基于qiaxcel艱難梭菌核糖體分型毒力譜鑒定

基于QIAxcel的艱難梭菌核糖體分型和毒力譜鑒定中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所醫(yī)院感染室

吳媛淋病奈瑟式菌生物特性CDI臨床表現(xiàn)易感人群革蘭陽性桿菌，專性厭氧，人獸共患；毛玻璃樣，馬糞味；芽胞，抵抗力強(qiáng)致病因子。無病癥攜帶者輕度腹瀉致命性偽膜性結(jié)腸炎（PMC），并發(fā)巨結(jié)腸和腸穿孔長期廣譜抗生素的使用者高齡，體弱者、免疫力低下者（腫瘤、HIV感染）服用質(zhì)子泵受體拮抗劑者長期住院治療等點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本艱難梭菌感染的世界分布全球艱難梭菌的爆發(fā)流行多數(shù)歐洲國家都報道核糖體

027型感染病例KuijperE.,BarbutF.,Eurosurveillance2008,volume13,July2008核糖體027型導(dǎo)致更高的病死率和死亡率歐洲KuijperE.,BarbutF.,Eurosurveillance2008,volume13,July2008截止2008年10月:美國有40個州報道核糖體027型病例美國加拿大

078型最初主要是從豬和牛分離到的；近來，成為引起人類CDI的重要型別，可產(chǎn)生嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)和高致死率，尤其是引起社區(qū)人群的感染動物源和人源的078型幾乎是一個clonal，提示它們有共同祖先；豬向人的傳播是有可能的；有報道發(fā)現(xiàn)零售豬肉有艱難梭菌，也間接證明了這一點(diǎn)Author,yearNo.isolates/No.samplesNo.hospitalsRegion

Time(y)A+B+A-B+A-B-cdt+*PCRribotypeDong,201360/NG1ShangHai1.5252871NGDong,201494/NG1ShangHai2.3633101NGFang,201482/4003cancerZheJiang0.882000001,017,017/1Lam,201210/321HongKong0.1NGNGNGNG002Huang,200974/5871ShangHai1.04313130SHIIHuang,201465/2061ShangHai1.0NGNGNGNGH,012,017Cheng,2011345/35281HCFHongKong1.0345000002,og39,012Cheng,199768/811ICUTaiWan0.468000NGHuang,200975/NG1cancerShangHai0.9502501017,012,AZhu,201457/NG1ZhengJiangNG381450NGHuang,200856/5871ShangHai1.0NGNGNGNGSHII,014Pete,201321/701ChangSha1.09102UN017,012,046#Cheng,200912/1121Beijing0.65340ZR1Chia,2013110/NG1Taiwan6.0704004NGWei,201357/1496Taiwan0.729NGNGNG10,106,45Wang,201431/1241ICUChengdu0.724702001,046,012C.difficile-AssociatedDiseasePressure*

andTransmissionUnitAFewerpatientswithactiveCDI=lowerriskofacquiringCDIUnitBMorepatientswithactiveCDI=higherriskofacquiringCDICDADpressure=1×daysinunitCDADpressure=5×daysinunit*DubberkeER,etal.ClinInfectDis.2007;45:1543-1549.點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本艱難梭菌流行規(guī)律變遷艱難梭菌動物、食品感染ChangingepidemiologyCommunity-associatedC.difficileinfection(CA-CDI)andhospital-associatedC.difficileinfection(HA-CDI)casesreportedtoHospitalInfectionSurveillanceWesternAustralia(HISWA),2010to2012.

Annualincidenceper100,000populationofC.difficile-associateddiarrhealinQuebecbetween1991to2003(Pepin,Valiquetteetal.2004)C.difficileinretailfoodsIran:2%(13/660)ofrawmeatCanada:12.8%(26/203)ofchickenmeat20%(12/60)ofgroundbeefandvealmeat4.8%(5/119)ofseafoodandfish4.5%(5/111)ofvegetablesTexes:9.5%(23/243)ofporksausagesArizona:42%(74/176)ofsausage,groundbeefandporkNetherlands:1.6%(8/500)ofretailmeatsCostaRica:2%(4/200)ofretailmeatsSwitzerland:0%(0/46)ofmincedmeatFrance:2.9%(3/104)ofready-to-eatsaladsandvegetables1.9%2/105groundbeefSweden:2.4%(2/82)ofgroundbeefAustralia:Wedon’tknow.艱難梭菌感染潛在的傳播途徑?AdoptedfromCentersforDiseaseControlandPrevention(2013).AntibioticResistanceThreatsintheUnitedStates,2013,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices.?主要致病因子（大分子梭菌毒素）A毒素：TcdA(8.1Kb/308kDa)腸毒素：動物實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致大鼠腸道炎癥，體液分泌B毒素：TcdB(7.1Kb/270kDa)細(xì)胞毒素：細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)為細(xì)胞毒性tcdC:負(fù)向調(diào)控tcdD:正向調(diào)控tcdE:?毒素分泌有關(guān)非產(chǎn)毒株：無PaLoc區(qū)(不致病)CdtLoc寡聚體化七聚體heptamers點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本艱難梭菌常用分型方法核糖體分型

艱難梭菌分子分型ITS1ITS2核糖體分型

艱難梭菌分子分型毒素分型

艱難梭菌分子分型27型，I-XXVII27型，I-XXVII典型典型*脈沖場電泳PFGE:NAP1和NAP2*限制性酶分析REA:至少100組和大量亞型BI/NAP1/027,toxinotypeIII,clade2,ST1,CDT+，完整基因結(jié)構(gòu)BK/NAP2/078,toxinotypeV，clade5,ST11

艱難梭菌分子分型CladeC-IClade4PaLoc:ST37(017,A-B+)54321PaLocabsent(non-toxigenic))Clade1PaLoc:ST3(001)Clade2PaLoc:ST1(027)Clade3PaLoc:ST5(023)Clade4PaLoc:ST37(017,A-B+)Clade5PaLoc:ST11(078)Dingleetal.2013GenomeBiolEvol6:36-52.艱難梭菌分子分型-MLSTHeetal.NatureGenetics2013;45:109-13.基于全基因組分型，傳播流行規(guī)律研究Heetal.NatureGenetics2013;45:109-13.基于全基因組的分子流行病學(xué)研究點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本臨床常用厭氧菌培養(yǎng)方法簡易厭氧袋培養(yǎng)法厭氧罐（盒）培養(yǎng)法厭氧箱培養(yǎng)法Oxyrase酶平皿培養(yǎng)法氣體噴射培養(yǎng)法適于基層簡便培養(yǎng)法液體培養(yǎng)法高層瓊脂法分離中度敏感或耐氧厭氧菌點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本分離培養(yǎng)和鑒定糞-細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)CTA檢測毒素B生化反應(yīng)厭氧瓊脂+選擇性培養(yǎng)基PCR紫外燈下發(fā)黃綠色熒光API20A酶聯(lián)免疫EIA檢測毒素A、BtcdB16SrRNA所有艱難梭菌表面均表達(dá)抗原谷氨酸脫氫酶GDH，商品化盒，但不能區(qū)分有/無毒株。MeridianPremierC.difficileToxinA+BELISA,TechLabToxA/BQuikChek,TechLabToxinA/BII,ImmunoCardToxinA&BBDGeneOhmreal-timePCRtest和Cepheid公司的GeneXpertC.difficile快速檢測方法商業(yè)化應(yīng)用的CTA（WampoleC.difficileToxinBtest）我們的工作建立艱難梭菌核糖體分型庫開展全基因組的分子流行病學(xué)建立艱難梭菌毒力譜庫研究菌種遺傳變異的特征規(guī)律科室簡介承擔(dān)課題文章發(fā)表學(xué)生培養(yǎng)承擔(dān)多項“十一五”“十二五”國家重大專項,1項國家科技支撐,3項國家自然科學(xué)基金,2項國際合作項目,2項中國CDC基金；累計培養(yǎng)研究生10名，其中在讀研究生4名；截止2015年11月，累計發(fā)表文章20余篇，其中SCI收錄7篇；

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