急性毒性作用及其試驗(yàn)方法

急性毒性作用及其試驗(yàn)方法第一節(jié)急性毒性和急性毒性試驗(yàn)

一、概念和試驗(yàn)?zāi)康?急性毒性（acutetoxicity）概念

指機(jī)體（人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物）一次，或24小時(shí)內(nèi)多次接觸外來(lái)化合物所引起的中毒效應(yīng)（包括死亡）。2急性毒性試驗(yàn)

是研究一次或24小時(shí)內(nèi)多次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被檢化學(xué)物后，觀察在短期內(nèi)（一般7天）引起動(dòng)物毒性表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)。3急性毒性試驗(yàn)的目的

(1)測(cè)定受試物對(duì)一種或幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的半數(shù)致死量（LD50），以初步估計(jì)其對(duì)人類毒害的危險(xiǎn)性。(2)了解受試物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，闡明受試物急性毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系。(3)為進(jìn)一步進(jìn)行亞慢性和慢性試驗(yàn)以及其它特殊毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)和毒性判定指標(biāo)的選擇提供依據(jù)二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇動(dòng)物種類

一般常用大鼠或小鼠；如果同時(shí)用兩種動(dòng)物，其中一種為非嚙齒類如狗、猴等更為理想

2動(dòng)物年齡

動(dòng)物年齡不易過(guò)老過(guò)幼，一般應(yīng)選用初成年者，

大、小鼠為出生后2～3個(gè)月左右，體重一般分別為200g（180～240g）和20g（18～25g）左右；

狗為生后一年左右。

所有動(dòng)物進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，至少飼養(yǎng)觀察一周，選取其健康動(dòng)物，體重相差應(yīng)在10％以內(nèi)，動(dòng)物性別除另有要求，雌雄分別試驗(yàn)外，一般常雌雄各半。三、給予被檢物的途徑和方法

原則上要求與人類攝入該物質(zhì)的實(shí)際途徑相同，對(duì)食品中化學(xué)物質(zhì)來(lái)說(shuō)，主要是經(jīng)口給予，在急性毒性試驗(yàn)中，多采用灌胃法。

四、觀察指標(biāo)和時(shí)間

1.觀察指標(biāo)

在測(cè)定LD50中，主要觀察指標(biāo)：動(dòng)物死亡數(shù)目,動(dòng)物主要中毒癥狀和開(kāi)始出現(xiàn)的時(shí)間死亡的時(shí)間也要記錄。

器官系統(tǒng)觀察項(xiàng)目中毒后一般表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和軀體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)行為姿態(tài)改變、叫聲異常、不安、呆臥少動(dòng)動(dòng)作痙攣、震顫、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、麻痹、驚厥、強(qiáng)制性動(dòng)作對(duì)刺激反應(yīng)性易興奮、知覺(jué)過(guò)敏或缺乏知覺(jué)肌肉張力強(qiáng)直、馳緩血液循環(huán)系統(tǒng)心區(qū)觸診震顫、心動(dòng)過(guò)速或過(guò)緩、心律不齊、心搏過(guò)強(qiáng)或減弱腸胃系統(tǒng)腹形膨脹、凹陷、嘔吐、腹瀉、便秘糞便硬度顏色不成形、黑色或灰色嚙齒類動(dòng)物中毒表現(xiàn)觀察項(xiàng)目生殖泌尿系統(tǒng)陰戶、乳腺膨脹、分泌增多陰莖脫垂會(huì)陰部被糞便污穢皮膚和毛發(fā)顏色、張力發(fā)紅、褶皺、松弛、出現(xiàn)皮疹、豎毛粘膜結(jié)膜、口腔分泌物增多、充血、蒼白、紫紺、黃疸眼眼瞼上瞼下垂眼球眼球突出、眼球震顫透明度混濁其它直腸、腳爪部的皮膚溫度降低或升高一般情況姿勢(shì)正常、消瘦2觀察時(shí)間

1）一般觀察一周即可。因急性毒性實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物的中毒癥狀以及死亡，一般多出現(xiàn)在給予被檢物后24～48h以內(nèi)。2）如中毒反應(yīng)出現(xiàn)較遲，主要在48h或3～4天后出現(xiàn)，則觀察期也必須相應(yīng)延長(zhǎng)至2周甚至4周，特別是48～70h內(nèi)。第二節(jié)急性毒性評(píng)價(jià)一、半數(shù)致死量和急性毒作用帶半數(shù)致死量

1）LD50值受多種因素影響：

包括：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物種、品系、性別、年齡、受試化合物濃度及稀釋溶液的性質(zhì)、喂飼條件以及試驗(yàn)者的熟練程度等。2）存在一定的取樣誤差3）LD50是一個(gè)點(diǎn)的界限，所以是一個(gè)質(zhì)反應(yīng)，而不能代表受試物的急性特征。2急性毒作用帶（acuteeffectzone,Zac）：

指化合物的毒性上限與毒性下限的比值，也就是引起試驗(yàn)動(dòng)物的死亡之劑量與最低劑量的劑量范圍的寬窄。通常以LD50代表毒性上限，急性閾劑量（閾濃度）代表毒性下限，其公式為：Zac=LD50LimacZac值的大小可反應(yīng)急性閾劑量距離LD50的寬窄。Zac值越大，表明化合物引起急性死亡的危險(xiǎn)越小，反之表明引起急性死亡的危險(xiǎn)性越大。二、急性毒性分級(jí)

目前，我國(guó)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序中，借用國(guó)際上的六級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。急性毒性分級(jí)大鼠經(jīng)口LD50(mg/Kg體重）大約相當(dāng)于體重70Kg人的致死劑量幾種化學(xué)物質(zhì)急性毒性舉例6級(jí)，極毒

＜1

稍嘗，＜7滴肉毒桿菌毒素（致死量30～50mg人）5級(jí)，劇毒1～507滴～1茶匙對(duì)硫磷（6～15）西力生（30）磷化鋅（47）4級(jí)，中等毒51～500

1茶匙～35g倍硫磷（250～395）氯丹（57）六六六（125）敵百蟲(chóng)（450）3級(jí)，低毒

501～500035～350g二氯乙烷（770）苯甲酸鈉（2000）賽力散（2080）棉草枯（5000）2級(jí)，實(shí)際無(wú)毒5001～15000

350～1050g化森鋅（5200）驅(qū)蚊酯（8200）1級(jí)，無(wú)毒

＞15000

＞1050g福美鐵（＞17000）

第三節(jié)LD50計(jì)算方法

一、寇氏法（也叫平均劑量法）

1原理要求各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)相等，相鄰組劑量成等比級(jí)數(shù)，若滿足此要求，則受試物劑量的對(duì)數(shù)與死亡率成比例關(guān)系要求各劑量大致有一半組所產(chǎn)生的反應(yīng)率在10～50％之間，另一半在50～90％之間，最好還有反應(yīng)率在0％及100％的組，故需預(yù)試。

2劑量分組小動(dòng)物常設(shè)5～10個(gè)劑量組，每組6～10只。首先確定最高、最低量?jī)蓚€(gè)組，分別可使動(dòng)物90％和10％死亡。預(yù)試時(shí)按2倍或3倍遞增劑量，每次三個(gè)劑量水平（如200，400，800mg／Kg或100、300、900mg／Kg）測(cè)試動(dòng)物死亡率。

3計(jì)算公式：

當(dāng)p1＝0，pk＝1，上式可簡(jiǎn)化為

其中，xk:最高劑量的對(duì)數(shù)；

d：相鄰兩組劑量之比的對(duì)數(shù)；

pi：各組死亡率；i：組數(shù)；

SElgLD50：標(biāo)準(zhǔn)誤差對(duì)數(shù)；

ni：各組動(dòng)物數(shù)。

LD50的95%可信限為：lg－1（lgLD50±1.96SELD50）

SElgLD50=d·[∑pi(1-pi

)/ni]1/2三、霍恩法（也叫劑量遞增法或流動(dòng)平均法）1特點(diǎn)動(dòng)物數(shù)量固定，劑量也固定，因而簡(jiǎn)單易行使用動(dòng)物數(shù)量較少但可信限范圍較大，不夠精確2劑量分組

一般分四或五組，每組四或五只動(dòng)物，各組中雌鼠與雄鼠數(shù)應(yīng)分別相等，該方法對(duì)劑量系列要求嚴(yán)格，主要有兩種：1）劑量遞增公比為：即，1.002.154.64×10t

t=0,±1,±2，±3……2）劑量遞增公比為：即，1.003.16