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課時4動物細胞工程1.[2024江蘇]航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培育的心肌細胞跳動的視頻。下列相關敘述正確的是(B)A.培育心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌B.培育心肌細胞的時候既須要氧氣也須要二氧化碳C.心肌細胞在培育容器中通過有絲分裂不斷增殖D.心肌細胞在神經(jīng)細胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動解析培育心肌細胞的器具須要用高壓蒸汽滅菌法滅菌,但是部分培育心肌細胞所用試劑(如動物血清)不能用高壓蒸汽滅菌法滅菌,A錯誤;培育心肌細胞的時候既須要氧氣(有助于心肌細胞進行有氧呼吸)也須要二氧化碳(有助于維持培育液的pH),B正確;在體外培育條件下,心肌細胞通過有絲分裂進行增殖,但細胞增殖一段時間后會出現(xiàn)接觸抑制等現(xiàn)象,因此不會不斷增殖,C錯誤;心肌細胞在神經(jīng)細胞釋放的神經(jīng)遞質的支配下跳動,D錯誤。2.[2024山東]一個抗原往往有多個不同的抗原確定簇,一個抗原確定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體,由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內,可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗,也可以從該小鼠的血清中干脆分別出多抗。下列說法正確的是(D)A.注入小鼠體內的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大B.單抗制備過程中通常將分別出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗D.p72部分結構變更后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的狀況解析由題中信息“一個抗原往往有多個不同的抗原確定簇,一個抗原確定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體”可知,由同一抗原刺激機體可以產(chǎn)生多抗,說明多抗與一個抗原的多個不同的抗原確定簇有關,抗原純度對多抗純度的影響大,單抗理論上與抗原純度無關,A錯誤;單抗制備過程中,通常將分別出的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合,B錯誤;一個抗原往往有多個不同的抗原確定簇,一個抗原確定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體,由同一抗原刺激可產(chǎn)生多種不同的抗體,因此利用該小鼠能制備出多種抗p72的單抗,C錯誤;p72部分結構變更會導致部分抗原確定簇變更,原單抗會失效,而多抗仍有效,D正確。3.[2024海南,13分]以我國科學家為主的科研團隊將OSNL(即4個基因Oct4/Sox2/Nanog/Lin28A的縮寫)導入黑羽雞胚成纖維細胞(CEFs),誘導其重編程為誘導多能干細胞(iPS),再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs),然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中,最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代,試驗流程如圖?;卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分別獲得的,為了獲得單細胞懸液,雞胚組織剪碎后需用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理。動物細胞培育通常須要在合成培育基中添加血清等自然成分,以滿意細胞對某些細胞因子的需求。(2)體外獲得OSNL的方法有基因文庫法、PCR、人工合成法(答出1種即可)。若要在CEFs中表達外源基因的蛋白,需構建基因表達載體,載體中除含有目的基因和標記基因外,還須有啟動子和終止子等。啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位,有了它才能驅動目的基因轉錄出mRNA,最終表達出所須要的蛋白質。(3)iPS細胞和iPGCs細胞的形態(tài)、結構和功能不同的根本緣由是基因的選擇性表達。(4)誘導iPS細胞的技術與體細胞核移植技術的主要區(qū)分是誘導iPS細胞的技術是將已分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞(iPS),再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs)的技術;體細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中,使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動物個體的技術。(5)該試驗流程中用到的生物技術有基因工程、動物細胞培育(答出2點即可)。解析(1)進行動物細胞培育時,動物組織剪碎后須要用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理,以獲得單細胞懸液。運用合成培育基培育動物細胞時,通常須要添加血清等自然成分,以滿意細胞對某些細胞因子的需求。(2)體外獲得目的基因的方法有多種,如基因文庫法、PCR、人工合成法等?;虮磉_載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子等結構,啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位,有了啟動子才能驅動目的基因轉錄出mRNA,最終表達出所須要的蛋白質。(3)iPGCs細胞是由iPS細胞分化而來的,兩者的遺傳物質相同,兩者的形態(tài)、結構和功能不同的根本緣由是基因的選擇性表達。(4)誘導iPS細胞的技術與體細胞核移植技術存在明顯的區(qū)分,主要表現(xiàn)在誘導iPS細胞的技術是將已分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞(iPS),再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs)的技術;而體細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中,使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動物個體的技術。(5)分析題意可知,該試驗流程中用到的生物技術有基因工程、動物細胞培育等。4.[2024遼寧節(jié)選,6分]某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中,須要表達N蛋白胞外段,制備相應的單克隆抗體,增加其對N蛋白胞外段特異性結合的實力。Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備,流程如圖。(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后,取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理,制成細胞懸液,置于含有混合氣體的CO2培育箱中培育,離心收集小鼠的B淋巴細胞,與骨髓瘤細胞進行融合。(4)用選擇性培育基對融合后的細胞進行篩選,獲得雜交瘤細胞,將其接種到96孔板,進行克隆化培育。用抗原—抗體雜交技術檢測每孔中的抗體,篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株,經(jīng)體外擴大培育,收集細胞培育液,提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結合,形成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC),實現(xiàn)特異性治療。解析(3)用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理小鼠脾組織,可使組織分散成單個細胞,制成細胞懸液,可將細胞懸液置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培育箱中進行培育。(4)運用選擇性培育基篩選出雜交瘤細胞后,將其接種到96孔板,進行克隆化培育。用抗原—抗體雜交技術檢測每孔中的抗體,最終獲得既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株,經(jīng)擴大

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