03-實(shí)驗(yàn)三-酶的底物專一性

酶的底物專一性實(shí)驗(yàn)三目的了解酶的專一性掌握檢查酶專一性的原理和方法學(xué)會(huì)排除干擾因素，設(shè)計(jì)酶學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶（內(nèi)含淀粉酶及少量麥芽糖酶）、蔗糖酶對(duì)淀粉及蔗糖的催化作用，觀察淀粉酶、蔗糖酶的底物專一性。原理

酶的專一性是指一種酶只能對(duì)一種底物或一類底物起催化作用，對(duì)其他底物無(wú)催化作用。酶的專一性程度分為：鍵專一性：只要求作用于一定類型的鍵，對(duì)鍵兩端基團(tuán)無(wú)嚴(yán)格要求。如脂酶、核酶基團(tuán)專一性：只對(duì)鍵兩端一個(gè)基團(tuán)要求嚴(yán)格，如α-、β-葡萄糖苷酶，轉(zhuǎn)移酶絕對(duì)專一性：只作用于一種底物，如某些核酸工具酶立體異構(gòu)專一性：旋光異構(gòu)專一性和幾何異構(gòu)專一性酶的專一性淀粉直鏈淀粉:由200-300個(gè)α-葡萄糖以α-1，4糖苷鍵相連成一直鏈支鏈淀粉:有α-1，4糖苷鍵和α-1，6糖苷鍵，在直鏈淀粉的基礎(chǔ)上形成分支

直鏈淀粉的相對(duì)分子質(zhì)量比支鏈淀粉小，直鏈淀粉的分子是由許多α-D-葡萄糖經(jīng)過(guò)α-1，4-苷鍵反復(fù)連接而成的線狀聚合物。直鏈淀粉直鏈淀粉的形狀并不是伸展?fàn)顟B(tài)的直鏈，而是有規(guī)律的卷曲成螺旋狀，每一螺旋圈約有6個(gè)葡萄糖結(jié)構(gòu)單位。直鏈淀粉遇碘液顯藍(lán)色，加熱煮沸時(shí)顏色消失，冷卻后又重新顯色。這個(gè)反應(yīng)很靈敏，常用來(lái)檢驗(yàn)淀粉或碘的存在。支鏈淀粉比直鏈淀粉由更多的D-葡萄糖組成，其連接方式也有所不同。支鏈淀粉中D-葡萄糖之間以α-1，4苷鍵連接成主鏈，每隔20－25個(gè)葡萄糖單位便分枝出1個(gè)支鏈，支鏈上還有分枝，而支鏈的連接點(diǎn)即分枝處為α-l，6糖苷鍵。支鏈淀粉支鏈淀粉分枝狀結(jié)構(gòu)由α-葡萄糖和β-果糖以α-1，2糖苷鍵相連而成的雙糖蔗糖Benedict反應(yīng)

Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成氧化亞銅（Cu2O）磚紅色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反應(yīng)，而它們的水解產(chǎn)物葡萄糖能夠發(fā)生Benedict反應(yīng)，所以，用顏色反應(yīng)來(lái)觀察淀粉酶、蔗糖酶對(duì)淀粉及蔗糖的水解作用。半縮醛羥基在右邊，即與氧環(huán)同側(cè)——α-D-葡萄糖；半縮醛羥基在左邊，即與氧環(huán)異側(cè)——β-D-葡萄糖。

試劑淀粉酶溶液：唾液2mL倒入10mL量筒中（不包括泡沫），用蒸餾水稀釋到5mL，靜置10分鐘后，去掉上層泡沫和下層的沉淀。（自制）蔗糖酶溶液：干酵母1g置研缽中，加半勺石英沙及蒸餾水少許（約4mL），用力研磨10分鐘，轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，另用25mL蒸餾水洗滌研缽，并將洗滌液一起轉(zhuǎn)移到離心管中，搖勻，靜置5分鐘，離心(離心前對(duì)稱放置的兩只離心管要等重配平，精確到0.01g)，小心取出上清液（含蔗糖酶）備用。（自制）0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）（取前搖勻）2%蔗糖溶液Benedict試劑Benedict試劑在600mL蒸餾水中溶解173g檸檬酸鈉和100g無(wú)水碳酸鈉，冷卻后稀釋到850mL。在100mL熱蒸餾水中溶解17.4g無(wú)水硫酸銅。冷卻后稀釋到150mL。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉－碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如產(chǎn)生沉淀。要過(guò)濾，班氏試劑配制后能長(zhǎng)期使用。如存放較久而產(chǎn)生沉淀時(shí)，可取上層清液使用，不必重配。實(shí)驗(yàn)步驟檢查試劑試管1試管2試管30.5%淀粉溶液/mL32%蔗糖溶液/mL3蒸餾水/mL3Benedict試劑/mL222搖勻，沸水煮2分鐘觀察記錄結(jié)果原因淀粉酶的專一性試管4試管5試管6稀釋的唾液淀粉酶/ml1110.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸餾水/ml3搖勻，37℃保溫45分鐘Benedict試劑/ml222搖勻，沸水煮沸2分鐘觀察記錄結(jié)果原因蔗糖酶的專一性試管7試管8試管9蔗糖酶溶液/ml1110.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸餾水/ml3搖勻，37℃保溫15分鐘Benedict試劑/ml222搖勻，沸水煮2