血清蛋白電泳的臨床應用

王連升法國賽比亞公司上海代表處蛋白電泳的應用與臨床實驗結果的解讀主要內容血清蛋白電泳免疫分型電泳電泳技術的發(fā)展歷程1809年發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年建立了界面電泳技術1948年諾貝爾化學獎1950年后區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟1980年

毛細管電泳技術2001年

sebia首次推出全自動毛細管電泳儀19世紀21世紀sebia蛋白電泳技術的變遷濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳—臨床聚丙烯酰胺凝膠電泳—科研毛細管電泳電泳技術的革命4蛋白電泳技術的臨床應用描繪出蛋白組分的全貌各種體液血清、血漿尿液腦脊液胸腹水全血臨床疾病肝病腎病腫瘤心腦血管疾病、代謝病、中樞神經病變、血紅蛋白分子病……5CapillarysElectrophoresisPrinciple正極負極檢測器氘光源200nm約1萬伏高壓毛細管(內徑25微米）樣本進入-+溫控裝置電泳方向毛細管電泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++毛細管的內表面是帶負電荷當毛細管內部充滿緩沖液被活化后，在毛細管內表面的負電荷層上形成了一正電荷層毛細管電泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽極陰極+電滲流作用方向內部充滿電泳緩沖液的毛細管帶電后，

-毛細管內的正電荷層整體向陰極移動，這種現(xiàn)象稱之為電滲流++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽極-陰極

+電滲流作用方向電場力作用方向在毛細管內部的正電荷粒子同時到受電滲流和電場力的作用，兩種作用力方向一致→快速向負極端遷移+--++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽極-陰極

+電滲流作用方向電場力作用方向（負電荷）在毛細管內部的負電荷粒子同時到受電滲流和電場力的作用，兩種作用力方向相反；電滲流>>>電場力→向負極端遷移---------------++++++++++++++++++++++++++++++++++++++陽極-陰極+電滲流作用方向負電荷電場力作用方向樣品進入到毛細管之中的運動正電荷電場力作用方向無論是帶正電、帶負電或不帶電的粒子，都在電滲流的作用下，向陰極遷移，帶正電的，受到同方向的電場力作用，遷移最快，不帶電的遷移速度次之，帶負電的遷移速度最慢，因為它受到與電滲流反方向的電場力作用。優(yōu)點性能特征減少手工操作全自動,人機分離操作操作簡單,可根據(jù)用戶需求調整操作模式提供多種檢測項目供溯源性,減少誤差原管條碼識別增加用戶滿意度高通量優(yōu)化的工作流程持續(xù)進樣、雙向通訊、快捷的數(shù)據(jù)讀取優(yōu)化結果用200nm氘光直接檢測蛋白，無需染色簡化結果分析高分辨率、高清晰度M蛋白檢測的高靈敏度毛細管電泳技術的優(yōu)勢毛細管血清蛋白電泳圖譜白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補體α-1抗胰蛋白酶結合珠蛋白轉鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結合蛋白臨床疾病的識別炎癥肝病腎病……“M”蛋白的篩查及定量對疑似骨髓瘤患者檢測單克隆免疫球蛋白早期檢出無癥狀的骨髓瘤患者對骨髓瘤疾病進行隨訪及療效觀察血清蛋白電泳的臨床應用14CapillarysElectrophoresis

毛細管血清蛋白電泳15正常血清蛋白電泳圖譜白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補體α-1抗胰蛋白酶結合珠蛋白轉鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結合蛋白電泳圖譜---急性炎癥免疫球蛋白C3補體α-1抗胰蛋白酶結合珠蛋白轉鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結合蛋白急性期反應蛋白17電泳圖譜---慢性炎癥電泳圖譜---肝臟肝臟是血清蛋白合成的主要器官白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白C3補體α-1抗胰蛋白酶結合珠蛋白轉鐵蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白

α-2巨球蛋白血紅素結合蛋白電泳圖譜---肝病20beta2區(qū)：多克隆IgA↑gamma區(qū)：多克隆IgG↑電泳圖譜---肝硬化Beta-Gamma橋21BetaGamma橋電泳圖譜---腎病23電泳圖譜---腎病腎小球濾過屏障損傷→白蛋白流失低白蛋白高α-2賈曉輝,馬彧旻.齊齊哈爾醫(yī)學院學報.2009,30(16):2015Alpha-2巨球蛋白24Alba1a2b1b2g總蛋白濃度降低(低于60g/l)α-2巨球蛋白脂蛋白低白蛋白電泳圖譜---腎病綜合征三高一低：高脂蛋白血脂25電泳圖譜---腎病綜合征性別：男

年齡：24 科室：腎臟內科

診斷：腎病綜合征原因:免疫缺陷病、免疫抑制劑、游離輕鏈病電泳圖譜---低免疫球蛋白27電泳圖譜---高免疫球蛋白原因:慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽腫血清蛋白電泳圖譜常見類型圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑急性炎癥/急性時相反應N↓N↑↑/N慢性炎癥型

↓↑↑↑彌漫性肝損害↓N↓↓↑↓↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋腎病↓↓↓↓↑↑↑不定彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑M蛋白血癥型

在α2-γ區(qū)出現(xiàn)異常峰高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑妊娠（高α型）↓N↓↑↑N蛋白質缺陷個別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)免疫球蛋白是機體的正常生理成分多克隆分類重鏈：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM輕鏈：κ、λ10種類型10種免疫球蛋白IgDLambdaIgELambdaIgEKappaIgDKappaIgALambdaIgGKappaIgGLambdaIgMLambdaIgAKappaIgMKappaB淋巴細胞

轉化為漿細胞3漿細胞

合成抗體,即免疫球蛋白.4漿細胞免疫球蛋白造血干細胞分化為3類細胞:紅細胞

粒細胞巨核細胞免疫球蛋白

在免疫系統(tǒng)中被用來識別和消滅如細菌或病毒等外源物52骨髓

(顱骨,盆骨,肋骨,胸骨)1免疫球蛋白的合成過程正常漿細胞多克隆免疫球蛋白P1P2P3P4P5正常電泳結果免疫球蛋白電泳結果正常

所有漿淋巴細胞同步合成免疫球蛋白=多克隆免疫球蛋白33漿細胞惡性增殖多克隆免疫球蛋白單克隆免疫球蛋白異常電泳結果M蛋白免疫球蛋白電泳結果骨髓瘤34IgG

LambdaIgG

KappaIgM

KappaIgM

LambdaIgA

LambdaIgA

Kappa200nm35多克隆Igs單克隆Ig---“M”蛋白正常異常什么是M蛋白單克隆漿細胞惡性增殖產生的均一蛋白“M”MultipleMyeloma 多發(fā)性骨髓瘤Macroglobulinemia 巨球蛋白血癥Malignantlymphoma 惡性淋巴瘤MonoclonalGammapathies 單克隆丙種球蛋白病電泳曲線：單株峰惡性漿細胞增殖僅次于白血?。ㄑ耗[瘤）發(fā)病率占所有腫瘤的1~2%，血液腫瘤的10%美國：白人4/10萬；黑人10/10萬歐洲：2.5~3.0/10萬亞洲：1~2/10萬中國：無確切數(shù)據(jù)發(fā)病年齡老年病，隨年齡↑發(fā)病率↑歐美：高峰65~70歲，中位年齡68歲中國：高峰55~65歲，中位年齡57歲男女比例男：女=2~2.5:1多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥CalciumRenalAnemiaBoneCRAB39骨髓瘤相關器官/組織損傷（ROTI）CRAB血清鈣升高>2.8mmol/L或升高0.25mmol/L以上腎功能不全肌酐>176.8mmol/L貧血<100g/L或低于正常下限20g/L骨損傷溶骨性損害、骨質疏松、病理性骨折其他高粘血癥、反復細菌感染（≥2次/年）、淀粉樣變……多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥臨床特征缺乏特異性臨床表現(xiàn)骨痛、病理性骨折：最常見貧血高鈣血癥免疫功能失調，感染腎功能受損、腎衰心、腦臟器微循環(huán)障礙，心腦血管病變多學科

骨科、感染科、呼吸科、內分泌腎內科、泌尿科、心內科、神經科、消化科多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥41多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告肱骨顱骨盆骨42臨床特征缺乏特異性臨床表現(xiàn)骨痛、病理性骨折：最常見貧血高鈣血癥免疫功能失調，感染腎功能受損、腎衰心、腦臟器微循環(huán)障礙，心腦血管病變多學科

骨科、感染科、呼吸科、內分泌腎內科、泌尿科、心內科、神經科、消化科多發(fā)性骨髓瘤臨床表現(xiàn)/并發(fā)癥我院實例-1患者信息性別：女年齡：69科室：血液科診斷：多發(fā)性骨髓瘤44我院實例-2患者信息性別：女年齡：69科室：消化內科診斷：慢性胃炎45我院實例-3患者信息性別：女年齡：73科室：中醫(yī)科診斷：貧血？46

就診晚2/3確診時已達中晚期

誤診率高1/3非血液科首診>60%多發(fā)性骨髓瘤診治現(xiàn)狀晚骨折預后差增加負擔感染發(fā)生率高腎臟病變不可逆死亡率↑↑47多發(fā)性骨髓瘤誤診分析481557例多發(fā)性骨髓瘤誤診分析呂鴻雁,張金巧.河北醫(yī)藥.2009,31(9):1052-54誤診率：65.17%重視實驗診斷39.8%15.6%19.8%7.6%15.6%國際骨髓瘤基金會2010推薦的M蛋白早期篩查流程50

多發(fā)性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性漿細胞

/漿細胞瘤ROTI有癥狀MM√≥10%√無癥狀MM

(冒煙型,SMM)√≥10%意義未明M蛋病

MGUS√<10%早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療腫瘤

多發(fā)性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性漿細胞

/漿細胞瘤ROTI有癥狀MM√≥10%√無癥狀MM

(冒煙型,SMM)√≥10%意義未明M蛋病

MGUS√<10%早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療腫瘤M蛋白篩查是關鍵52正常血清單克隆Ig單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測血清蛋白電泳是檢測M蛋白的唯一方法若在區(qū)出現(xiàn)異常的峰，且高寬比大于2:1,可以初步判定為M蛋白峰53

單克隆M蛋白的電泳位置常見于gamma球蛋白區(qū)亦可出現(xiàn)在其他區(qū)Beta2beta1

alpha2單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測54白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1徐玲令,楊再興,趙文靜,屠小卿,高春芳,孔憲濤.第二軍醫(yī)大學學報.2004,25(12):1343-45單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測單克隆M蛋白的電泳位置M蛋白陽性患者2007例的體液免疫特征分析

55單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測gamma區(qū)：峰56單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測微量M蛋白gamma區(qū)：曲線異常單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測Beta2區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測Beta1區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測Beta1與beta2融合單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測alpha2區(qū)單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的檢測3個單克隆Mode‘’fromthetoptothebottom

’’Mode‘’fromvalleytovalley’’M蛋白定量的兩種方法對患者的M蛋白隨訪過程只能使用其中一種方法，并堅持使用難以辨別的圖譜血紅蛋白-觸珠蛋白復合物游離HbAlba1a2b1b2g溶血標本電泳圖譜特征Alba1a2b1b2g纖維蛋白原beta2區(qū)抗凝血蛋白電泳圖譜特征Alba1a2b1b2gAlba1a2b1b2g可能原因:基因突變藥物：beta內酰胺類胰腺炎

白蛋白區(qū)雙峰白蛋白區(qū)干擾Alba1a2b1b2g可能原因:

脂蛋白升高膽紅素升高造影劑8/3/202468CRPAlba1a2b1b2g

急性炎癥期CRP>200mg/LGamma區(qū)：多克隆Ig，異常峰C反應蛋白---CRPAlba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）缺乏癥Alba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）雜合子表型表型I-II表型I-I表型II-IIα2區(qū)：觸珠蛋白的不同表型寡克隆免疫球蛋白異常的電泳圖譜常見于

:自身免疫病類風濕關節(jié)炎，干燥綜合癥，紅斑狼瘡等)病毒、細菌和寄生蟲引起的感染H.I.V.病毒性肝炎巨細胞病毒感染與移植相關的自身免疫反應免疫抑制治療寡克隆免疫球蛋白M蛋白可能類型完整的免疫球蛋白分子重鏈輕鏈半分子IgM單體（7S-IgM）……

型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24上海新華醫(yī)院,2005年出現(xiàn)異常血清蛋白結果需要免疫分型電泳進一步確認646例M蛋白類型分類免疫分型:檢測請求

在血清蛋白電泳的程序下:“ITRequest”77稀釋液(380μL)LKMAGELP抗血清/ELPsolution(20μL)免疫分型:抗血清稀釋杯+上機、分析KLIgGIgAIgMELPIgGXIgAXIgMXIgkIglELPGAMklDILUENT抗血清參考稀釋液免疫分型:全自動化血清稀釋樣本與5種抗血清反應(IgG,IgA,IgM,κ,λ

)在液態(tài)環(huán)境中,抗原抗體反應非常迅速無需專門孵育未加入抗血清的標本,作為參照條帶(ELP)毛細管電泳分析稀釋液(380μL)LKMAGELP抗血清/ELP液(20μL)對照曲線與反應曲線自動疊加單克隆免疫球蛋白(M蛋白)的鑒定免疫減法與相應抗血清發(fā)生反應后,M蛋白峰消失免疫分型:結果分析IgG

LambdaIgG

KappaIgM

Kappa