蛤蜊全基因組圖譜9檢測方法9.1抽樣應(yīng)按照GB/T18654的第2部分（抽樣方法）的規(guī)定執(zhí)行。9.2主要形態(tài)構(gòu)造檢測9.2.1外部形態(tài)光線充足時，肉眼觀察外部形態(tài)進行檢測。9.2.2可量性狀殼高和殼長按照定義描述用游標卡尺進行測量檢測。9.2.3內(nèi)部構(gòu)造四角蛤蜊撬開后，光線充足時，肉眼觀察檢測。9.3細胞遺傳學(xué)檢測按附錄A執(zhí)行9.4分子遺傳學(xué)檢測按附錄B執(zhí)行510判定規(guī)則10.1當檢測結(jié)果符合第5章和第7章要求，可判定物種時，按第5章和第7章的要求判定。10.2當出現(xiàn)下來情況之一時，增加檢測第6章和第8章的要求內(nèi)容依據(jù)檢測結(jié)果對物種進行輔助鑒定：a)第5章和第7章的項目無法進行檢測或者判定時；b)第三方提出要求時。6（資料性附錄）染色體檢測A.1染色體標本的制備——將鰓組織用0.04%秋水仙素（海水配制）處理20min～30min?！?.075M氯化鉀低滲40min～60min?！眯屡渲帽淇ㄖZ氏固定液（4℃)固定三次，每次固定不少于15min。——50％冰醋酸解離數(shù)分鐘,輕輕吹打?！蜏氐纹?，自然干燥?！稍锖?0％Giemsa染液（pH6.8）染色15min～20min。——自來水沖洗，自然干燥后鏡檢。A.2核型分析觀察100個分散良好的中期分裂相，記數(shù)確定二倍體數(shù)。應(yīng)從中挑選10個分散良好、形態(tài)清晰的中期分裂相進行顯微攝像、放大、測量，染色體分類應(yīng)按照GB/T18654的第12部分（染色體組型分析）的規(guī)定執(zhí)行。7（資料性附錄）四角蛤蜊COI基因序列分析B.1總DNA提取取四角蛤蜊斧足，蛋白酶K消化后，用試劑盒進行總DNA的抽提。B.2引物序列COI-F：5’-ACACTTTATTTGATTTTTGG-3’，COI-R：5’-CCCATTGAAAGAACGTAGTGAAAGTG-3’B.3PCR擴增反應(yīng)反應(yīng)體系為50μL，每反應(yīng)體系包括1.25單位的TapDNA聚合酶；各種反應(yīng)組分的終濃度為200nmol/L的正反向引物；200nmol/L的每種dNTP,10×PCR緩沖液[200mmol/LTris-HCl,pH8.4；200mmol/LKCl；100mmol/L(NH4)2SO4；15mmol/LMgCl2]5μl,加Milli-QH2O至50μl?；蚪MDNA20ng。PCR參數(shù)包括94℃