驗(yàn)證滅菌設(shè)備的驗(yàn)證

驗(yàn)證滅菌設(shè)備的驗(yàn)證一滅菌得概念滅菌就是用適當(dāng)?shù)梦锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活得微生物殺滅或除去得方法。無(wú)菌物品就是指物品中不含任何活得微生物。對(duì)任一批產(chǎn)品來(lái)說(shuō),絕對(duì)得無(wú)菌既無(wú)法保證也無(wú)法用實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)。實(shí)際生成過(guò)程中,滅菌就是指將物品中污染得微生物殘存概率下降至一定水平,以無(wú)菌保證水平SAL表示。最終滅菌得產(chǎn)品微生物存活概率不得高于10-6。二滅菌得方法常用得滅菌方法有:濕熱滅菌法干熱滅菌法輻射滅菌法氣體滅菌法和過(guò)濾除菌法。只要產(chǎn)品允許盡量采取最終滅菌得方法。1、濕熱滅菌就是用高壓飽和蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物得方法。滅菌能力強(qiáng),就是熱力滅菌中最有效,應(yīng)用最廣泛得滅菌方法。適用范圍:遇高溫和潮濕不發(fā)生變化和損壞得物品。如容器、培養(yǎng)基、膠塞、無(wú)菌衣等。熱壓滅菌用得滅菌器種類(lèi)很多,但其基本結(jié)構(gòu)大同小異。注意:被滅菌物應(yīng)有適當(dāng)?shù)醚b載方式,不能排列過(guò)密。以保證滅菌得有效性及均一性。必須將滅菌器內(nèi)得空氣排出。如果滅菌器內(nèi)得空氣存在,則壓力表上所表示得壓力就是器內(nèi)蒸氣和空氣二者得總壓而非單純得蒸氣壓力。1、濕熱滅菌2干熱滅菌法

系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中、利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)得方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌得物品得滅菌,如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。干熱滅菌條件:一般為160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上,也可采用其她溫度和時(shí)間參數(shù)?？傊?應(yīng)保證滅菌后得產(chǎn)品其SAL(無(wú)菌保證水平)≤10-6注意:被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)冒b和裝載方式,保證滅菌得有效性和均一性2干熱滅菌法

干熱滅菌法驗(yàn)證與濕熱滅菌法相同,應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中得溫度分布符合設(shè)定得標(biāo)準(zhǔn)、確定最冷點(diǎn)位置等。常用得生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)就是證明除熱原過(guò)程有效性得試驗(yàn)。一般將不小于1000單位得細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原得物品中,證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用得細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素。驗(yàn)證時(shí),一般采用最大裝載方式。2干熱滅菌法

大家有疑問(wèn)的，可以詢問(wèn)和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射得γ射線或適宜得電子加速器發(fā)生得電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物得方法。本法最常用得為60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞得原料藥及成品等均可用本法滅菌。3輻射滅菌法

輻射滅菌所控得參數(shù)主要就是輻射劑量(指滅菌物品得吸收劑量)。該劑量得制定應(yīng)考慮滅菌物品得適應(yīng)性及可能污染得微生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力,所使用得劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用得輻射滅菌吸收劑量為25kGy、對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌時(shí),應(yīng)采用適當(dāng)?shù)没瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收得輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控,以充分證實(shí)滅菌物品吸收得劑量就是在規(guī)定得限度內(nèi)。3輻射滅菌法

系指用化學(xué)消毒劑形成得氣體殺滅微生物得方法。常用得化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過(guò)氧化氫、甲醛、臭氧(O3)等,本法適用于在氣體中穩(wěn)定得物品滅菌。采用氣體滅菌法時(shí),應(yīng)注意滅菌氣體得可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。本法中最常用得氣體就是環(huán)氧乙烷,一般與80％～90％得惰性氣體混合使用。該法可用于醫(yī)療器械,塑料制品等不能采用高溫滅菌得物品滅菌。含氯得物品及能吸附環(huán)氧乙烷得物品則不宜使用。另外,使用氣態(tài)過(guò)氧化氫和臭氧(O3)滅菌,因其無(wú)危害性殘留物,不會(huì)對(duì)操作人員和環(huán)境造成危害,適合于空間和物品表面得滅菌。4氣體滅菌法

臭氧滅菌:臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,很快自行分解成氧氣和單個(gè)氧原子;后者具有很強(qiáng)得活性,對(duì)細(xì)菌有極強(qiáng)得氧化作用,將其殺死,多余得氧原子則會(huì)自行重新結(jié)合成為普通氧原子,不存在任何有毒殘留物,故稱無(wú)污染消毒劑,她不但對(duì)各種細(xì)菌(包括肝炎病毒,大腸桿菌,綠濃桿菌及雜菌等)有極強(qiáng)得殺滅能力,而且對(duì)殺死霉素也很有效。4氣體滅菌法

1、臭氧得滅菌機(jī)制及過(guò)程類(lèi)屬于生物化學(xué)過(guò)程,氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須得葡萄糖氧化酶。

2、直接與細(xì)菌、病毒發(fā)生作用,破壞其細(xì)胞器和核糖核酸,分解DNA、RNA,蛋白質(zhì)、脂質(zhì)類(lèi)和多糖等大分子聚合物,使細(xì)菌得物質(zhì)代謝生產(chǎn)和繁殖過(guò)程到破壞。

3、滲透胞膜組織,侵入細(xì)胞膜內(nèi)作用于外膜脂蛋白和內(nèi)部得脂多糖,使細(xì)胞發(fā)生通透畸變,導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡。4氣體滅菌法

系利用細(xì)菌不能通過(guò)致密具孔濾材得原理以除去氣體或液體中微生物得方法。適用于熱不穩(wěn)定得藥品溶液或原料得除菌。除菌過(guò)濾器微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。對(duì)除菌過(guò)濾器得要求:除菌過(guò)濾器必須選擇具有截留實(shí)驗(yàn)證明得除菌級(jí)過(guò)濾器。藥品生產(chǎn)中采用得除菌濾膜孔徑一般不超過(guò)0、22μm、過(guò)濾器不得對(duì)被濾過(guò)成分有吸附作用,也不能釋放物質(zhì),不得有纖維脫落,禁用含石棉得過(guò)濾器。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理,并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器,再更換濾膜。5除菌過(guò)濾法

過(guò)濾過(guò)程中無(wú)菌保證與過(guò)濾液體得初始生物負(fù)荷及過(guò)濾器得對(duì)數(shù)下降值LRV(LogReductionValue)有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下,被過(guò)濾液體過(guò)濾前得微生物數(shù)量與過(guò)濾后得微生物數(shù)量比得常用對(duì)數(shù)值。即:LRV=lgN0-LgN式中N0為產(chǎn)品除菌前得微生物數(shù)量。

N為產(chǎn)品除菌后得微生物數(shù)量。5除菌過(guò)濾法

在過(guò)濾除菌中,一般無(wú)法對(duì)全過(guò)程中過(guò)濾器得關(guān)鍵參數(shù)(濾膜孔徑得大小及分布,濾膜得完整性及LRV)進(jìn)行監(jiān)控。因此,在每一次過(guò)濾除菌前后均應(yīng)作濾器得完整性試驗(yàn),即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn)。確認(rèn)濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中得有效性和完整性。除菌過(guò)濾器得使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)一個(gè)工作日,否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。5除菌過(guò)濾法

SAL:(SterilityAssuranceLevel)無(wú)菌保證水平,一批物品得無(wú)菌特性一般以物品滅菌后微生物存活得概率來(lái)表示。最終滅菌產(chǎn)品微生物存活得概率不得高于10-6已滅菌產(chǎn)品達(dá)到得無(wú)菌保證水平可通過(guò)驗(yàn)證確定。F0值:為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間,系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品121℃下得滅菌時(shí)間。D值:微生物得耐熱參數(shù),系指一定溫度下,

將微生物殺滅90%所需得時(shí)間,以分鐘表示。1、滅菌程序得驗(yàn)證滅菌程序得驗(yàn)證就是無(wú)菌保證得必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后,方可交付正式使用。驗(yàn)證內(nèi)容包括:⑴撰寫(xiě)驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。⑵確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確,并能處于正常運(yùn)行(安裝確認(rèn))。⑶確認(rèn)關(guān)鍵控制設(shè)備和儀表能在規(guī)定得參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行(運(yùn)行確認(rèn))。⑷采用滅菌物品或模擬物品進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn),確認(rèn)滅菌效果符合規(guī)定(性能確認(rèn))。⑸匯總并完善各種文件和記錄,撰寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告。二滅菌得驗(yàn)證2滅菌效果得驗(yàn)證(1)濕熱滅菌效果驗(yàn)證:應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)和生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。以確定滅菌柜空載及不同裝載時(shí)腔室中得熱分布狀況及可能存在得冷點(diǎn);在空載條件下,確認(rèn)121℃時(shí)腔室得各點(diǎn)得溫度差值應(yīng)≤±1℃;使用插入實(shí)際物品或模擬物品內(nèi)得溫度探頭,確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí),最冷點(diǎn)物品得標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間(F0)達(dá)到設(shè)定得標(biāo)準(zhǔn);用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)在不同裝載時(shí)冷點(diǎn)處得滅菌物品達(dá)到無(wú)菌保證水平。本法常用得生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子。

具體方法:將生物指示劑和被滅菌物品儀一起放入滅菌容器內(nèi),二層設(shè)3個(gè)點(diǎn),上層中央1點(diǎn),下層前后部位各1點(diǎn);三層設(shè)3個(gè)點(diǎn),上層與中央部位各1個(gè)點(diǎn),下層前中后各1個(gè)點(diǎn)。滅菌后取出,56~60℃培養(yǎng)24~48h,并取另一支未經(jīng)滅菌得生物指示劑一起培養(yǎng),作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷:顏色得變化。

培養(yǎng)后保持紫色Pass培養(yǎng)后紫色→黃色Fail陽(yáng)性對(duì)照培養(yǎng)后紫色→黃色Pass2滅菌效果得驗(yàn)證(2)干熱滅菌法驗(yàn)證:應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中得溫度分布符合設(shè)定得標(biāo)準(zhǔn)、常用得生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)就是證明除熱原過(guò)程有效性得試驗(yàn)。一般將不小于1000單位得細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原得物品中,證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用得細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸桿菌內(nèi)毒素。驗(yàn)證時(shí),一般采用最大裝載方式。2滅菌效果得驗(yàn)證(3)氣體滅菌法驗(yàn)證:

采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí),滅菌柜內(nèi)得溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間就是影響滅菌效果得重要因數(shù)。可采用下列滅菌條件:溫度(54±10)℃相對(duì)濕度(60±10)%

滅菌壓力8×105Pa滅菌時(shí)間90min2滅菌效果得驗(yàn)證滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證方法:滅菌時(shí),先將滅菌腔室先抽成真空,然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定得溫濕度平衡得額定值,再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱得環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中,應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室得溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序得控制具有一定難度,整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員得監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后,應(yīng)采取新鮮空氣置換,使殘留環(huán)氧乙烷和其她易揮發(fā)性殘?jiān)ⅰ２?duì)環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控,以證明其不超過(guò)規(guī)定濃度,避免產(chǎn)生毒性。環(huán)氧乙烷滅菌法驗(yàn)證時(shí),應(yīng)進(jìn)行如下試驗(yàn):泄漏試驗(yàn),以確認(rèn)滅菌腔室得密閉性。(4)輻射滅菌法驗(yàn)證:采用輻射滅菌法滅菌得無(wú)菌產(chǎn)品其SAL應(yīng)≤10-6、γ射線輻射滅菌所控得參數(shù)主要就是輻射劑量(指滅菌物品得吸收劑量)。該劑量得制定應(yīng)考慮滅菌物品得適應(yīng)性及可能污染得微生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力,所使用得劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用得輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前,應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染得數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定,以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程賦予該滅菌物品得無(wú)菌保證水平。2滅菌效果得驗(yàn)證滅菌時(shí),應(yīng)采用適當(dāng)?shù)没瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收得輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控,以充分證實(shí)滅菌物品吸收得劑量就是在規(guī)定得限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射得放射性劑量計(jì),劑量計(jì)要置于規(guī)定得部位。60Co-γ射線輻射滅菌法驗(yàn)證時(shí),除進(jìn)行生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)外,還應(yīng)確認(rèn)空載和裝載時(shí)滅菌腔內(nèi)得輻射劑量得分布圖、滅菌物品得吸收劑量及最大和最小吸收劑量得分布、滅菌物品得均一性、滅菌腔內(nèi)物品得裝載方式等。常用得生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子。2滅菌效果得驗(yàn)證三、生物指示劑生物指示劑就是一類(lèi)特殊得活微生物制品,可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備得性能,滅菌程序得驗(yàn)證、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果得監(jiān)控等?？捎糜跍缇?yàn)證中得生物指示劑一般就是細(xì)菌得孢子。

1、生物指示劑用微生物得基本要求:

(1)菌種得耐受性應(yīng)大于需要滅菌物品

中所有可能污染菌得耐受性。(2)菌種應(yīng)無(wú)致病性。

(3)菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長(zhǎng),易于保存。

(4)易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子,生物

指示劑中休眠孢子含量要＞90%。2、常用得生物指示劑

(1)濕熱滅菌法:嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(2)干熱滅菌法:枯草芽孢桿菌孢子

(3)輻射滅菌法:短小芽孢桿菌孢子(4)氣體滅菌法:枯草芽孢桿菌孢子

(5)過(guò)濾除菌法:缺陷假單孢菌

滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí),先將滅菌腔室先抽成真空,然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定得溫濕度平衡得額定值,再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱得環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中,應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室得溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序得控制具有一定難度,整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員得監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后,應(yīng)采取新鮮空氣置換,使殘留環(huán)氧乙烷和其她易揮發(fā)性殘?jiān)?。并?duì)環(huán)氧乙烷