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34RapiddetectionofPseudomonasaeruginosainpackageddrinkingwater—ColloidalgoldimmunochromatographicaI.本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起1包裝飲用水中銅綠假單胞菌快速檢測膠體金免疫層析法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB8538食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)飲用天然礦樣品中的銅綠假單胞菌經(jīng)濾膜過濾富集，超聲處理提取DNA，以此為模板，設(shè)計(jì)經(jīng)異硫（FITC）和生物素（biotin）修飾的上下游引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）得到擴(kuò)增導(dǎo)致T線顏色加深，通過T線與控制線（C線）顏色比較，5.3三羥甲基氨基甲烷（Tris）。5.5乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na?2H2O）。5.6氫氧化鈉溶液（NaOH）。2典型菌落，接種到營養(yǎng)肉湯（5.13）中，37℃±1℃培養(yǎng)18h～20h，至活菌數(shù)達(dá)到1×1085’-FITC-ACCGCCGTCAGAATCAGTTT-3’。6.2過濾裝置。6.3微量移液器。6.4旋渦混合器。6.7無菌濾膜：直徑47mm，微孔徑為0.45μm。6.9離心機(jī)：離心轉(zhuǎn)速≥5000rpm。將250mL待檢水樣通過孔徑0.45μm的無菌濾膜（6.7）過濾，濾膜備用。以無菌水作為空白對7.2DNA提取將7.1得到的濾膜置于無菌瓶底部，加入1mL的TE緩沖溶液（5.9）重懸，超聲后將瓶中溶液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，5000rpm室溫離心5m7.3PCR擴(kuò)增μL，ddH2O（5.11）8.9μL。混勻后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增7,4測定3取7.3得到的擴(kuò)增產(chǎn)物2μL，滴加在膠體金免疫層析檢測試紙條（6.11）上，再滴加48μL上樣緩沖液（5.12）于樣品墊上，靜置3min，觀察T線和C線顯色情8.2陰性8.3陽性8.4參比標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果為陽性時(shí)可采用參比標(biāo)準(zhǔn)GB8539性能指標(biāo)49.3特異性9.4假陰性率9.5假陽性率9.6定性方法性能指標(biāo)計(jì)算方法5N12N21N22N2.=N21+N22N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異(х2）x2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21p-=N22
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