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擴(kuò)展:細(xì)胞周期的測定及其同步化
一、細(xì)胞周期同步化:在同種細(xì)胞組成的一個細(xì)胞群體中,不同的細(xì)胞可能處于細(xì)胞周期的
不同時相,人們可以通過人工選擇或藥物誘導(dǎo)來使整個細(xì)胞群體處于細(xì)胞周期的同一時相。
DNA合成阻斷法:選用DNA合成抑制劑可逆地抑制S期細(xì)胞DNA合成,而不影響其他時
期的細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn),最終可將細(xì)胞群體阻斷在可/S期交界處。
A:處于對數(shù)生長期的細(xì)胞;B:第一次加入TdR,所有處于S期的細(xì)胞立即被抑制,其
他細(xì)胞運(yùn)行到G1/S交界處被抑制;C:將TdR洗脫,解除抑制,被抑制的細(xì)胞沿細(xì)胞
周期運(yùn)行;D在解除抑制的細(xì)胞到達(dá)G1期終點(diǎn)前,第二次加入TdR并繼續(xù)培養(yǎng),所有
的細(xì)胞被抑制在Gi/S交界處
TdR雙阻斷法:第一次阻斷時間應(yīng)大于G2+M+G1期時間的總和,釋放時間大于S期時間,
而小于G2+M+G1期時間,這樣才能使所有位于G1/S期的細(xì)胞通過S期,而又不使沿周期
前進(jìn)最快的細(xì)胞進(jìn)入下一個S期。
例題:(2017年?全國卷皿)利用一定方法使細(xì)胞群體處于細(xì)胞周期的同一階段,稱為細(xì)胞周
期同步化。以下是能夠?qū)崿F(xiàn)動物細(xì)胞周期同步化的三種方法。回答下列問題:
(1)DNA合成阻斷法:在細(xì)胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)液中添加適量的DNA合成可逆抑制
劑,處于期的細(xì)胞不受影響而繼續(xù)細(xì)胞周期的運(yùn)轉(zhuǎn),最終細(xì)胞會停滯在細(xì)胞周期的
期,以達(dá)到細(xì)胞周期同步化的目的。
(2)秋水仙素阻斷法:在細(xì)胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)液中添加適量的秋水仙素,秋水仙素
能夠抑制,使細(xì)胞周期被阻斷,即可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期同步化。經(jīng)秋水仙素處理的
細(xì)胞(填"會”或“不會”)被阻斷在間期。
(3)血清饑餓法:培養(yǎng)液中缺少血清可以使細(xì)胞周期停滯在間期,以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期同步化。
分裂間期的特點(diǎn)是(答出]點(diǎn)即可)。
1.(2016年?全國卷U)某種物質(zhì)可插入DNA分子兩條鏈的堿基對之間,使DNA雙鏈不能
解開。若在細(xì)胞正常生長的培養(yǎng)液中加入適量的該物質(zhì),下列相關(guān)敘述,錯誤的是()
A.隨后細(xì)胞中的DNA復(fù)制發(fā)生障礙B.隨后細(xì)胞中的RNA轉(zhuǎn)錄發(fā)生障礙
C.該物質(zhì)可將細(xì)胞周期阻斷在分裂中期D.可推測該物質(zhì)對癌細(xì)胞的增殖有抑制作用
2.(2018年4月?浙江卷)下表所示為實(shí)驗(yàn)測得離體培養(yǎng)的胡蘿卜根尖細(xì)胞的細(xì)胞周期各階
段時間。
周期GiSG2M合計
時間(h)1.32.72.90.67.5
下列敘述正確的是()
A.G1期的細(xì)胞中主要進(jìn)行有關(guān)蛋白質(zhì)的合成及核糖體的增生
B.用含DNA合成抑制劑的培養(yǎng)液培養(yǎng)1.3h后,細(xì)胞都被阻斷在S期
C.G2期的細(xì)胞中每個染色體含2條并列的染色單體,導(dǎo)致染色體數(shù)目加倍
D.胡蘿卜各組織細(xì)胞周期時間長短相同,但Gl、S、G2和M期的時間長短不同
3.下圖表示用胸背(TdR)雙阻斷法使細(xì)胞周期同步化,其中A表示正常的細(xì)胞周期,G1、
S、G2、M期依次分別為10h、7h、3.5h、L5h;B表示經(jīng)第一次阻斷,細(xì)胞都停留在S
期;C表示洗去TdR恢復(fù)正常的細(xì)胞周期;D表示經(jīng)第二次阻斷,細(xì)胞均停留在G1/S交界
處。下列說法正確的是()
A.實(shí)驗(yàn)中需要對細(xì)胞解離,漂洗,染色,制片,以便于顯微鏡下觀察
B.胸背(TdR)很可能是通過阻礙核糖體與mRNA結(jié)合發(fā)揮作用的
C.第二次阻斷應(yīng)該在第一次洗去TdR之后的7h到15h之間
D.若改用秋水仙素處理,則細(xì)胞會停留在G2/M交界處
4.在某高等動物細(xì)胞Z的細(xì)胞周期中,各時期經(jīng)歷時間依次為G1期8h,S期6h,G2期5
h,M期1h。某DNA合成抑制劑能特異地抑制DNA的合成,對S期以外的細(xì)胞無影響,
但可以阻止這些細(xì)胞進(jìn)入S期而停留在G1/S交界處,抑制劑解除后所有細(xì)胞能繼續(xù)進(jìn)行
細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)。將一定數(shù)量的Z細(xì)胞和一定劑量的抑制劑加入細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時
間,然后洗脫抑制劑,并更換培養(yǎng)液培養(yǎng)一段時間,第二次加入抑制劑培養(yǎng)一定時間后,
可使所有的細(xì)胞抑制在G1/S交界處,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期的同步化。下列敘述正確的是
()
A.實(shí)驗(yàn)開始時,培養(yǎng)液中的處于M期細(xì)胞占的比例可能為10%
B.第一次加入的抑制劑處理時間應(yīng)不小于13h
C.第一次加入的抑制劑處理應(yīng)使細(xì)胞處于G1/S交界處
D.第一次加入的抑制劑洗脫后,培養(yǎng)時間應(yīng)大于6h、小于14h時第二次加入抑制劑
5.細(xì)胞周期可分為間期和分裂期(M期),間期又分為G1期、S期和G2期。下表為體外培
養(yǎng)的某種細(xì)胞的細(xì)胞周期各階段時間(單位:小時),若在細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入過量的DNA
合成抑制劑,則下列說法正確的是()
細(xì)胞周期GiSGiM合計
時長(h)1073.51.522
A.M期細(xì)胞至少需要11.5小時后才能到達(dá)G1期和S期的交界處
B.G2期細(xì)胞至少需要11.5小時后才能到達(dá)G1期和S期的交界處
C.所有細(xì)胞都被抑制在G1期和S期的交界處都需15小時后
D.所有細(xì)胞都被抑制在G1期和S期的交界處都需22小時后
6.某DNA合成抑制劑能特異地抑制DNA的合成,而不影響處于其它時期的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞
周期運(yùn)轉(zhuǎn),抑制劑解除后細(xì)胞能繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)。先后兩次將一定劑量的抑制劑加入
細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)一定時間后,可使所有的細(xì)胞抑制在G1期和S期交界處狹窄的區(qū)段。下列
敘述錯誤的是()
A.第一次抑制劑處理時間不小于G2期、M期和G1期時間之和
B.第一次抑制劑處理使細(xì)胞均處于S期
C.第一次抑制劑去除后,細(xì)胞均從G2期開始進(jìn)行細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)
D.第一次抑制劑去除后,細(xì)胞到達(dá)G1期終點(diǎn)前第二次加入抑制劑
7.一個處于培養(yǎng)狀態(tài)下的動物細(xì)胞株,處于細(xì)胞周期各時期的均有若干,其數(shù)量與時長成正
比,已知細(xì)胞周期各階段的時長如表(單位:h):
Gi、Gt前期中期后期末期
57410.5]0.5
現(xiàn)對該細(xì)胞株依次進(jìn)行了下列操作:①加入DNA合成抑制劑;②維持12h;③去除DNA合
成抑制劑;④維持12h;⑤加入DNA合成抑制劑;②維持7h?下列敘述錯誤的是()
A.操作①只能使部分細(xì)胞停止分裂活動
B.操作④后不存在有染色單體的細(xì)胞
C.理論上操作②后處于S期(非Gi/S臨界處)的細(xì)胞占7/26
D.若操作⑥之后去除DNA合成抑制劑,各細(xì)胞的分裂進(jìn)程將“同步”
8.(2012年.上海高考)表中數(shù)據(jù)為實(shí)驗(yàn)測得體外培養(yǎng)的某種細(xì)胞的細(xì)胞周期各階段時間(單
位:h)=
周期GiSGM合計
時長/h1073.51.522
(1)若在上述細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入過量的DNA合成抑制劑,處于期的細(xì)胞立刻被
抑制,再培養(yǎng)小時,則其余細(xì)胞都將被抑制在G1/S期交界處。
(2)去除抑制劑,更換新鮮培養(yǎng)液,細(xì)胞將繼續(xù)沿細(xì)胞周期運(yùn)行,在所有細(xì)胞達(dá)到期
終點(diǎn)前,再加入DNA合成抑制劑,則全部細(xì)胞都被阻斷在G1/S期交界處,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期
同步化。
二'細(xì)胞周期長短測定:
標(biāo)記有絲分裂百分率法(PLM法):利用3H標(biāo)記的胸腺喀咤脫氧核昔(TdR)短暫培養(yǎng)細(xì)
胞一段時間后,凡是處于S期的細(xì)胞都會被標(biāo)記,而處于其它時期的細(xì)胞則不帶標(biāo)記。將
3H-TdR洗脫,置換無放射性的新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),被標(biāo)記的S期細(xì)胞將陸續(xù)進(jìn)入M期。
不同間隔時間定期取樣,利用放射自顯影技術(shù)顯示被標(biāo)記的M期細(xì)胞,在顯微鏡下觀察計
數(shù),計算其占M期細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(即PLM)。
TGI:G1期的持續(xù)時間
TGI:G2期的持續(xù)時間
Ts:S期的持續(xù)時間
TM:M期的持續(xù)時間
Tc:一個細(xì)胞周期的持續(xù)時
間
PLM:被標(biāo)記的M期細(xì)胞占
細(xì)胞周期各階段的時間與PLM的關(guān)系
①待測細(xì)胞經(jīng)3H-TdR標(biāo)記后,所有S期細(xì)胞均被標(biāo)記。
②S期細(xì)胞經(jīng)G2期才進(jìn)入M期,所以一段時間內(nèi)PLM-Oo
③最先進(jìn)入M期的標(biāo)記細(xì)胞是被標(biāo)記的S期最晚階段的細(xì)胞。所以,從更換培養(yǎng)液開始到
被標(biāo)記的M期細(xì)胞開始出現(xiàn),所經(jīng)歷的時間是G2期時間。
④從被標(biāo)記的M期細(xì)胞開始出現(xiàn),到其所占M期細(xì)胞總數(shù)的比例達(dá)到最大值時,所經(jīng)歷的
時間為M期時間。
⑤當(dāng)PLM開始下降時,表明處于S期最早階段的細(xì)胞也已進(jìn)入M期。從被標(biāo)記的M期細(xì)
胞開始出現(xiàn)到PLM開始下降時,所經(jīng)歷的時間為S期時間。
⑥從被標(biāo)記的M期細(xì)胞開始出現(xiàn)并逐漸消失,到被標(biāo)記的M期細(xì)胞再次出現(xiàn),所經(jīng)歷的時
間為一個細(xì)胞周期總時間Tc。根據(jù)TC=TGI+TS+TG2+TM,即可求出TGI。
9.研究人員為測定細(xì)胞周期時間長短,進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):用含3H-TdRGH標(biāo)記的胸腺喀咤脫
氧核甘)的原料培養(yǎng)某動物細(xì)胞,數(shù)分鐘至半小時后獲得細(xì)胞群體甲;隨后將3H-TdR洗脫,
轉(zhuǎn)換至不含3H-TdR培養(yǎng)液并繼續(xù)培養(yǎng)得到細(xì)胞群體乙,則細(xì)胞群體乙()
A.所有細(xì)胞均被3H-TdR標(biāo)記
B.最先進(jìn)入M期的標(biāo)記細(xì)胞是S期最晚期細(xì)胞
C.培養(yǎng)液中缺乏氨基酸供應(yīng),細(xì)胞停留在S期
D.培養(yǎng)液中加入秋水仙素,M期細(xì)胞比例減少
10.為測定某種細(xì)胞分裂的細(xì)胞周期,利用3H標(biāo)記的胸腺嚓咤脫氧核昔短暫培養(yǎng)該種細(xì)胞一
段時間后,處于S期的細(xì)胞都會被標(biāo)記。洗脫含放射性同位素的胸腺嚓咤脫氧核甘,再移至
普通培養(yǎng)基中培養(yǎng),換用無放射性的新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng),定期檢測。不同間隔時間取樣,找出
正處于分裂期細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。A:處于S期的細(xì)胞都被3H標(biāo)記;B:被標(biāo)記細(xì)胞最早進(jìn)入分
裂期;C:50%分裂期細(xì)胞被標(biāo)記且在增加;D:50%分裂期細(xì)胞被標(biāo)記且在減少;E:出現(xiàn)
被標(biāo)記細(xì)胞第二次進(jìn)入分裂期。下列推測中,說法正確的是()
取樣時期ABCDE
111II
經(jīng)歷時間/h033.510.525
A.實(shí)驗(yàn)開始時細(xì)胞核中被標(biāo)記的物質(zhì)是DNA,標(biāo)記的時期是M期
B.D點(diǎn)時標(biāo)記細(xì)胞比例減少,表明最慢的標(biāo)記細(xì)胞開始進(jìn)入G2期
C.該細(xì)胞的細(xì)胞周期中S期占3小時
D.分裂期經(jīng)歷時間約為lh
11.在某生物細(xì)胞培養(yǎng)液中加入用3H標(biāo)記的胸腺喀咤脫氧核昔酸,短暫培養(yǎng)一段時間后,洗
去3H標(biāo)記的胸腺嚏咤脫氧核甘酸。使在該段時間內(nèi)己處于DNA復(fù)制期不同階段的全部細(xì)
胞中DNA被3H標(biāo)記,而當(dāng)時處于其他時期的細(xì)胞則不帶標(biāo)記。不同時間取樣做細(xì)胞放射
性自顯影,找出正處于有絲分裂的分裂期(M期)細(xì)胞,計算其中帶3H標(biāo)記的細(xì)胞占有絲
分裂細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。得到下圖(圖1?圖4中橫軸為時間,縱軸為帶標(biāo)記細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的
百分?jǐn)?shù)):
(1)圖1中a點(diǎn)開始檢測到帶3H標(biāo)記分裂期細(xì)胞,則o~a為期。
(2)圖1中b點(diǎn)帶3H標(biāo)記分裂期細(xì)胞數(shù)開始達(dá)到最大值,則a~b段表示期。
(3)圖1中c點(diǎn)時,帶標(biāo)記的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)開始下降,則a~c段所經(jīng)歷的時間相當(dāng)于期
的時間。
(4)此后,帶標(biāo)記的分裂期細(xì)胞數(shù)逐漸減少,直到消失,到第二次出現(xiàn)帶有標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)
時為圖中e點(diǎn),則d~e段所經(jīng)歷的時間相當(dāng)于時期的時間,因此一個完整的細(xì)胞周
期的時間相當(dāng)于段經(jīng)歷的時間。
12.(2010年?江蘇高考)細(xì)胞周期包括分裂間期(分為G1期、S期和G2期)和分裂期(M
期)。下圖標(biāo)注了甲動物(體細(xì)胞染色體數(shù)為12)腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期各階段的時長及DNA
含量。請回答下列問題:
M
―4*------------7.9------------
細(xì)胞周期及時長(h)
(1)若用含放射性同位素的胸背(DNA復(fù)制的原料之一)短期培養(yǎng)甲動物腸上皮細(xì)胞后,
處于S期的細(xì)胞都會被標(biāo)記。洗脫含放射性同位素的胸背,換用無放射性的新鮮培養(yǎng)液培
養(yǎng),定期檢測。預(yù)計最快約—h后會檢測到被標(biāo)記的M期細(xì)胞。
(2)從被標(biāo)記的M期細(xì)胞開始出現(xiàn)到其所占M期細(xì)胞總數(shù)的比例達(dá)到最大值時,所經(jīng)歷
的時間為—期的時間,處于該期的一個細(xì)胞中染色體數(shù)目的變化情況是。
(3)若向甲動物腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中加入過量胸背,處于S期的細(xì)胞立刻被抑制,而處于
其他時期的細(xì)胞不受影響。預(yù)計加入過量胸背約h后,細(xì)胞都將停留在S期。
(4)乙動物腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期時長為24h,M期時長為1.9h。若要在顯微鏡下觀察細(xì)
胞有絲分裂過程中染色體形態(tài)的變化,選用(填“甲”或“乙”)動物腸上皮細(xì)胞更合適。
(5)在光學(xué)顯微鏡下觀察,同處于分裂末期的動物腸上皮細(xì)胞與洋蔥根尖細(xì)胞,形態(tài)上最
主要的區(qū)別是
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