病理制片過程

病理制片過程

在臨床病理科和組織學(xué)實(shí)驗(yàn)室，切片是最重要的技術(shù)之一。切片的質(zhì)量不好，就無法對(duì)標(biāo)本進(jìn)展觀察。好的切片機(jī)只是整個(gè)樣品制備過程中的一個(gè)環(huán)節(jié)。要制備一張好的切片，必須要將技術(shù)、知識(shí)和技巧進(jìn)展完美的結(jié)合。

待切片樣品的質(zhì)量是非常關(guān)鍵的因素，而樣品質(zhì)量有取決于前期處理工作的準(zhǔn)確無誤〔例如：固定、巨檢、脫水和包埋〕必須選擇正確的切片機(jī)型號(hào)以及適宜的鋼刀或一次性刀片。切片必須根據(jù)實(shí)際應(yīng)用出發(fā)，需要根據(jù)樣品的類型、大小、期望的厚度認(rèn)真考慮，還要兼顧操作者的便利性和舒適性。

要且出高質(zhì)量的切片，經(jīng)歷豐富的操作者也是必不可少的條件之一。操作者必須懂得切片機(jī)的工作原理，能夠?qū)C(jī)器進(jìn)展精細(xì)調(diào)節(jié)以到達(dá)最正確效果；并且能應(yīng)對(duì)常見故障，消除一些潛在的切片問題；還可以運(yùn)用恰當(dāng)?shù)那衅夹g(shù)，提高切片速度但不影響質(zhì)量。

目前能做病理組織切片的地方很多，但要數(shù)上海舜田生物做出的病理切片相對(duì)質(zhì)量上比擬好，該公司有1位專業(yè)從事病理實(shí)驗(yàn)的教師及相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，積累了豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)歷，所作出的切片及染色效果相當(dāng)不錯(cuò)。1正確處理標(biāo)本的重要性

1.1固定

正確的固定是病理制片技術(shù)中最重要的一步，這個(gè)步驟會(huì)影響到后續(xù)的每個(gè)環(huán)節(jié)。如果固定不充分，樣品的質(zhì)量就會(huì)有欠缺。組織必須在選定的固定劑中浸泡足夠長(zhǎng)的時(shí)間，使大分子保持固有形態(tài)。正確的固定可以防止樣品在脫水劑中發(fā)生變性以及后期處理步驟對(duì)于樣品造成的損害。固定不充分可能增加切片的困難，表現(xiàn)出過度收縮，并且會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核染色缺乏和/或胞核呈現(xiàn)“泡沫〞狀。

巨檢

樣品需要修切成薄片，并盡可能做到均勻，否那么很難在切片機(jī)上切出好的片子。如果樣品太厚以至于無法滲透充分，那么必須經(jīng)過再次處理才能進(jìn)展切片。這樣會(huì)影響樣品的質(zhì)量，更浪費(fèi)時(shí)間。從最初的步驟開場(chǎng)就正確處理會(huì)使后面的工作更簡(jiǎn)單，因此在大體取材的時(shí)候多花些功夫會(huì)為以后的步驟節(jié)省大量時(shí)間和精力。

備注：包埋盒塞滿組織且組織過厚就無法很好的固定，后續(xù)的處理步驟也會(huì)效果欠佳。

脫鈣

為了后期進(jìn)展石蠟包埋切片，骨組織需要進(jìn)展脫鈣，鈣必須被完全去除才能確保切片的完整，并且可以防止刀具的損壞。在用酸溶液進(jìn)展脫鈣之前，骨組織必須經(jīng)過徹底的固定，這樣其中的軟組織成分才能夠被保護(hù)，且防止細(xì)胞核在酸的作用下被破壞，比方蛋白質(zhì)水解作用。

組織處理〔脫水〕

組織經(jīng)過一系列經(jīng)典的處理過程，是使原本親水性的組織最終可以用疏水性的介質(zhì)進(jìn)展包埋，比方石蠟，火棉膠和絕大多數(shù)樹酯。

備注：樣品無論是處理不充分還是處理過度，都可能導(dǎo)致切片效果不理想。脫水機(jī)

旋轉(zhuǎn)升降式脫水機(jī)目前仍有一些病理工作者使用，但是全自動(dòng)全封閉負(fù)壓/壓力式脫水機(jī)逐漸占據(jù)主導(dǎo)地位。后者更有利于保護(hù)工作環(huán)境，更確保組織和試劑的充分作用，可以更有效縮短脫水時(shí)間。一些更先進(jìn)的全自動(dòng)全封閉脫水機(jī)還可以自動(dòng)記錄試劑的使用情況，并對(duì)試劑進(jìn)展智能監(jiān)控和更換。

有一點(diǎn)非常重要，就是處理過度對(duì)組織造成破壞絕對(duì)不亞于處理不充分造成的后果。多種因素，比方試劑的種類，處理步驟的多寡，處理時(shí)間的長(zhǎng)短，試劑的清潔度以及加熱、真空和/或壓力的使用都會(huì)影響具體某個(gè)樣品的處理程度。注：不同來源和不同大小的樣品最好不要共用同一個(gè)處理程序，這樣可以防止其中局部樣品處理過度，而局部處理還不充分。

處理步驟：〔一〕脫水：

脫水的關(guān)鍵就是將樣品置于脫水試劑中足夠長(zhǎng)的時(shí)間，其中的游離水分子被除去，但是脫水時(shí)間也不宜過長(zhǎng)，否那么結(jié)合水分子也會(huì)被除去，會(huì)導(dǎo)致構(gòu)造的變化。而脫水時(shí)間過短致使水分還殘留在樣品中，就會(huì)導(dǎo)致包埋介質(zhì)無法很好滲透入樣品。但是，脫水過度會(huì)導(dǎo)致樣品的皺縮變脆。從過度脫水的組織塊上切到的切片，一旦放入水中，切片就會(huì)膨脹最后破碎。如果將整個(gè)組織塊浸入水中，那么組織的外表會(huì)因?yàn)樗蛎?，這樣再進(jìn)展切片，雖然片子的性狀會(huì)有所改善，但是形態(tài)學(xué)會(huì)發(fā)生改變，而且染色后會(huì)發(fā)生色彩偏淡，比照度較弱。最常用的脫水劑是乙醇和變性酒精。甲基酒精有毒性，會(huì)破壞肝臟中的甲醛，因此不太單獨(dú)使用。異丙醇是乙醇最正確替代物，常規(guī)在微波處理中使用。丁醇，劇毒，適用于較慢的組織處理過程，，而且多用在植物和動(dòng)物組織。

無水酒精往往會(huì)含有水分，因此最好能檢測(cè)一下試劑的純度?？梢杂靡后w比重計(jì)來測(cè)定，也可以將幾毫升酒精滴入幾毫升二甲苯或甲苯，如果混合液出現(xiàn)混濁就表示酒精中至少含有2％的水分。

〔二〕透明：

用來進(jìn)展透明的試劑和脫水劑以及包埋介質(zhì)必須非常容易混合。如果組織在透明劑中時(shí)間不夠，那么組織就會(huì)發(fā)軟甚至呈糊狀。略微延長(zhǎng)時(shí)間并/或定期更換新鮮溶液可以防止透明缺乏的問題。最常用的透明試劑如下：

二甲苯：

目前仍被廣泛使用的一種芳香烴類化合物，能夠快速替換組織中的乙醇。在正確的脫水步驟后，芳香烴能夠改變樣品的折射率并使組織變透明。當(dāng)有水分存在的時(shí)候，二甲苯會(huì)變混濁，這時(shí)必須更換。作用時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致組織變硬，尤其一些纖維、肌肉中樞神經(jīng)系統(tǒng)或軟骨組織更容易變硬。如果發(fā)現(xiàn)組織在完成處理后變得太硬或發(fā)脆，請(qǐng)減少透明的時(shí)間或者尋找二甲苯替代物。請(qǐng)注意，微波處理過程不需要使用透明劑，可以降低組織處理過度的風(fēng)險(xiǎn)。

二甲苯替代物：

苯烯試劑或者短鏈脂肪酸碳?xì)浠衔铩餐闊N〕也得到了快速普及。苯烯試劑不會(huì)像二甲苯那樣使組織發(fā)生硬化，但是前者更容易污染石蠟，因此石蠟需要更頻繁的更換。脂肪族化合物更容易滲透入組織，相對(duì)二甲苯而言，更容易去除組織中的脂肪。然而，這類化合物不能接觸到水分，因此在比擬潮濕的地區(qū)很難使用。假設(shè)放棄二甲苯而使用其替代物，那么重新調(diào)整處理的時(shí)間和溶液循環(huán)使用次數(shù)就顯得尤為重要。

其他透明試劑例如苯，甲苯，氯仿和香精油的應(yīng)用并不多見?！踩辰灐彩灊B透〕：

石蠟是石油裂解物的提取物，屬于惰性的碳?xì)浠衔锏幕旌衔?。在脫水機(jī)中使用石蠟，溫度最好設(shè)定在熔點(diǎn)以上2°－4°，在最后一步石蠟滲透完成后，脫水缸必須用透明劑徹底清洗，不能有任何石蠟的殘留。負(fù)壓可以增強(qiáng)滲透的效果，但是在處理活檢樣本的時(shí)候，負(fù)壓和加熱都必須慎用。另外還需要注意，即便有些脫水機(jī)增加到了4個(gè)蠟缸，總的滲透時(shí)間不能延長(zhǎng)。在確保滲透效果的根底上，組織在石蠟中停留的時(shí)間越短越好。

石蠟包埋

包埋是將正確定位的組織包裹在一種介質(zhì)中〔此處以石蠟為例〕然后固化。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都會(huì)創(chuàng)立一套特有的處理方法，這就決定了樣品在處理后的硬度。用來包埋的石蠟必須能夠和樣品的硬度相匹配，這樣才能確保進(jìn)展切片的蠟塊質(zhì)地盡可能均勻。

另外有兩點(diǎn)對(duì)于切片也至關(guān)重要：溫度和樣品的定位。組織包埋機(jī)已被廣泛使用，機(jī)器最大的優(yōu)點(diǎn)就是能夠在每個(gè)步驟上都到達(dá)確的溫控。石蠟熔化并保持熔化狀態(tài)的這個(gè)溫度非常重要，必須確保一些添加劑完全溶解入石蠟。模具，樣品和石蠟之間的溫差必須控制在幾度以內(nèi)，這樣才能確保石蠟充分包圍并支撐樣品。已經(jīng)包埋的模具最好放置在包埋機(jī)的冷臺(tái)上而不是冰塊上，這樣可以使石蠟固化且不產(chǎn)生裂縫。

樣品必須進(jìn)展正確定位，從而保證正確的面被切到，但是對(duì)于樣品和刀刃接觸的方式必須要經(jīng)過考慮。對(duì)于不同類型的樣品，有很多種方法可供參考，用來正確定位樣品。提高包埋效果的技巧

有些石蠟特別適合用于滲透，有些更適合用于包埋，而有些都適合。可以向供給商查詢。

石蠟應(yīng)當(dāng)在高于其熔點(diǎn)2°C至4°C的溫度下進(jìn)展熔化和儲(chǔ)存，這樣其中的添加劑才能溶解入液體。如果溫度太低，其中一些較重的添加劑，比方聚合物就會(huì)沉在底部，然后最先流出。熔化的石蠟在流出以前最好先進(jìn)展攪拌。

設(shè)定包埋機(jī)的參數(shù)，確保石蠟流出口過夜的時(shí)候處于保溫狀態(tài)。經(jīng)常清空并清洗流出口。

始終確保流出蠟缸的石蠟是過濾后的。

和以往的觀點(diǎn)相反，將石蠟設(shè)定在高溫〔大約85°C〕持續(xù)數(shù)星期，反而是無害的。

盡管石蠟中添加了穩(wěn)定劑，在氧化作用下，石蠟仍然會(huì)變質(zhì)。最初的征兆就是顏色轉(zhuǎn)變?yōu)椴蔹S色直到黃色。隨后可能有異味產(chǎn)生。

選擇尺寸恰當(dāng)?shù)哪＞?，確保樣品的四周都被石蠟包圍，樣品置于中心。用壓平裝置或者彎頭鑷子的背部輕柔地將樣品展平〔易碎樣品可能會(huì)被壓碎〕。不要讓樣品在模具中撐太滿。

大或硬的樣品必須按照一定角度放置在模具中。如果同一個(gè)樣品包含多種不同密度的成分，那么包埋的時(shí)候要確保樣品最硬的局部必須最后接觸到鋒利的刀刃。皮膚往往帶有毛發(fā)，那么包埋的時(shí)候必須保證毛發(fā)最后才被切到。

動(dòng)物樣本中，如果組織的來源不同但是切片的性狀相似那么可以包埋在同一個(gè)蠟塊中，比方肝臟和脾臟，腦組織和脊髓。

脫鈣的骨組織必須包埋在“硬〞石蠟中，樣品最窄的一端必須位于蠟塊的底邊，從而在切片的時(shí)候，最先接觸到刀刃。〔見下列圖〕

為了切片的穩(wěn)定性，模具中必須添加足夠的石蠟，確保包埋盒至少充盈一半。如果石蠟漏出，那么在蠟塊完全固化之前，必須添加石蠟。石蠟添加劑：

絕大多數(shù)市售的用于組織學(xué)的石蠟是含有添加劑的，目的在于改善切片的質(zhì)量，改變硬度或者有利于連片。常見的添加劑如下：

蜂蠟－降低結(jié)晶的大小，增加粘度和附著力。

橡膠－降低脆性，增加粘度，有助于連片

其他石蠟－降低結(jié)晶大小，使質(zhì)地更平滑，可以在不改變?nèi)埸c(diǎn)的前提下提高硬度。

塑料－增加硬度，對(duì)硬組織起到很好的支撐作用，得到更薄的切片

DMSO〔二甲基亞砜〕－增強(qiáng)滲透〔警告?。g性〕熔點(diǎn)和凝固點(diǎn)：

絕大多數(shù)用于組織學(xué)的石蠟是多種石蠟的混合物，這樣可以確保的硬度和指定的凝固點(diǎn)?！澳厅c(diǎn)〞是制造商使用的術(shù)語(yǔ)，其實(shí)相當(dāng)于“熔點(diǎn)〞。這個(gè)溫度是指在石蠟中插入小木棒后，石蠟開場(chǎng)在木棒上凝固的那個(gè)溫度。凝固點(diǎn)和熔點(diǎn)溫度往往是同一個(gè)溫度或者在兩個(gè)溫度之間。

市售石蠟的特性往往根據(jù)其添加物和熔點(diǎn)的不同而有一定差異。56°C到58°C這個(gè)范圍被常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中普遍應(yīng)用。較低熔點(diǎn)的石蠟(50°C到53°C)往往有其特殊的應(yīng)用。

一般情況，低熔點(diǎn)的石蠟往往比擬柔軟，因此更適合包埋較軟的組織。進(jìn)展較薄的切片比擬困難，但是很容易連片?！部梢赃x購(gòu)質(zhì)地較硬但是熔點(diǎn)較低的石蠟?！?/p>

相反的，高熔點(diǎn)的石蠟一般比擬硬。對(duì)于質(zhì)地較硬的樣品，這樣的石蠟有更好的支撐效果，而且很容易得到薄切片，但是連片就比擬困難了。樣品夾具

在切片以前，完成包埋的蠟塊必須固定到切片機(jī)的樣品夾具上。夾持力必須確保樣品能被完全固定，因此蠟塊往往會(huì)附著在一個(gè)支持物上，比方塑料包埋框或者環(huán)行樣品夾。在不使石蠟變形且防止造成切片形狀不規(guī)那么的前提下，用最大的力量夾持支撐物。請(qǐng)注意，石蠟塊必須結(jié)實(shí)附著于支撐物〔例如，在包埋盒中必須有足夠的石蠟充填〕，并且支撐物的背后必須接觸實(shí)心物體的外表。

塑料

最常用的支撐物就是簡(jiǎn)單并獨(dú)立使用的一次性包埋盒。與市售的模具配套使用，蠟塊的平面會(huì)很平整，且邊緣能在X和Y軸向上保持平行。用一樣方法包埋的一批組織塊不需要對(duì)外表進(jìn)展調(diào)節(jié)或僅需要很小的調(diào)節(jié)。

環(huán)行模具也偶爾會(huì)用到，其中必須充填足夠的包埋劑，而且不能夾持太緊。圓形的支撐物經(jīng)常在塑料包埋時(shí)使用。

木塊：

這是廉價(jià)的包埋盒替代物。盡可能使用硬質(zhì)木材〔防止使用松軟的松木〕并進(jìn)展切割以適合夾具的形狀。木塊的外表可以開槽，從而增加黏附力。注意：木制的支撐物在水中浸泡后會(huì)膨脹，導(dǎo)致在樣品夾上固定效果欠佳。

金屬：

金屬支撐物在塑料包埋時(shí)使用較多。金屬支撐物可以重復(fù)使用，但是相比照較貴，在使用時(shí)需要進(jìn)展X/Y向的定位調(diào)節(jié)。而且調(diào)節(jié)這個(gè)平面有一定的難度。如果組織塊附著恰當(dāng)，這種夾具的穩(wěn)定性非常好。

使用切片機(jī)必須遵從最正確的工作秩序，無論使用鋼刀還是一次性刀片，切緣必須鋒利，并且不能有任何缺口或雜質(zhì)附著。2.切片機(jī)及相關(guān)附件耗材簡(jiǎn)介

切片機(jī)的類型

輪轉(zhuǎn)式：

輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)有一個(gè)控制準(zhǔn)確進(jìn)樣的手輪，手輪進(jìn)展360°的旋轉(zhuǎn)，控制樣品頭豎直向下經(jīng)過刀刃然后豎直向上回到處于最高點(diǎn)的起始位置。在到達(dá)切片行程最高點(diǎn)的時(shí)候，樣品頭會(huì)按照設(shè)定的切片厚度水平向朝前運(yùn)動(dòng)，然后再開場(chǎng)向下的行程。這類切片機(jī)常規(guī)進(jìn)展石蠟或塑料包埋樣品的切片。

平推滑動(dòng)式：

平推滑動(dòng)式切片機(jī)是一種水平向運(yùn)動(dòng)的切片機(jī)，其刀架固定不動(dòng)。樣品位于刀的下方，進(jìn)展切片。這種切片機(jī)通常用來切特別大或者特別硬的樣品。

平推雪橇式：

平推滑雪橇式切片機(jī)是一種水平向運(yùn)動(dòng)的切片機(jī)，其樣品頭固定不動(dòng)。刀架在樣品的上方運(yùn)動(dòng)，進(jìn)展切片。一些輕型的切片機(jī)可以進(jìn)展常規(guī)切片，而重型切片機(jī)可以用來切特別硬或者特別大的樣品。

切片機(jī)常見的功能

回縮功能：

無回縮功能：沒有回縮功能的切片機(jī)，當(dāng)樣品頭下降的時(shí)候，組織塊就經(jīng)過刀鋒，隨后沿同一平面上返回到起始位置，然后樣品頭按照指定的厚度前進(jìn)重復(fù)下進(jìn)展下一個(gè)動(dòng)作。

有回縮功能：帶回縮功能的切片機(jī)，當(dāng)樣品頭向下移動(dòng)時(shí)和無回縮切片機(jī)的動(dòng)作完全一樣，但是在樣品頭上升時(shí)，樣品頭會(huì)離開原來的平面，朝刀刃的反向移動(dòng)，從而防止樣品外表和刀鋒接觸。這個(gè)功能有很大的好處，因?yàn)槭紫瓤梢匝娱L(zhǎng)刀的使用壽命，還可以減少樣品外表可能的摩擦〔從而降低熱膨脹〕，并且防止碎屑積聚在的刀刃反面并確保切片的一致性。

平安功能：

手輪鎖：切片機(jī)一般都配備手輪鎖，可以將手輪鎖定于任意位置，防止機(jī)器閑置期間意外觸及手輪，導(dǎo)致人員意外傷害樣或品頭撞擊刀具。更人性化的切片機(jī)往往還配備第二手輪鎖，手輪把手只能被鎖定于最高點(diǎn)，便于在切片過程中隨時(shí)更換樣品或刀具。

刀架護(hù)刀器：無論鋼刀刀架還是一次性刀片架，都應(yīng)當(dāng)配有結(jié)實(shí)的護(hù)刀器，在更換樣品或機(jī)器閑置的時(shí)候用戶一定要養(yǎng)成良好習(xí)慣，將護(hù)刀器覆蓋在刀刃上方，對(duì)人員和刀具都是一種保護(hù)。好的的護(hù)刀器必須能平安地覆蓋刀刃的全長(zhǎng)。

自動(dòng)切片機(jī)平安性：自動(dòng)切片機(jī)必須有緊急制動(dòng)裝置，防止在自動(dòng)操作過程中有意外發(fā)生。人性化的切片機(jī)往往無法一鍵啟動(dòng)，必須依靠組合鍵才能使馬達(dá)運(yùn)轉(zhuǎn)，這樣可以最大限度防止意外啟動(dòng)造成的人員傷害或機(jī)器損壞。

操作特點(diǎn)：

手動(dòng)：手動(dòng)切片機(jī)不具備電動(dòng)切片功能。粗修和切片都必須由操作者手動(dòng)完成。

半自動(dòng)：半自動(dòng)切片機(jī)往往只有一個(gè)驅(qū)動(dòng)馬達(dá)控制進(jìn)樣，沒有切片馬達(dá)。

全自動(dòng)：全自動(dòng)切片機(jī)有兩個(gè)驅(qū)動(dòng)馬達(dá)，既能控制粗進(jìn)樣也能進(jìn)展切片。

刀具分類：

重復(fù)使用型刀

要長(zhǎng)時(shí)間保持刀刃的鋒利，刀必須在不同的階段進(jìn)展很好的鍛造以到達(dá)恰當(dāng)?shù)钠胶?。質(zhì)地較軟的刀往往刀刃不鋒利，而質(zhì)地很硬的刀比擬脆，容易在切片過程中刀刃崩裂。經(jīng)過鍛造的刀通常用來切石蠟包埋、火棉膠包埋、冰凍和較軟的工業(yè)樣品。

鋒利而無暇的刀刃是獲得一張好切片的根底。磨得比擬好的刀，斜面很小，從側(cè)面觀察，斜邊筆直，不會(huì)出現(xiàn)錐形。斜邊上出現(xiàn)錐形會(huì)使刀刃發(fā)生彎曲，導(dǎo)致刀刃只在某個(gè)點(diǎn)上貼近蠟塊，而其余局部相對(duì)遠(yuǎn)離。所以減小斜面很重要，否那么刀刃更多的區(qū)域就需要進(jìn)展打磨以避免刀對(duì)樣品的刮擦。刀刃上的擦痕顯然會(huì)影響切片的質(zhì)量。放大100倍對(duì)刀刃進(jìn)展觀察，應(yīng)該看到一道很細(xì)的反光，呈筆直、不連續(xù)的明亮的細(xì)線。不理想的刀刃看上去是不規(guī)那么并有中斷的線條。

刀的角度：刀刃上用來進(jìn)展切片的區(qū)域是由兩個(gè)相交的平面組成，叫做切面。在這兩個(gè)平面之間形成的夾角叫做斜角，〔通常27°-32°〕，這個(gè)角度通常大于楔角〔通常15°-18°〕

在切片機(jī)上進(jìn)展角度的調(diào)節(jié)：當(dāng)?shù)栋惭b到切片機(jī)的刀架上時(shí)，必須呈一定角度，這樣才能在刀刃接觸組織平面的那個(gè)小平面和組織塊平面之間形成一個(gè)間隙。這個(gè)角度就是間隙角。在切片機(jī)上都一個(gè)數(shù)字刻度表示間隙角的大小，這個(gè)讀數(shù)在不同的切片機(jī)上可能會(huì)有差異。更換了不同的切片刀后，這個(gè)數(shù)值可能需要調(diào)節(jié)。尋找適宜角度的方法，最好采取試錯(cuò)法。

刀片的寬度同樣會(huì)影響到間隙角。經(jīng)過屢次磨刀后，刀的寬度會(huì)變窄，為了和樣品有一個(gè)正確的切入點(diǎn)，刀必須被抬高。刀架必須經(jīng)過調(diào)節(jié)，這樣被磨過〔變窄〕的刀的刀鋒必須處在和新〔寬的〕的刀鋒一樣上下的位置。

不同的剖面：

“B〞型刀的剖面略向下凹，刀刃處很薄。現(xiàn)在除了在柔軟的石蠟包埋或者火棉膠包埋切片中使用外，很少再用到。

“C〞型刀是一種剖面為楔形的標(biāo)準(zhǔn)刀具，兩側(cè)面是一個(gè)平整的面(剖面為等腰三角形)。在常規(guī)石蠟切片、冰凍切片、硬質(zhì)火棉膠和較軟的工業(yè)樣品切片中使用。

“D〞型刀剖面呈楔形，兩條側(cè)邊不對(duì)稱，刀刃非常鋒利。這類刀在較硬組織的切片時(shí)使用，例如塑料包埋樣品或者較硬的工業(yè)樣品。

不同的長(zhǎng)度：重復(fù)使用型切片刀有很多不同的長(zhǎng)度。長(zhǎng)度在120mm的短刀推薦在冰凍切片時(shí)使用，160mm和185mm的刀常規(guī)應(yīng)用于輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，而更長(zhǎng)的刀通常在平推式滑行切片機(jī)或平推雪橇式切片機(jī)。

注：所有的刀都應(yīng)當(dāng)外表涂抹油脂后存放，以免生銹。

一次性刀片

一次性刀片，采用優(yōu)質(zhì)的不銹鋼，由于其便利性和經(jīng)濟(jì)性，在絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室里作為重復(fù)使用型刀的替代品。大多數(shù)的切片機(jī)都帶有集成的刀片刀架，但是一次性刀片也可以插入安裝在標(biāo)準(zhǔn)鋼刀刀架上的刀片夾內(nèi)使用。

寬型和窄型刀片：

一次性刀片通常區(qū)分為寬型和窄型，這就說明了刀的寬度。大多數(shù)窄型刀寬度為1/4英寸〔約6mm〕，厚度為英寸〔約0.23mm〕；也有制造商采用厚度為英寸〔約〕的規(guī)格。寬型刀大約寬度為1/2英寸〔約〕，常規(guī)的刀片厚度通常在英寸〔約〕，重力刀片〔硬組織切片專用〕厚度可達(dá)英寸〔約〕。實(shí)際的尺寸可能因?yàn)椴煌闹圃焐虝?huì)有很大的差異，其中可能有些刀片在寬度和厚度上無法適應(yīng)刀架。請(qǐng)確保刀片和刀架之間兼容性。

無涂層vs.帶涂層：

一次性刀片的外表可以帶有很薄的鍍層或涂層。不同制造商可能采用不同的涂層，但是幾乎所有的涂層中都會(huì)含有聚四氟乙烯〔PTFE〕類聚合物中的一種，這是一種類似Teflon的環(huán)保型涂層。涂層的好處在于可以防止刀刃氧化，延長(zhǎng)刀片的使用壽命并且可以降低摩擦力從而減少切片壓力。但是如果涂層過厚也會(huì)有害處，最初的幾張切片可能卷曲或者打卷，給人造成刀片“過于鋒利〞的感覺。當(dāng)?shù)镀羞^數(shù)張片子后，涂層被磨去局部，那么卷曲的現(xiàn)象會(huì)有所改善。在一些物體的外表摩擦刀片這種方法不是很值得推薦。有時(shí)候，降低涂層所造成的摩擦反而會(huì)導(dǎo)致連片的困難，切片很容易互相分開。

無涂層的寬型或窄型刀片和有涂層刀片除了外表缺少保護(hù)性涂層，通常是一樣的，前者往往涂抹優(yōu)質(zhì)的油。這種無涂層刀片有時(shí)也被稱作“經(jīng)濟(jì)型〞刀片，因?yàn)樗鼈儽扔型繉拥镀瑑r(jià)格廉價(jià)。

刀刃夾角：

絕大多數(shù)窄型刀片會(huì)有一個(gè)大約35°的夾角(每個(gè)側(cè)面各自?shī)A角那么為17½°)，而寬型刀片的夾角為32°到35°。在制造過程中，夾角可能會(huì)有細(xì)微的變化。刀片一側(cè)的夾角甚至可能和另一側(cè)的角度略有不同。這就可以解釋為什么有時(shí)候刀片某一面切片的效果比另一面好，或者不及另一面。

切片機(jī)上的角度調(diào)節(jié)：

不管是嵌入鋼刀架內(nèi)的一次性刀片夾還是一體化的刀片夾都會(huì)有一個(gè)用來調(diào)節(jié)間隙角的讀數(shù)指示，這個(gè)讀數(shù)在不同的切片機(jī)，不同的刀架可以有所不同。當(dāng)使用不同制造商提供的刀片或者使用不同高度的刀片時(shí)，間隙角可能會(huì)需要進(jìn)展相應(yīng)調(diào)節(jié)。確定一個(gè)適當(dāng)?shù)慕嵌茸詈玫姆椒赡芫褪恰霸囧e(cuò)法〞?！苍囧e(cuò)法即不斷嘗試并排除錯(cuò)誤可能的方法〕。

刀片壓板的狀態(tài)：

壓板的作用是將一次性刀片固定在恰當(dāng)?shù)奈恢茫虼藟毫Π灞仨毐３智鍧?，也不能有任何損壞。如果在壓板外表有明顯可見的弧度，而這局部又會(huì)和刀片接觸，并導(dǎo)致刀片發(fā)生彎曲。因此刀刃會(huì)以一種不正常的方式接觸阻止塊的外表。同樣，刀片上的碎屑也會(huì)導(dǎo)致同樣的效果。

刀夾的夾力：

作用在刀片上的壓力必須均勻分布在刀片被覆蓋的全部長(zhǎng)度。力度必須足夠大以確保刀片的穩(wěn)定，防止任何可能的振動(dòng)。但是也不能夾持過緊，否那么會(huì)導(dǎo)致刀片彎曲而切出不規(guī)那么的切片。為了到達(dá)這種微妙的平衡，需要在反復(fù)實(shí)踐中提高技巧。3.正確的切片技術(shù)：

3.1人體工程學(xué)和因工造成的肌肉骨骼損傷：

工作習(xí)慣合并日常生活方式很可能導(dǎo)致職業(yè)相關(guān)的肌肉骨骼損傷，比方腕管綜合癥，肌腱炎和腱鞘炎。不恰當(dāng)使用切片機(jī)完全可以造成潛在的傷害。在這里，我們會(huì)介紹一些實(shí)用的小訣竅：

a.添置一把符合人體工程學(xué)的座椅。調(diào)節(jié)座椅高度，保證手可以輕松夠到手輪，且不占用擱置腿腳的空間。如果腳不能踏到地板，請(qǐng)使用腳凳。

b.將水浴缸放置在切片機(jī)區(qū)域旁L型的延伸段，這樣只需要稍微轉(zhuǎn)動(dòng)身體和椅子就可以夠到水浴缸，不必頻繁傾斜身體。

c.轉(zhuǎn)動(dòng)手輪最好完成一周的旋轉(zhuǎn)。最好不要以擺動(dòng)方式搖手輪〔即半刀法〕。

d.將準(zhǔn)確進(jìn)樣手輪的把手的直徑增加到1.5英寸〔約35mm〕。包裹把手的材料可以是有彈性并光滑的物質(zhì)。

e.使手臂盡量貼近身體，不要將手靠在工作臺(tái)的邊緣或者任何鋒利的外表。不要將肘部外展側(cè)伸出。

f.在進(jìn)展切片時(shí)，保持肩膀處于放松的位置。不要扛著肩膀工作。盡量使頸部的肌肉放松。頸部肌肉處于緊張狀態(tài)會(huì)阻斷該區(qū)域的血液循環(huán)，導(dǎo)致神經(jīng)被壓迫。

g.經(jīng)常稍事休息。做體操或者自我按摩以便恢復(fù)血液循環(huán)并消除緊張。

h.如果可能，盡量采用自動(dòng)化。

3.2切片機(jī)的設(shè)置：

在切片機(jī)上設(shè)定的切片厚度即表示了手輪旋轉(zhuǎn)一圈后樣品頭準(zhǔn)確進(jìn)樣的距離。但這并不意味每張切片一定是這個(gè)厚度。有很多因素都會(huì)影響到切片的厚度，比方溫度、切片速度、切片壓力、刀的角度、儀器的潤(rùn)滑程度等。判斷切片厚度的最好方法就是在顯微鏡下觀察。當(dāng)然，有經(jīng)歷的病理技師在切片時(shí)，將切片漂浮在水浴缸中，此時(shí)就可以隨時(shí)識(shí)別切片厚度的變化。

3.3樣品塊的放置〔水平vs.垂直定位〕：

樣品的定位往往由操作者的判斷來決定，但是實(shí)際情況往往是樣品塊的底部先接觸到刀刃，因此定位應(yīng)當(dāng)根據(jù)這個(gè)實(shí)際情況出發(fā)。如果樣品是包埋在塑料包埋盒上的話，應(yīng)當(dāng)確保夾具均勻夾住兩個(gè)對(duì)等的外表，即包埋的兩個(gè)側(cè)面。如果樣品夾豎直夾住包埋盒印有標(biāo)記的那個(gè)側(cè)面，這會(huì)導(dǎo)致一些樣品變得不穩(wěn)定，因?yàn)樽鳂?biāo)記的側(cè)面往往帶有角度并且面積相對(duì)較小。如果切片時(shí)發(fā)現(xiàn)效果很差，可以嘗試將樣品旋轉(zhuǎn)90°。

3.4刀的角度：

當(dāng)?shù)痘蛘叩镀惭b在切片機(jī)適宜的刀架上以后，刀架必須有一定的傾斜度，這樣刀的夾角才能和樣品外表之間形成一個(gè)間隙，這就是間隙角。如果傾斜度不恰當(dāng)，刀刃夾角會(huì)因?yàn)樾ㄈ胄?yīng)而對(duì)組織塊的外表造成擠壓，就會(huì)導(dǎo)致跳片或者厚薄不均切片的產(chǎn)生。間隙角的讀數(shù)在不同的切片時(shí)機(jī)有各種差異。使用不同的刀或者不同的刀片或者更換不同制造商，都需要對(duì)間隙角進(jìn)展略微的調(diào)節(jié)。要找倒適宜的角度，最好的方法就是試錯(cuò)法。

3.5修片厚度：

在修塊的時(shí)候一定要非常小心，防止把蠟塊中的組織不小心剝離出來，切片上就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)空洞。修