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文檔簡介
上海市交大附中高三最后一模新高考生物試題注意事項:1.答卷前,考生務(wù)必將自己的姓名、準考證號、考場號和座位號填寫在試題卷和答題卡上。用2B鉛筆將試卷類型(B)填涂在答題卡相應(yīng)位置上。將條形碼粘貼在答題卡右上角"條形碼粘貼處"。2.作答選擇題時,選出每小題答案后,用2B鉛筆把答題卡上對應(yīng)題目選項的答案信息點涂黑;如需改動,用橡皮擦干凈后,再選涂其他答案。答案不能答在試題卷上。3.非選擇題必須用黑色字跡的鋼筆或簽字筆作答,答案必須寫在答題卡各題目指定區(qū)域內(nèi)相應(yīng)位置上;如需改動,先劃掉原來的答案,然后再寫上新答案;不準使用鉛筆和涂改液。不按以上要求作答無效。4.考生必須保證答題卡的整潔??荚嚱Y(jié)束后,請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題:(共6小題,每小題6分,共36分。每小題只有一個選項符合題目要求)1.下列關(guān)于酶和酶促反應(yīng)的敘述,正確的是()A.酶的基本組成單位是氨基酸或脫氧核苷酸B.酶促反應(yīng)都需要ATP供能C.一種酶只能催化一種底物的反應(yīng)D.一定溫度范圍內(nèi),溫度升得越高,酶變性的速率也越快2.已知抗維生素D佝僂病為伴X染色體顯性遺傳病,血友病為伴X染色體隱性遺傳病。下列有關(guān)人類遺傳病的說法正確的是A.—對患有抗維生素D佝僂病的夫婦,所生的女兒不一定患病B.鐮刀形細胞貧血癥的根本病因是血紅蛋白中一個氨基酸被替換C.某家庭中母親患血友病,父親正常,生了一個凝血正常且性染色體組成為XXY的孩子,則其形成原因最可能是卵細胞異常D.人群中某常染色體顯性遺傳病的發(fā)的發(fā)病率為19%,一對夫婦中妻子患病,丈夫正常,則所生子女不患該病的概率是9/193.黑龍江黑河至云南騰沖的“胡煥庸線”,既是一條我國人口疏密程度的分界線,又是我國自然生態(tài)環(huán)境的分界線——由東部的青山綠水變成了西部的草原、大漠與雪山。下列相關(guān)分析正確的是()A.“胡煥庸線”兩側(cè)人口疏密程度的差異屬于人口的空間特征B.“胡煥庸線”兩側(cè)的野兔難以進行基因交流故屬于不同物種C.區(qū)別西部草原、大漠、雪山中的生物群落首先要分析其物種組成D.東部青山綠水中生活著不同的生物種群,體現(xiàn)了群落的垂直結(jié)構(gòu)4.已知Y受體的致效劑S可以顯著降低血液中三酸甘油酯的濃度,從而降低心臟病的危險?,F(xiàn)用小鼠作為材料來證明“S的作用是專一性地通過Y受體達成”,下列哪個設(shè)計方案是正確的()A.可以通過活化Y受體的基因使小鼠大量表達Y受體B.可以通過剔除Y受體基因使小鼠不表達Y受體C.在小鼠體內(nèi)注射大量的S從而增強Y受體的作用D.在小鼠體內(nèi)注射針對S的抗體從而把血液中的S清除5.如圖為人體內(nèi)基因?qū)π誀畹目刂七^程,據(jù)圖分析不正確的是()A.該圖反映了基因?qū)π誀畹闹苯雍烷g接控制B.X1與X2的區(qū)別主要是核糖核苷酸排列順序的不同C.基因2與白化病基因互為等位基因D.人體成熟的紅細胞中可進行①②過程,而不進行③④過程6.下列關(guān)于實驗敘述正確的是()A.制備細胞膜實驗中,選取雞的紅細胞的理由是它沒有復(fù)雜的細胞器且易于破裂B.探索淀粉酶最適pH,可以設(shè)置一系列梯度組分組對照,并用斐林試劑檢測實驗結(jié)果C.物鏡放大倍數(shù)越小,觀察時物鏡與標本的距離越遠D.觀察減數(shù)分裂時,由于染色體本身無色,需要用甲基綠對染色體進行染色二、綜合題:本大題共4小題7.(9分)在冬季部分城市出現(xiàn)霧霾,這與秸稈野外焚燒有-定關(guān)系。微生物學(xué)家試圖通過微生物降解技術(shù)使秸稈盡快腐爛,以增加上壤肥力并緩解環(huán)境污染。請回答下列有關(guān)問題:(6)微生物學(xué)家試圖從富含纖維索的土壤中篩選出纖維素分解菌,應(yīng)使用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基進行篩選,再采用___________進行鑒定,為確定得到的是纖維素分解菌,還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗,發(fā)酵方法有__________和______兩種。(3)纖維素酶是一種復(fù)合酶,其中_________可以將纖維素分解成纖維二糖,繼而在_________作用下分解成葡萄糖。(3)最終在培養(yǎng)基中篩選出了如下表所示的兩種纖維素分解菌,其中降解纖維素能力較強的是____________________。菌種菌落直徑:C(mm)透明圈直徑:H(mm)H/C細菌Ⅰ6.63.33.3細菌Ⅱ4.65.06.6(4)若想將纖維素分解菌中的纖維素酶提取出來用于工業(yè)生產(chǎn),需要先將其固定化,一般_______(適宜或不適宜)采用包埋法,原因是______________________________。8.(10分)谷氨酸是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì),在機體調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。(1)谷氨酸是一種含有2個羧基的非必需氨基酸,這2個羧基在其分子結(jié)構(gòu)中的位置是___________。(2)谷氨酸在神經(jīng)元細胞體中生成后,會借助囊泡膜上的谷氨酸轉(zhuǎn)運體逆濃度梯度轉(zhuǎn)運到囊泡中貯存,這種跨膜運輸方式是___________。興奮傳導(dǎo)到神經(jīng)末梢后,神經(jīng)末梢將谷氨酸釋放并作用于突觸后膜,引起下一個神經(jīng)元興奮。該過程完成的信號轉(zhuǎn)換是___________。(3)當谷氨酸過度釋放時會成為一種毒素。一方面它與突觸后膜上的A受體結(jié)合,促進___________大量進入細胞內(nèi),激活了一氧化氮合酶產(chǎn)生過量的一氧化氮(如圖),引起神經(jīng)元嚴重創(chuàng)傷;另一方面它還能引起神經(jīng)與肌膜對鈉離子的通透性___________(填“增高”或“降低”),引發(fā)神經(jīng)肌肉興奮性增強,導(dǎo)致小兒驚厥發(fā)作。若某種藥物可以通過作用于突觸來緩解小兒驚厥,其作用機理可能是___________。9.(10分)膽固醇是人體中的一種重要化合物,血漿中膽固醇的含量受LDL(一種膽固醇含量為45%的脂蛋白)的影響。下圖表示細胞中膽固醇的來源,請分析回答下列有關(guān)問題:(1)圖中①過程為______,②過程所需的原料是___,參與②過程的RNA還有_________。(2)LDL受體的化學(xué)本質(zhì)是________,LDL可以與細胞膜上的LDL受體結(jié)合,通過______(方式)進入細胞。(3)從圖中可以看出,當細胞膽固醇含量較高時,它可以抑制相關(guān)酶的合成和活性,也可以抑制______的合成。由此可見,細胞對膽固醇的合成過程存在_____調(diào)節(jié)機制。(4)脂蛋白是蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的復(fù)合體,細胞中既能對蛋白質(zhì)進行加工,又是脂質(zhì)合成“車間”的是____。(5)當LDL受體出現(xiàn)遺傳性缺陷時,會導(dǎo)致血漿中的膽固醇含量________。10.(10分)斑馬魚的HuC基因在早期胚胎神經(jīng)細胞中選擇性表達,研究人員構(gòu)建了HuC基因的表達載體,并導(dǎo)入到斑馬魚細胞中研究其作用,請回答:(1)為獲取HuC基因,研究人員從早期胚胎神經(jīng)細胞中提取HuC基因的mRNA,通過_________獲得大量的DNA,進而構(gòu)建出HuC基因的______________。(2)DraⅢ,SnaBⅠ等是質(zhì)粒上不同限制酶的切割位點。為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達載體,需要對HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的____________酶進行切割,這樣做的原因是_________。不選擇NotⅠ酶切割的原因是_____________。(3)用Ca2+處理大腸桿菌,大腸桿菌細胞即能夠______________。實驗過程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察________________________或者在培養(yǎng)基中添加______________,篩選出導(dǎo)入表達載體的大腸桿菌。11.(15分)亞洲瓢蟲的鞘翅呈現(xiàn)色彩豐富的斑點,鞘翅的黑緣型、均色型和黃底型分別由SASA、SESE和ss控制。為研究鞘翅色彩的遺傳特點,用三組亞洲瓢蟲進行雜交實驗,F(xiàn)1自由交配得F2,其結(jié)果如下表:雜交組合親本子一代子二代甲均色型×黃底型新類型一均色型:新類型一:黃底型=1:2:1乙黑緣型×黃底型新類型二黑緣型:新類型二:黃底型=1:2:1丙新類型一×新類型二黃底型:新類型一:新類型二:新類型三1:1:1:1?(1)欲確定子一代新類型體細胞的染色體數(shù)目和形態(tài)特征,需對其進行_________。(2)若僅考慮鞘翅的色彩斑點由SA、SE和s基因決定,則與之相關(guān)的瓢蟲的基因型有_________種,表現(xiàn)型有_________種。(3)根據(jù)甲、乙雜交組合的實驗結(jié)果分析,子一代全為新類型,子二代出現(xiàn)圖中不同表現(xiàn)形的現(xiàn)象稱為_________,出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是F1產(chǎn)生配子時,_________分離。(4)丙組的子一代進行自由交配,在子二代中出現(xiàn)新類型的概率為_________。欲測定新類型三的基因型,可將其與表現(xiàn)型為_________瓢蟲測交,若后代表現(xiàn)型及其比例為_________,則新類型三為雜合子。(5)為了進一步明確鞘翅斑點的遺傳特點,研究者又將黑緣型和均色型雜交,子代表現(xiàn)為兩種親本性狀的嵌合體(如圖所示),這種顯性現(xiàn)象稱為鑲嵌顯性。這種顯性類型與人類AB血型的表現(xiàn)形式是有區(qū)別的,前者是將雙親的顯性性狀在_________表現(xiàn),后者是將雙親的顯性性狀在子一代同一個體的相同細胞中表現(xiàn)。
參考答案一、選擇題:(共6小題,每小題6分,共36分。每小題只有一個選項符合題目要求)1、D【解析】
1.酶是由活細胞產(chǎn)生的具有生物催化作用的有機物,大多數(shù)是蛋白質(zhì),少數(shù)是RNA。2.酶的特性有:(1)高效性:與無極催化劑相比具有高效性;(2)專一性:一種酶只能催化一種或者一類反應(yīng)的進行;(3)需要溫和的條件:適宜的溫度和pH值。高溫、過酸或者過堿都會導(dǎo)致酶因變性而失活,低溫只能抑制酶的活性?!驹斀狻緼、由于酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)或者RNA,因此酶的基本組成單位是氨基酸核糖核苷酸,A錯誤;B、有些酶促反應(yīng)需要ATP供能,有些不需要,如蛋白質(zhì)在消化酶的作用下的水解反應(yīng),B錯誤;C、酶的專一性是指一種酶只能催化一種或者一類反應(yīng)的進行,C錯誤;D、在一定范圍內(nèi)溫度升得越高,酶變性的速率越快,D正確。故選D。2、D【解析】一對患有抗維生素D佝僂病的夫婦,該病為伴X染色體顯性遺傳病,由于父親患病,因此所生女兒一定患病,A錯誤;鐮刀型細胞貧血癥的根本原因是血紅蛋白基因中一個堿基對被替換,B錯誤;血友病是伴X染色體隱性遺傳?。ㄓ肏、h表示),父親正常,母親患血友病,生了一個性染色體為XXY的凝血正常的兒子,則這對夫婦的基因型為XHY×XhXh,兒子的基因型為XHXhY。根據(jù)兒子的基因型可知,他是由含XHY的精子和含Xh的卵細胞結(jié)合形成的受精卵發(fā)育而來的,即其形成原因可能是精子異常,C錯誤;假設(shè)控制該遺傳病的基因為A、a,已知該病的發(fā)病率為19%,則正常(aa)的概率為81%,根據(jù)哈迪-溫伯格定律,a的基因頻率為90%,A的基因頻率為10%,由此人群中AA的基因型概率為=10%×10%=1%,Aa的基因型頻率=2×10%×90%=18%,所以患病妻子的基因型為Aa的概率為18%/(18%+1%)=18/19,其后代不患該病的概率為18/19×1/2=9/19,D正確。【點睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握基因頻率和基因型頻率的關(guān)系,能夠利用基因型頻率計算基因頻率,進而計算出正常個體中雜合子的概率,最后計算后代不患病的概率。3、C【解析】
1、種群是在一定空間和時間內(nèi),同種生物所有個體的集合體。種群的特征包括數(shù)量特征、遺傳特征和空間特征,其中種群密度是種群最基本的數(shù)量特征。種群是生物進化和繁殖的基本單位,生物進化的實質(zhì)是種群基因頻率的定向改變。2、群落的空間結(jié)構(gòu):(1)垂直結(jié)構(gòu):植物群落的垂直結(jié)構(gòu)表現(xiàn)垂直方向上的分層性,其中植物的垂直結(jié)構(gòu)決定了動物的垂直分層。(2)水平結(jié)構(gòu):水平方向上由于光照強度地形明暗濕度等因素的影響,不同地段上分布著不同的生物種群?!驹斀狻緼、“胡煥庸線”兩側(cè)人口疏密程度的差異屬于人口的數(shù)量特征,A錯誤;B、“胡煥庸線”兩側(cè)的野兔由于地理隔離難以進行基因交流,但要判斷它們是否為不同物種,需要看它們間是否存在生殖隔離,B錯誤;C、區(qū)別不同的生物群落首先要分析其物種組成,C正確;D、青山綠水(不同區(qū)域)中生活著不同的生物種群,主要體現(xiàn)的是群落的水平結(jié)構(gòu),D錯誤。故選C?!军c睛】本題考查物種的概念、種群的特征、群落的結(jié)構(gòu),考查學(xué)生的理解能力。4、B【解析】
題意分析:為了證明“專一性”,應(yīng)該徹底敲除Y受體基因,達到有和無的對照?!驹斀狻緼、活化Y受體的基因來使小鼠大量表達Y受體,增加了Y受體的含量,只是多少的對照不是有無的對照,A錯誤;B、可以通過敲除Y受體基因來使小鼠不表達Y受體,起到了有和無的對照,B正確;C、Y受體的作用是有一定限度的,注射大量的致效劑S只是多少的對照不是有無的對照,C錯誤;D、向老鼠體內(nèi)注射針對S的抗體從而把血液中的S移除,不能確定S的專一性,D錯誤。故選B。5、D【解析】
分析題圖可知,圖中的過程①③表示轉(zhuǎn)錄,過程②④表示翻譯,物質(zhì)X1與X2表示mRNA,題圖的左右過程分別表示基因直接控制性狀和基因通過控制合成蛋白質(zhì)間接控制性狀的控制過程。【詳解】A、基因表達血紅蛋白反應(yīng)了對性狀的直接控制,基因表達控制酪氨酸酶反應(yīng)了對性狀的間接控制,A正確;B、物質(zhì)X1與X2均為mRNA,分別由不同的DNA序列轉(zhuǎn)錄獲得,其主要區(qū)別是核糖核苷酸排列順序不同,B正確;C、基因2控制黑色素合成,白化病基因抑制黑色素合成,二者控制同一性狀,互為等位基因,C正確;D、人體成熟紅細胞中僅含有核糖體,無法進行轉(zhuǎn)錄與翻譯過程,D錯誤;故選D。6、C【解析】
顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個部件。物鏡:有螺紋,低倍物鏡短,高倍物鏡長;目鏡:無螺紋,低倍目鏡長,高倍目鏡短?!驹斀狻緼、制備細胞膜實驗中,選取哺乳動物成熟的紅細胞的理由是它沒有復(fù)雜的細胞器且易于破裂,而雞不是哺乳動物,其紅細胞有復(fù)雜的細胞器,A錯誤;B、由于碘液可以和NaOH反應(yīng),HCl可以和斐林試劑反應(yīng),所以一般不用淀粉酶探究其最適pH,B錯誤;C、物鏡越長放大倍數(shù)越小,觀察時物鏡與標本的距離越遠,C正確;D、觀察減數(shù)分裂時,由于染色體本身無色,需要用堿性染料(龍膽紫溶液或醋酸洋紅溶液)對染色體進行染色,D錯誤。故選C。二、綜合題:本大題共4小題7、剛果紅染色法固體發(fā)酵液體發(fā)酵C6酶、Cx酶葡萄糖苷酶細菌Ⅰ不適宜酶分子很小,容易從包埋材料中漏出【解析】
6、纖維素的單體是葡萄糖,纖維素酶能夠?qū)⒗w維素范圍葡萄糖。纖維素酶是一種復(fù)合酶,包括C6酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別,能夠產(chǎn)生透明圈的菌落就是纖維素分解菌。剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,當纖維素被纖維素酶分解后,紅色復(fù)合物無法形成,出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。3、微生物常見的接種的方法①平板劃線法:將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板,接種,劃線,在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分,微生物往往連在一起生長,隨著線的延伸,菌數(shù)逐漸減少,最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后,均勻涂布在培養(yǎng)皿表面,經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。3、可以通過稀釋涂布平板法或顯微鏡計數(shù)法進行統(tǒng)計計數(shù)?!驹斀狻浚?)纖維素分解菌可以用剛果紅染色法進行鑒別,能夠產(chǎn)生透明圈的菌落就是纖維素分解菌。為確定得到的是纖維素分解菌,還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗,發(fā)酵方法有固體發(fā)酵和液體發(fā)酵兩種。(3)纖維素酶是一種復(fù)合酶,包括C6酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,其中C6酶、Cx酶可以將纖維素分解成纖維二糖,繼而在葡萄糖苷酶作用下分解成葡萄糖。(3)分析表格數(shù)據(jù)可知,細菌Ⅰ的H(透明圈直徑)/C(菌落直徑)較細菌Ⅱ,故細菌Ⅰ降解纖維素能力較強。(4)固定化酶不適宜采用包埋法,原因是酶分子很小,容易從包埋材料中漏出。【點睛】本題主要考查土壤中能分解纖維素的微生物及其應(yīng)用價值的相關(guān)知識,要求考生能夠識記原核細胞與真核細胞結(jié)構(gòu)的異同點,識記纖維素酶的種類及其專一性,掌握微生物分離與培養(yǎng)的一般步驟,并能夠?qū)ο嚓P(guān)實驗進行修訂與評價。8、一個羧基與氨基連接在同一個碳原子上(或一個與中心C原子相連),另一個在R基上主動運輸電信號到化學(xué)信號到電信號Ca2+增高抑制突觸前膜釋放谷氨酸(或抑制突觸后膜鈉離子內(nèi)流)【解析】
由圖可知,突觸前膜釋放谷氨酸后,谷氨酸可以與突觸后膜上的A受體結(jié)合,引起突觸后膜的興奮?!驹斀狻浚?)每個氨基酸的中心碳原子上至少連有一個氨基和一個羧基,若有多余的氨基或羧基應(yīng)該位于R基上,故谷氨酸的一個羧基與氨基連接在同一個碳原子上(或一個與中心C原子相連),另一個在R基上。(2)谷氨酸在神經(jīng)元細胞體中生成后,會借助囊泡膜上的谷氨酸轉(zhuǎn)運體逆濃度梯度轉(zhuǎn)運到囊泡中貯存,這種跨膜運輸方式需要載體和能量,為主動運輸。興奮傳導(dǎo)到神經(jīng)末梢后,神經(jīng)末梢將谷氨酸釋放并作用于突觸后膜,引起下一個神經(jīng)元興奮。該過程會經(jīng)過電信號→化學(xué)信號(谷氨酸)→電信號的轉(zhuǎn)變。(3)谷氨酸可以與突觸后膜上的A受體結(jié)合,促進鈣離子大量進入細胞內(nèi),激活了一氧化氮合酶產(chǎn)生過量的一氧化氮,引起神經(jīng)元嚴重創(chuàng)傷;另一方面它還能引起神經(jīng)與肌膜對鈉離子的通透性增強,鈉離子內(nèi)流增多,引發(fā)神經(jīng)肌肉興奮性增強,導(dǎo)致小兒驚厥發(fā)作。由于小兒驚厥是由于谷氨酸過度釋放引起的,故可以通過藥物抑制突觸前膜釋放谷氨酸。【點睛】興奮在神經(jīng)纖維上以電信號的形式傳導(dǎo),在突觸部位會經(jīng)過電信號→化學(xué)信號→電信號的轉(zhuǎn)化。9、轉(zhuǎn)錄氨基酸t(yī)RNA和rRNA蛋白質(zhì)(糖蛋白)胞吞LDL受體(負)反饋內(nèi)質(zhì)網(wǎng)升高【解析】
據(jù)圖分析,①表示轉(zhuǎn)錄,②表示翻譯,當細胞膽固醇含量較高時,它可以反過來抑制酶的合成,也可以抑制LDL受體的合成?!驹斀狻浚?)圖中①過程為轉(zhuǎn)錄,②過程是翻譯,翻譯過程所需的原料是氨基酸,參與②過程的RNA還有tRNA和rRNA。(2)LDL受體的化學(xué)本質(zhì)是糖蛋白,LDL可以與細胞膜上的LDL受體結(jié)合,通過胞吞方式進入細胞,該過程與細胞膜的流動性有關(guān)。(3)從圖中可以看出,當細胞膽固醇含量較高時,它可以抑制相關(guān)酶的合成和活性,也可以抑制LDL受體的合成,所以細胞對膽固醇的合成過程存在負反饋調(diào)節(jié)機制。(4)脂蛋白是蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的復(fù)合體,細胞中既能對蛋白質(zhì)進行加工,又是脂質(zhì)合成“車間”的是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。(5)當LDL受體出現(xiàn)遺傳性缺陷時,LDL無法行使其運輸作用,血漿中的膽固醇無法正常進入組織細胞,導(dǎo)致血漿中膽固醇含量升高。【點睛】本題難度中等,要求學(xué)生識記細胞化學(xué)成分的相關(guān)知識,意在考查學(xué)生理解膽固醇的知識要點,把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力和識圖分析能力。10、逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴增cDNA文庫EcoRⅠ酶和BamHⅠ可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接破壞標記基因無法篩選(且沒有啟動子)吸收周圍環(huán)境中的DNA分子表達的綠色熒光蛋白菌落卡那霉素【解析】
基因工程技術(shù)的基本步驟:(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。(2)基因表達載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。(3)將目的基因?qū)胧荏w細胞:根據(jù)受體細胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。(4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術(shù);②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù);③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?!驹斀狻浚?)從早期胚胎神經(jīng)細胞中提取HuC基因的mRNA,通過逆轉(zhuǎn)錄過程合成目的基因,并通過PCR技術(shù)在體外擴增可獲得大量的目的基因,進而構(gòu)建出HuC基因的cDNA文庫。(2)構(gòu)建基因表達載體時,不能破壞運載體上的啟動子、復(fù)制原點,以及運載體上需要保留標記基因,為了防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接,常用不同的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因,結(jié)合圖示中各種限制酶的酶切位點可知,為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達載體,需要對HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶進行切割。卡那霉素抗性基因為標記基因,若用NotⅠ酶切割,將會導(dǎo)致卡那霉素抗性基因被破壞,且切割后的質(zhì)粒會失去啟動子,使基因表達載體中缺少標記基因無法選擇,且沒有啟動子無法轉(zhuǎn)錄,所以不選擇NotⅠ酶切割質(zhì)粒。(3)用Ca2+處理大腸桿菌使之成為感受態(tài)細胞,易于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。由于綠色熒光蛋白表達后會發(fā)綠光,所以實驗過程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察表達的綠色熒光蛋白菌落或者在培
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