高考生物一輪《基因工程的基本工具和基本操作程序》復(fù)習(xí)卷

基因工程的基本工具和基本操作程序一、選擇題1．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)2．DNA瓊脂糖凝膠電泳是指利用在溶液中帶負(fù)電荷的DNA分子在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)的原理，分離、純化或分析PCR擴(kuò)增后的待檢DNA片段的生物化學(xué)技術(shù)。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．DNA片段相對(duì)分子質(zhì)量越大，遷移就越慢B．凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，用于分離后DNA片段的檢測(cè)C．?dāng)M回收的DNA區(qū)帶融化后可先用DNA抽取劑抽提，再用70%的冷酒精沉淀抽提DNA片段，從而提高回收率D．新冠病毒核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因可能是陽(yáng)性對(duì)照中模板核酸與樣品交叉污染3．(2023·江蘇淮安高三模擬)下圖表示pBR322質(zhì)粒和人生長(zhǎng)激素基因所在片段的結(jié)構(gòu)信息，將二者構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌并進(jìn)行篩選。下列敘述錯(cuò)誤的是()注：AmpR：氨芐青霉素抗性基因；TetR：四環(huán)素抗性基因。A．應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶GB．所選用的受體菌含有AmpR和TetR基因C．用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的是含重組質(zhì)粒的受體菌D．同時(shí)用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，電泳后可得到4個(gè)條帶4．T4DNA連接酶可將任意2個(gè)具有相同黏性末端的DNA片段連接在一起。該反應(yīng)過(guò)程需消耗ATP，其水解產(chǎn)生的腺苷一磷酸(AMP)通過(guò)共價(jià)鍵與酶相連，隨后AMP轉(zhuǎn)移至DNA片段，進(jìn)而完成連接反應(yīng)。下列敘述正確的是()A．T4DNA連接酶的底物種類(lèi)較多，故其無(wú)專(zhuān)一性B．T4DNA連接酶催化反應(yīng)后，其組成成分已改變C．ATP在該反應(yīng)過(guò)程中可能打開(kāi)兩個(gè)特殊的化學(xué)鍵D．T4DNA連接酶需保存于最適溫度和pH條件下5．下列有關(guān)獲取目的基因的敘述，錯(cuò)誤的是()A．目的基因就是編碼蛋白質(zhì)的基因B．篩選和獲取目的基因是基因工程的第一步C．來(lái)自蘇云金桿菌的Bt基因可作為轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的目的基因D．序列比對(duì)工具的應(yīng)用為科學(xué)家找到合適的目的基因提供了更多的機(jī)會(huì)6．(2023·湖南常德高三質(zhì)檢)如圖表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相關(guān)的酶作用位點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．甲、乙、丙都屬于黏性末端B．甲、乙片段可形成重組DNA分子，但甲、丙不能C．DNA連接酶的作用位點(diǎn)在圖乙中b處D．切割甲的限制酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子7．(2023·山東日照高三檢測(cè))基因工程利用某目的基因(圖甲)和P1噬菌體載體(圖乙)構(gòu)建重組DNA。限制性?xún)?nèi)切核酸酶BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ的酶切位點(diǎn)分別如圖所示。下列分析錯(cuò)誤的是()A．構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體B．構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體C．圖乙中的P1噬菌體載體只用EcoRⅠ切割后，含有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體，再用DNA連接酶連接，只能產(chǎn)生一種重組DNA8．(2023·河北石家莊高三模擬)如圖是快速RT－PCR過(guò)程示意圖，①和②為逆轉(zhuǎn)錄酶催化的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，③是PCR過(guò)程。據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是()A．逆轉(zhuǎn)錄酶具有DNA聚合酶的能力B．③PCR過(guò)程只需要引物bC．RT－PCR可檢測(cè)基因表達(dá)水平D．RT－PCR可檢測(cè)新冠病毒等RNA病毒9．(2023·遼寧沈陽(yáng)高三調(diào)研)引物的設(shè)計(jì)是影響PCR擴(kuò)增反應(yīng)的效率和特異性的關(guān)鍵因素，下列相關(guān)敘述正確的是()A．引物的堿基數(shù)量越少則退火溫度越低、目標(biāo)DNA獲得率越高B．根據(jù)需要可在引物的5′端添加限制酶識(shí)別序列、點(diǎn)突變序列等C．兩種引物的退火溫度差異較大，可減少引物與模板的非特異性結(jié)合D．引物的GC含量越高，結(jié)合特異性越強(qiáng)，越利于目標(biāo)DNA的擴(kuò)增10．(2023·遼寧錦州高三質(zhì)檢)實(shí)時(shí)熒光RT－PCR可用于RNA病毒的核酸檢測(cè)，其原理：在PCR復(fù)性過(guò)程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團(tuán)和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(tuán)，新鏈延伸過(guò)程中，DNA聚合酶會(huì)破壞探針，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離而發(fā)出熒光。利用RT－PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)的相關(guān)過(guò)程如圖所示。下列說(shuō)法不正確的是()A．做RT－PCR之前，需要先根據(jù)cDNA的核苷酸序列合成引物和探針B．RNA不能作為PCR擴(kuò)增的模板，故需要將樣本中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后再進(jìn)行擴(kuò)增C．若檢測(cè)結(jié)果有強(qiáng)烈熒光信號(hào)發(fā)出，說(shuō)明被檢測(cè)者沒(méi)有感染病毒D．病毒的檢測(cè)還可以檢測(cè)病毒表面的物質(zhì)或病毒引發(fā)產(chǎn)生的抗體，其原理都是抗原—抗體雜交11．(2023·遼寧沈陽(yáng)高三質(zhì)量監(jiān)測(cè))科研人員通過(guò)PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子，將該啟動(dòng)子與Cre重組酶基因結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體，培育出在肝細(xì)胞中特異性表達(dá)Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因小鼠。下列相關(guān)敘述正確的是()A．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入肝細(xì)胞經(jīng)培育獲得轉(zhuǎn)基因小鼠B．利用PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子需要兩種引物C．通過(guò)抗原－抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)Cre基因是否完成表達(dá)D．將發(fā)育到原腸胚時(shí)期的重構(gòu)胚向受體進(jìn)行移植二、非選擇題12．如圖pIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素(一種抗生素)抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：項(xiàng)目pIJ702pZHZ8BglⅡ5.7kb6.7kb表1固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度(μg/mL)012510不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長(zhǎng)狀況＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－注：“＋”表示生長(zhǎng)；“－”表示不生長(zhǎng)。表2(1)限制酶可以識(shí)別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的________________斷裂，切割形成的末端有______________________兩種。(2)以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長(zhǎng)度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1。由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為_(kāi)___________kb，判定目的基因中含有一個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用Ca2＋處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)(能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài))細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成________________過(guò)程。(4)不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在________μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是____________________________________________________________________________________________________________________________________。若要檢測(cè)整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測(cè)受體細(xì)胞的__________(填“DNA”或“RNA”)。13．(2021·江蘇，23)某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題：(1)目的基因的擴(kuò)增①提取真菌細(xì)胞__________________，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計(jì)引物P2時(shí)，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致__________________。③熱啟動(dòng)PCR可提高擴(kuò)增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開(kāi)始PCR擴(kuò)增。下列敘述正確的有__________。A．TaqDNA聚合酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動(dòng)PCR可減少反應(yīng)起始時(shí)引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了TaqDNA聚合酶的特異性(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建①將SmaⅠ切開(kāi)的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進(jìn)____________________，形成A－m結(jié)合體。將A－m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及________酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A－m仍能被SmaⅠ切開(kāi)，則SmaⅠ的酶切位點(diǎn)可能在_________________________________________________________________________________________。(3)融合蛋白的表達(dá)①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A－m，然后涂布于無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機(jī)理是______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。②若通過(guò)抗原－抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說(shuō)明_____________________，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可借助tag標(biāo)簽進(jìn)行蛋白M的分離純化。14．如圖是利用工程菌(大腸桿菌)生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的實(shí)驗(yàn)流程。所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點(diǎn)各一個(gè)，且三種酶切割形成的末端各不相同，而AmpR表示氨芐青霉素抗性基因，TetR表示四環(huán)素抗性基因。請(qǐng)回答以下相關(guān)問(wèn)題：(1)目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有________的因子。過(guò)程①所用到的組織細(xì)胞是________________________________________________________，③過(guò)程的目的是________________________，⑤過(guò)程常用____________________________________處理大腸桿菌。(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行切割，形成的DNA片段種類(lèi)有________種，這些種類(lèi)的DNA片段中含有完整氨芐青霉素抗性基因的DNA片段和四環(huán)素抗性基因的DNA片段分別有______種和________種。(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，完成過(guò)程④、⑤后(受體大腸桿菌不含AmpR、TetR)，將三角瓶?jī)?nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無(wú)菌牙簽挑取甲培養(yǎng)基上的單個(gè)菌落，分別接種到乙和丙兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上，一段時(shí)間后，菌落的生長(zhǎng)狀況如圖乙、丙所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選______________________的大腸桿菌；接種到乙培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落，能存活的大腸桿菌體內(nèi)導(dǎo)入的是_______________________。含有目的基因的大腸桿菌在培養(yǎng)基乙和丙上的生存情況是_____________________________________________________________________________________________________________?；蚬こ痰幕竟ぞ吆突静僮鞒绦蛞弧⑦x擇題1．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)答案B2．DNA瓊脂糖凝膠電泳是指利用在溶液中帶負(fù)電荷的DNA分子在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)的原理，分離、純化或分析PCR擴(kuò)增后的待檢DNA片段的生物化學(xué)技術(shù)。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．DNA片段相對(duì)分子質(zhì)量越大，遷移就越慢B．凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，用于分離后DNA片段的檢測(cè)C．?dāng)M回收的DNA區(qū)帶融化后可先用DNA抽取劑抽提，再用70%的冷酒精沉淀抽提DNA片段，從而提高回收率D．新冠病毒核酸檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因可能是陽(yáng)性對(duì)照中模板核酸與樣品交叉污染答案C3．(2023·江蘇淮安高三模擬)下圖表示pBR322質(zhì)粒和人生長(zhǎng)激素基因所在片段的結(jié)構(gòu)信息，將二者構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌并進(jìn)行篩選。下列敘述錯(cuò)誤的是()注：AmpR：氨芐青霉素抗性基因；TetR：四環(huán)素抗性基因。A．應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶GB．所選用的受體菌含有AmpR和TetR基因C．用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的是含重組質(zhì)粒的受體菌D．同時(shí)用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，電泳后可得到4個(gè)條帶答案BC4．T4DNA連接酶可將任意2個(gè)具有相同黏性末端的DNA片段連接在一起。該反應(yīng)過(guò)程需消耗ATP，其水解產(chǎn)生的腺苷一磷酸(AMP)通過(guò)共價(jià)鍵與酶相連，隨后AMP轉(zhuǎn)移至DNA片段，進(jìn)而完成連接反應(yīng)。下列敘述正確的是()A．T4DNA連接酶的底物種類(lèi)較多，故其無(wú)專(zhuān)一性B．T4DNA連接酶催化反應(yīng)后，其組成成分已改變C．ATP在該反應(yīng)過(guò)程中可能打開(kāi)兩個(gè)特殊的化學(xué)鍵D．T4DNA連接酶需保存于最適溫度和pH條件下答案C5．下列有關(guān)獲取目的基因的敘述，錯(cuò)誤的是()A．目的基因就是編碼蛋白質(zhì)的基因B．篩選和獲取目的基因是基因工程的第一步C．來(lái)自蘇云金桿菌的Bt基因可作為轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的目的基因D．序列比對(duì)工具的應(yīng)用為科學(xué)家找到合適的目的基因提供了更多的機(jī)會(huì)答案A6．(2023·湖南常德高三質(zhì)檢)如圖表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相關(guān)的酶作用位點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．甲、乙、丙都屬于黏性末端B．甲、乙片段可形成重組DNA分子，但甲、丙不能C．DNA連接酶的作用位點(diǎn)在圖乙中b處D．切割甲的限制酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子答案C7．(2023·山東日照高三檢測(cè))基因工程利用某目的基因(圖甲)和P1噬菌體載體(圖乙)構(gòu)建重組DNA。限制性?xún)?nèi)切核酸酶BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ的酶切位點(diǎn)分別如圖所示。下列分析錯(cuò)誤的是()A．構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體B．構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體C．圖乙中的P1噬菌體載體只用EcoRⅠ切割后，含有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌體載體，再用DNA連接酶連接，只能產(chǎn)生一種重組DNA答案D8．(2023·河北石家莊高三模擬)如圖是快速RT－PCR過(guò)程示意圖，①和②為逆轉(zhuǎn)錄酶催化的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，③是PCR過(guò)程。據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是()A．逆轉(zhuǎn)錄酶具有DNA聚合酶的能力B．③PCR過(guò)程只需要引物bC．RT－PCR可檢測(cè)基因表達(dá)水平D．RT－PCR可檢測(cè)新冠病毒等RNA病毒答案B9．(2023·遼寧沈陽(yáng)高三調(diào)研)引物的設(shè)計(jì)是影響PCR擴(kuò)增反應(yīng)的效率和特異性的關(guān)鍵因素，下列相關(guān)敘述正確的是()A．引物的堿基數(shù)量越少則退火溫度越低、目標(biāo)DNA獲得率越高B．根據(jù)需要可在引物的5′端添加限制酶識(shí)別序列、點(diǎn)突變序列等C．兩種引物的退火溫度差異較大，可減少引物與模板的非特異性結(jié)合D．引物的GC含量越高，結(jié)合特異性越強(qiáng)，越利于目標(biāo)DNA的擴(kuò)增答案B10．(2023·遼寧錦州高三質(zhì)檢)實(shí)時(shí)熒光RT－PCR可用于RNA病毒的核酸檢測(cè)，其原理：在PCR復(fù)性過(guò)程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團(tuán)和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(tuán)，新鏈延伸過(guò)程中，DNA聚合酶會(huì)破壞探針，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離而發(fā)出熒光。利用RT－PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)的相關(guān)過(guò)程如圖所示。下列說(shuō)法不正確的是()A．做RT－PCR之前，需要先根據(jù)cDNA的核苷酸序列合成引物和探針B．RNA不能作為PCR擴(kuò)增的模板，故需要將樣本中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后再進(jìn)行擴(kuò)增C．若檢測(cè)結(jié)果有強(qiáng)烈熒光信號(hào)發(fā)出，說(shuō)明被檢測(cè)者沒(méi)有感染病毒D．病毒的檢測(cè)還可以檢測(cè)病毒表面的物質(zhì)或病毒引發(fā)產(chǎn)生的抗體，其原理都是抗原—抗體雜交答案C11．(2023·遼寧沈陽(yáng)高三質(zhì)量監(jiān)測(cè))科研人員通過(guò)PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子，將該啟動(dòng)子與Cre重組酶基因結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體，培育出在肝細(xì)胞中特異性表達(dá)Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因小鼠。下列相關(guān)敘述正確的是()A．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入肝細(xì)胞經(jīng)培育獲得轉(zhuǎn)基因小鼠B．利用PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子需要兩種引物C．通過(guò)抗原－抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)Cre基因是否完成表達(dá)D．將發(fā)育到原腸胚時(shí)期的重構(gòu)胚向受體進(jìn)行移植答案BC二、非選擇題12．如圖pIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素(一種抗生素)抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：項(xiàng)目pIJ702pZHZ8BglⅡ5.7kb6.7kb表1固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度(μg/mL)012510不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長(zhǎng)狀況＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－注：“＋”表示生長(zhǎng)；“－”表示不生長(zhǎng)。表2(1)限制酶可以識(shí)別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的________________斷裂，切割形成的末端有______________________兩種。(2)以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長(zhǎng)度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1。由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為_(kāi)___________kb，判定目的基因中含有一個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用Ca2＋處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)(能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài))細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成________________過(guò)程。(4)不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在________μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是____________________________________________________________________________________________________________________________________。若要檢測(cè)整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測(cè)受體細(xì)胞的__________(填“DNA”或“RNA”)。答案(1)磷酸二酯鍵黏性末端和平末端(2)1.4pIJ702上的原有BglⅡ切割位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線(xiàn)段(3)轉(zhuǎn)化(4)5根據(jù)導(dǎo)入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn)，通過(guò)觀(guān)察菌落的顏色進(jìn)行挑選RNA13．(2021·江蘇，23)某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題：(1)目的基因的擴(kuò)增①提取真菌細(xì)胞__________________，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)一步獲得基因m片段。②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計(jì)引物P2時(shí)，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致__________________。③熱啟動(dòng)PCR可提高擴(kuò)增效率，方法之一是：先將除TaqDNA聚合酶以外的各成分混合后，加熱到80℃以上再混入酶，然后直接從94℃開(kāi)始PCR擴(kuò)增。下列敘述正確的有__________。A．TaqDNA聚合酶最適催化溫度范圍為50～60℃B．與常規(guī)PCR相比，熱啟動(dòng)PCR可減少反應(yīng)起始時(shí)引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物C．兩條子鏈的合成一定都是從5′端向3′端延伸D．PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了TaqDNA聚合酶的特異性(2)重組質(zhì)粒的構(gòu)建①將SmaⅠ切開(kāi)的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成黏性末端，然后降溫以促進(jìn)____________________，形成A－m結(jié)合體。將A－m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及________酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A－m仍能被SmaⅠ切開(kāi)，則SmaⅠ的酶切位點(diǎn)可能在_________________________________________________________________________________________。(3)融合蛋白的表達(dá)①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A－m，然后涂布于無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機(jī)理是______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。②若通過(guò)抗原－抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說(shuō)明_____________________，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可借助tag標(biāo)簽進(jìn)行蛋白M