高中生物：2023屆高考生物一輪復(fù)習(xí)基因工程 專練

基因工程

A高考原題

【2022全國(guó)乙卷，3811.新冠疫情出現(xiàn)后，病毒核酸檢測(cè)和疫苗接種在疫情防控中發(fā)

揮了重要作用?；卮鹣铝袉栴}。

（1）新冠病毒是一種RNA病毒，檢測(cè)新冠病毒RNA（核酸檢測(cè)）可以采取RT-PCR

法。這種方法的基本原理是先以病毒RNA為模板合成cDNA,這一過程需要的酶是

，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷被檢測(cè)者是否

感染新冠病毒。

（2）為了確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒

RNA中的來進(jìn)行。PCR過程每次循環(huán)分為3步，其中溫度最低的一步是

（3）某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)（檢測(cè)體內(nèi)是否有新冠病毒抗體），

若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說明（答出1種情況即可）；

若核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說明o

（4）常見的病毒疫苗有滅活疫苗、蛋白疫苗和重組疫苗等。已知某種病毒的特異性蛋

白S（具有抗原性）的編碼序列（目的基因）。為了制備蛋白疫苗，可以通過基因工程技術(shù)

獲得大量蛋白So基因工程的基本操作流程是0

【2021全國(guó)乙卷，3812.用DNA重組技術(shù)可以賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符

合人類需要的生物產(chǎn)品，在此過程中需要使用多種工具酶，其中4種限制性核酸內(nèi)切

酶的切割位點(diǎn)如圖所示。

I：II

GAATTCCCCGGGCTGCAGGATATC

CTTAAGGGGCCCGACGTCCTATAG

1tl1

限制醉：以'oRlSma1Pst1EcoRV

回答下列問題：

（1）常用的DNA連接酶有E，co〃DNA連接酶和T4DNA連接酶。上圖中酶切

割后的DNA片段可以用E?co〃DNA連接酶連接。上圖中酶切割后的DNA片段

可以用T4DNA連接酶連接。

（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是。

（3）DNA重組技術(shù)中所用的質(zhì)粒載體具有一些特征。如質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原

點(diǎn)，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能:質(zhì)粒DNA分子上有,便于外源DNA

插入；質(zhì)粒DNA分子上有標(biāo)記基因（如某種抗生素抗性基因），利用抗生素可篩選

出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞，方法是。

（4）表達(dá)載體含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指。

（5）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞除花粉管通道法外還有法。

【2021全國(guó)甲卷，3813.PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測(cè)。為檢測(cè)病人是否感染

了某種病原菌，醫(yī)生進(jìn)行了相關(guān)操作：①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果；②從病人組織樣本中

提取DNA；③利用PCR擴(kuò)增DNA片段；④采集病人組織樣本?；卮鹣铝袉栴}：

（1）若要得到正確的檢測(cè)結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是（用數(shù)字序號(hào)表

示）。

（2）操作③中使用的酶是。PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、

_____三步，其中復(fù)性的結(jié)果是o

（3）為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與____特異性結(jié)合。

（4）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指____o該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診

斷等方面。

＞考情分析

本專題以填空題的形式出現(xiàn)，屬于高頻考點(diǎn)。本專題以基因工程實(shí)例為情境，考查基

因工程的工具與操作程序，涉及PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)。

＞變式訓(xùn)練

4.已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)（P）,該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組

成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，

改變后的蛋白質(zhì)（Pi）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性?；卮鹣铝袉?/p>

題：

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)（填“必須”或“不必”）知道目的基因的

全部序列。在PCR體系中除了模板、原料外，還應(yīng)加入o

（2）基因工程和蛋白質(zhì)工程相比，基因工程在原則上只能生產(chǎn)的蛋白質(zhì)，不一

定符合的需求。蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作

為基礎(chǔ)，通過或，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足

人類生產(chǎn)和生活的需求。

（3）蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā),

通過_____和,進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列（基因），最終獲得所需要的

蛋白質(zhì)。

（4）經(jīng)改造后的細(xì)胞，若想工業(yè)化大量制備蛋白質(zhì)Pi,可利用和技術(shù)將

改造細(xì)胞轉(zhuǎn)化為既可產(chǎn)生Pi又能無(wú)限增殖的細(xì)胞，最后從培養(yǎng)液中獲得目的蛋白質(zhì)。

（5）對(duì)天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，是直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作，還是對(duì)基因進(jìn)行操作？

-原因是（答出1點(diǎn)即可）。

5.絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）的基因，可以合成一種抗TMV蛋白，

使其葉片對(duì)TMV具有抗感染特性。煙草是具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的雙子葉植物，TMV的

感染會(huì)導(dǎo)致煙草大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主

要流程如圖所示。

重組Ti質(zhì)粒

RNA-DNA目的基因構(gòu)建

導(dǎo)人④

在含有卡那霉素

轉(zhuǎn)基因--再生植株?的培養(yǎng)基上培養(yǎng)

抗TMV煙草⑥冉生植株⑤煙草體細(xì)胞

（1）科學(xué)家從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA,然后合成目的基因。圖中

①過程表示o

（2）④過程表示將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞，其常用方法是o

（3）由圖分析，在③過程構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是____基因，它

的作用是-

（4）⑥過程還需要進(jìn)行的基因工程操作步驟是,在個(gè)體水平上檢驗(yàn)獲得的煙草

能否抗TMV的方法是o

6.變異鏈球菌在牙面上的粘附、集聚是晶齒發(fā)生的先決條件。轉(zhuǎn)基因防制疫苗是通過

基因工程技術(shù)，將變異鏈球菌中與齦齒發(fā)生密切相關(guān)的抗原基因（PAcA基因）轉(zhuǎn)入

植物細(xì)胞中，利用植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)的基因工程疫苗。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：

（1）轉(zhuǎn)基因植物的制備

單一使用PAcA基因，機(jī)體免疫應(yīng)答不理想，霍亂毒素中有增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的氨基

酸序列（CTB）,將CTB基因與PAcA基因連接成嵌合（PAcA-CTB）基因，作為

與Ti質(zhì)粒的T-DNA拼接，構(gòu)建表達(dá)載體，此過程需要的酶是

，用法導(dǎo)入離體的黃瓜葉肉細(xì)胞中，經(jīng)植物組織培

養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株。相關(guān)基因能否在黃瓜細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是O此基

因工程疫苗起抗原作用的是（填“基因”或“蛋白質(zhì)”）。

（2）轉(zhuǎn)基因植株目的基因的PCR鑒定與檢測(cè)

已知PAcA-CTB基因部分序列如下（左側(cè)為基因的首端）：

5'……CCGTGT……ATGCCT.......3'

3'.........GGCACA........TACGGA……5'

12345678

根據(jù)上述序列，選擇引物（填字母）進(jìn)行PCR。

A.引物：5'—GGCACA-3'B.弓|物：5'—AGGCAT—3'

C.弓I物：5'—CCGUGU—3'D.引物：5'—CCGTGT—3'

反應(yīng)結(jié)束后，電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，結(jié)果如圖所示（1來自未轉(zhuǎn)化植株，2是含PAcA-

CTB基因的質(zhì)粒，3~8來自轉(zhuǎn)基因植物），從結(jié)果可以看出，號(hào)植物中含有

PAcA-CTB基因。若獲得的轉(zhuǎn)基因植物沒有產(chǎn)生相應(yīng)的基因工程疫苗，根據(jù)中心法則

分析，其可能的原因是o

7.口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種動(dòng)物傳染病，目前常用接種弱毒疫苗的方法預(yù)

防。疫苗的主要成分是該病毒的一種結(jié)構(gòu)蛋白VP1,科學(xué)家嘗試?yán)棉D(zhuǎn)基因番茄來生

產(chǎn)口蹄疫疫苗。請(qǐng)回答下列問題：

（1）如圖是VP1基因、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖，若用其構(gòu)建具有VP1基因的基因

表達(dá)載體，還需要在質(zhì)粒中插入，該結(jié)構(gòu)的作用是o

（2）口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA,則要獲得可重組到質(zhì)粒上的VP1,基因必須用

到酶。要獲得大量VP1基因，可利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增時(shí)需要設(shè)計(jì)

種引物。PCR技術(shù)中所用的DNA聚合酶與生物體內(nèi)的DNA聚合酶的區(qū)別是

（3）通常用BamHI、Hz力dill兩種限制酶切割VP1基因和Ti質(zhì)粒的目的是

o要篩選出含有基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌，首先需要在含的培養(yǎng)

基上進(jìn)行。

（4）VP1基因應(yīng)插到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過轉(zhuǎn)化作用進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合

到_______上，使VP1基因能夠穩(wěn)定存在并發(fā)揮作用。

（5）獲得表達(dá)VP1蛋白的番茄植株以后，要進(jìn)行免疫效力的測(cè)定，具體方法：將從

轉(zhuǎn)基因番茄葉片中提取的VP1蛋白注射到一定數(shù)量的豚鼠體內(nèi)，每半個(gè)月注射一次，

注射三次后檢測(cè)豚鼠血液中數(shù)量，為了使結(jié)果可信，應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照組，注射

8.1型糖尿病是由于胰島素及其前體等自身抗原物質(zhì)被T細(xì)胞識(shí)別，產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)

導(dǎo)致胰島受損，進(jìn)而導(dǎo)致胰島素分泌不足甚至不分泌而致病。我國(guó)科研人員已通過

“家蠶生物反應(yīng)器”生產(chǎn)出CTR山sB（霍亂毒素B亞基-人胰島素B鏈）融合蛋白，

這是一種能口服的治療I型糖尿病的藥物?；卮鹣嚓P(guān)問題：

（1）臨床上，可通過血液中的抗胰島素及其前體等自身抗原的作為檢

測(cè)指標(biāo)來確診I型糖尿病，目前在餐（填"前”或“后”）注射胰島

素仍是治療I型糖尿病的最重要方法。

（2）研究人員從中獲取i〃sB基因與基因。采用PCR技術(shù)可擴(kuò)

增目的基因，PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水、

、模板DNA、與CTRz欣B基因特異結(jié)合的DNA引物和

。PCR擴(kuò)增胰島素B鏈基因時(shí)，需要種引物。

（3）研究人員將這兩種基因融合，再將CTbi/isB融合基因轉(zhuǎn)入家蠶桿狀病毒載體，

將重組桿狀病毒植入家蠶蛹體內(nèi)，所得表達(dá)產(chǎn)物生物活性與天然產(chǎn)物接近。為使CTR

山sB基因在反應(yīng)體系中高效表達(dá)，需要把山sB基因正確插入表達(dá)載體（家蠶桿狀

病毒）的和之間。

（4）若將CTB-沁B基因?qū)爰倚Q_____________,理論上有望培育出可生產(chǎn)CTB-

山sB的轉(zhuǎn)基因家蠶。在培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，通常會(huì)將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)

器中。這一措施的作用原理是玻璃珠，多孔o(hù)

答案以及解析

1.（1）答案：逆轉(zhuǎn)錄酶（或反轉(zhuǎn)錄酶）

解析：以RNA為模板合成cDNA的過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶起催化作用。

（2）答案：一段特有的核甘酸序列；復(fù)性

解析：在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，為了確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，應(yīng)依據(jù)新冠病毒

RNA中一段特有的核甘酸序列來進(jìn)行。PCR過程每次循環(huán)分為3步，變性（溫度為

90C以上）、復(fù)性（溫度為50℃左右）、延伸（溫度為72c左右）,故其中溫度最低

的一步是復(fù)性。

（3）答案：該人近期可能感染過新冠病毒，經(jīng)自身免疫系統(tǒng)的作用，體內(nèi)病毒被消

滅，但體內(nèi)產(chǎn)生的抗體尚未消失；該人感染了新冠病毒，且機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了相應(yīng)

抗體，但還未將病毒完全消滅

解析：在對(duì)某人同時(shí)進(jìn)行核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)時(shí)，若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)

結(jié)果為陽(yáng)性，說明該人近期可能感染過新冠病毒，經(jīng)自身免疫系統(tǒng)的作用，體內(nèi)病毒

被消滅，但體內(nèi)產(chǎn)生的抗體尚未消失。若核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說明該

人感染了新冠病毒，且機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了相應(yīng)抗體，但還未將病毒完全消滅。

（4）答案：目的基因的獲取一基因表達(dá)載體的構(gòu)建f將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞f目的

基因的檢測(cè)與鑒定

解析：基因工程的基本流程是：目的基因的獲取一基因表達(dá)載體的構(gòu)建f將目的基因

導(dǎo)入受體細(xì)胞一目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2.答案：（1）EcoRI、PsfI；EcoRI、SmaI、PsfI、EcoRV

（2）磷酸二酯鍵

（3）自我復(fù)制；限制酶切割位點(diǎn)；將待篩選的宿主細(xì)胞接種到含該抗生素的培養(yǎng)基

中，能夠生長(zhǎng)的是含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞

（4）RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA片段

（5）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

解析：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)。

（1）題圖中EcoRI和PsrI切害U后得到的DNA片段屬于黏性末端，SmaI和EcoR

V切割后得到的DNA片段屬于平末端，E.co〃DNA連接酶只能連接兩個(gè)黏性末端，T4

DNA連接酶可以連接兩個(gè)黏性末端或平末端。

（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間連接，形成磷酸二酯鍵。

（3）質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點(diǎn)，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制；質(zhì)粒

DNA分子上有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，便于外源DNA片段插入；質(zhì)粒DNA分子

上的抗生素抗性基因可使導(dǎo)入的宿主細(xì)胞抗某種抗生素，故用含該抗生素的培養(yǎng)基培

養(yǎng)宿主細(xì)胞，能夠存活的即為含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞。

（4）啟動(dòng)子是指位于基因首端的一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的

部位，能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。

（5）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞有花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。

3.答案：（1）④②③①

（2）（耐高溫的）DNA聚合酶；延伸；引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與單鏈DNA結(jié)合

（3）病原菌DNA

（4）在生物體外大量快速擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)

解析：（1）本題考查PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)。若要得到正確的檢測(cè)結(jié)果，正確順序是

④采集病人組織樣本一②從病人組織樣本中提取DNA-③利用PCR擴(kuò)增DNA片段一

①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果。

（2）操作③中使用的酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（汽應(yīng)酶），PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)

可分為變性、復(fù)性、延伸三步，其中復(fù)性就是利用堿基互補(bǔ)配對(duì)形成氫鍵，結(jié)果是兩

種引物分別與2條單鏈DNA模板結(jié)合。

（3）為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與病原菌DNA特異性結(jié)合。

（4）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技

術(shù)，可短期內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。

4.（1）答案：不必；引物和酶

解析：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，只需要根據(jù)一段已知目的基因的核甘酸序列合

成一對(duì)引物，不必知道目的基因的全部序列。PCR體系中需要加入的物質(zhì)有模板（目

的基因或待擴(kuò)增序列）、原料（4種脫氧核甘酸）、耐高溫的DNA聚合酶（篁應(yīng)酶）

和引物等。

（2）答案：自然界已存在；人類生產(chǎn)和生活；改造基因；合成基因；改造

解析：略。

（3）答案：設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)；推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列

解析：蛋白質(zhì)工程的基本思路：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一

推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列f找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列（基因）或合成新的基因f獲

得所需要的蛋白質(zhì)。

（4）答案：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)；動(dòng)物細(xì)胞融合

解析：據(jù)題意，若想獲得既可產(chǎn)生Pi又能無(wú)限增殖的細(xì)胞，可將改造后的細(xì)胞與骨髓

瘤細(xì)胞融合，此過程中需要利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。

（5）答案：對(duì)基因進(jìn)行操作；改造基因才會(huì)遺傳，改造蛋白質(zhì)不遺傳（或改造基因比

改造蛋白質(zhì)容易操作）

解析：蛋白質(zhì)工程的直接操作對(duì)象是基因，通過對(duì)基因進(jìn)行操作實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的

改造。①任何一種天然蛋白質(zhì)都是由基因編碼的，改造了基因也就是對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行了

改造，而且改造過的蛋白質(zhì)可以通過改造過的基因遺傳下去；如果對(duì)蛋白質(zhì)直接改

造，即使改造成功，被改造過的蛋白質(zhì)分子也無(wú)法遺傳。②對(duì)基因進(jìn)行改造比對(duì)蛋白

質(zhì)直接進(jìn)行改造要容易操作，難度要小得多。

5.答案：（1）反（逆）轉(zhuǎn)錄

（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

（3）卡那霉素抗性；鑒定和篩選成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定；用TMV感染煙草，觀察煙草是否出現(xiàn)患病癥狀

解析：（1）圖中①過程表示由RNA合成DNA,即反（逆）轉(zhuǎn)錄過程。

（2）④過程表示將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草（植物）體細(xì)胞，其常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法。

（3）由圖可知，再生植株是在含有卡那霉素的培養(yǎng)基上選擇的，所以在③過程構(gòu)建的

重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，它的作用是鑒定和篩選成功

導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞。

（4）⑥過程還需要進(jìn)行的基因工程操作步驟是目的基因的檢測(cè)與鑒定，在個(gè)體水平上

檢驗(yàn)獲得的煙草能否抗TMV的方法是用TMV感染煙草，觀察煙草是否出現(xiàn)患病癥

狀。

6.答案：（1）目的基因；限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化；相關(guān)基因

是否整合到黃瓜的DNA分子上；蛋白質(zhì)

（2）BD；3、5、8；目的基因（PAcA-CTB基因）沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻

譯

解析：（1）由題意可知，單一使用PAcA基因，機(jī)體免疫應(yīng)答不理想，霍亂毒素中有

增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的氨基酸序列（CTB）,將CTB基因與PAcA基因連接成嵌合

（PAcA-CTB）基因，作為目的基因與Ti質(zhì)粒的T-DNA拼接，構(gòu)建表達(dá)載體，此過

程需要的酶是限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞中常用農(nóng)

桿菌轉(zhuǎn)化法。相關(guān)基因能否在黃瓜細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是相關(guān)基因是否整合到黃瓜

的DNA分子上。此基因工程疫苗起抗原作用的是基因的表達(dá)產(chǎn)物一一蛋白質(zhì)。

（2）由題目已知PAcA-CTB基因部分序列如下（左側(cè)為基因的首端）：

5'CCGTGTATGCCT3'

3'GGCACATACGGA5'

在PCR過程中，子鏈的合成方向是從5,端到3,端，因此應(yīng)該選擇B、D選項(xiàng)的引物進(jìn)

行PCR。從結(jié)果可以看出，3、5、8號(hào)植物中含有PAcA-CTB基因。若獲得的轉(zhuǎn)基因

植物沒有產(chǎn)生相應(yīng)的基因工程疫苗，可能的原因是目的基因（PAcA-CTB基因）沒有

轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻譯。

7.答案：（1）啟動(dòng)子；RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄

（2）逆轉(zhuǎn)錄；2；耐高溫

（3）防止VP1基因、Ti質(zhì)粒的自身環(huán)化和反向連接；卡那霉素

（4）染色體DNA

（5）VP1蛋白的抗體；等量生理鹽水

解析：（1）構(gòu)建具有VP1基因的基因表達(dá)載體還需要在質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子，啟動(dòng)子

是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄過程。

（2）口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA,以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄獲得可重組到質(zhì)粒上的

VP1基因，此過程需要