肽的人工合成

采用芐氧羰?；鳛榘被Ｗo(hù)基第一節(jié)肽化學(xué)合成原理和液相合成22為了使肽鍵生成反應(yīng)能夠定向進(jìn)行，需要對氨基酸的各種官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)常用：烷氧羰基、酰基和烷基基團(tuán)結(jié)構(gòu)脫除條件-CH2O-CO-芐氧羰?；宥⊙豸驶碳籽豸驶?保護(hù)基種類相對較少α-羧基保護(hù)基種類：①鹽：鉀鹽、鈉鹽、三乙胺鹽、三丁胺鹽等鹽是對羧基的臨時(shí)性保護(hù)（三）側(cè)鏈的保護(hù)：2和側(cè)鏈羧基:選擇與α-氨基和羧基不同的保護(hù)基原子的正電性，便于α-氨基進(jìn)行親和攻擊而成肽方法：采用巰基、烷基、酚基和N-羥胺類物質(zhì)（最常用：化為酯的形式，然后進(jìn)行成肽反應(yīng)。中間產(chǎn)物可以分離、結(jié)晶、保存，便于去除副產(chǎn)物氨基組分的末端羧基可以不保護(hù)對酰胺基活化特別有效-N=C=N--NH-C=N-N=C=N-O-?；?N-R’RCO-NH-R’+RCO-NH-R’+2N-R’-NH-CO-NH-），3O 350年代提出，簡單、反應(yīng)快、純度好，尤其適合小O成肽（存在副反應(yīng)）優(yōu)點(diǎn)：用于脫除一些不耐酸的保護(hù)基，溫和，副反應(yīng)少，尤其適合于固相合成法。曾用于胰高血糖素合成。是蛋白質(zhì)合成中最困難的工作經(jīng)典方法：空氣氧化法、碘氧化法，收率低，副反應(yīng)嚴(yán)重可先裂解Cys的各種保護(hù)基，然后金屬鉈作為弱化二硫鍵的生成，效率是碘氧化法的2倍可在需要的位置定點(diǎn)生成二硫鍵。逐一合成，使肽鏈向N末端延長的方法合成小肽再縮合成大肽段，縮合時(shí)常用不易消旋片段縮合法策略：aa和保護(hù)基性質(zhì)對肽段純化難異的影響構(gòu)象因素影響②選擇接肽順序：小片段分頭縮和→大片段→肽小片段逐一縮合(反應(yīng)步驟多但產(chǎn)率高)較大片段逐一縮合（常用)??示例：牛胰RNaseA（124aa）的合成從肽的C-端開始，用疊氮法小片段依次接肽，得到保護(hù)的在谷胱苷肽存在下空氣氧化形成二硫鍵，端固定在不溶性樹脂上，然后在其上依次進(jìn)行氨基酸縮合，延長肽鏈?？朔艘合嗪铣煞ㄖ忻恳徊疆a(chǎn)物純化的困難，奠定了自動(dòng)化肽合成的基礎(chǔ)，?固相法合成較之液相法簡單、快速，不需每步純化中間物但固相法合成肽的純度差，大肽或高純、大量小肽合成采用液相法側(cè)鏈用芐醇類保護(hù)；樹脂為氯甲基化或羥甲基化聚苯乙烯,對乙酰氨基芐酯樹脂α③三乙胺中和、洗滌⑤脫保護(hù)、重復(fù)接肽優(yōu)點(diǎn)：避免最終的強(qiáng)酸處理利用蛋白水解酶催化肽鍵的形成不要求aa側(cè)鏈保護(hù)；副產(chǎn)物少，后處理較簡單羧肽酶；金屬蛋白酶類為了使反應(yīng)定向進(jìn)行，將參與反應(yīng)的氨基組分的羧基端和羧基組分的氨基端保護(hù)為提高合成反應(yīng)效率，防止二次水解，創(chuàng)建一些特定的反應(yīng)1.沉淀系統(tǒng)：降低產(chǎn)物溶解度，使其沉淀，防止水解2隨反應(yīng)進(jìn)行溶液逐步變褐色，黏稠化、最終完全固化2.二相系統(tǒng)：將緩沖液與有機(jī)溶劑攪拌成乳濁液（二相系統(tǒng)，），產(chǎn)物為脂溶性的。隨著反應(yīng)地進(jìn)行，產(chǎn)物自動(dòng)轉(zhuǎn)移至有機(jī)相中，不再與酶接觸。如：