凡納濱對(duì)蝦miR-10b靶標(biāo)鑒定及Toll3功能研究的任務(wù)書

凡納濱對(duì)蝦miR-10b靶標(biāo)鑒定及Toll3功能研究的任務(wù)書任務(wù)書任務(wù)名稱：凡納濱對(duì)蝦miR-10b靶標(biāo)鑒定及Toll3功能研究任務(wù)目標(biāo)：1.針對(duì)凡納濱對(duì)蝦miR-10b，通過(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其潛在的靶標(biāo)基因，篩選出最有可能被miR-10b調(diào)控的基因。2.通過(guò)取樣及檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)手段鑒定miR-10b的表達(dá)是否確實(shí)在凡納濱對(duì)蝦中存在，并進(jìn)一步驗(yàn)證其與靶標(biāo)基因的關(guān)系。3.特別關(guān)注Toll3（Toll-likereceptor3）基因，探究其在凡納濱對(duì)蝦免疫防御反應(yīng)中的作用及可能被miR-10b調(diào)控的機(jī)制。任務(wù)描述：近年來(lái)，miRNA（microRNA）調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制備受研究人員的關(guān)注。miRNA通過(guò)與靶基因的mRNA結(jié)合，抑制靶基因翻譯過(guò)程，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。與此同時(shí)，Toll-like受體家族成員Toll3對(duì)小型RNA具有高度敏感性，存在Toll-MyD88通路和TRIF通路等下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)機(jī)體免疫防御反應(yīng)。此外，越來(lái)越多的研究表明，蝦類，尤其是對(duì)蝦遭受病原微生物感染后，miRNA和Toll-like受體是其免疫防御反應(yīng)中的重要因素。在此背景下，本任務(wù)旨在通過(guò)分析凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中miR-10b的表達(dá)情況，篩選出潛在的miR-10b靶標(biāo)基因，并重點(diǎn)研究Toll3基因的可能受miR-10b調(diào)控的機(jī)制。具體任務(wù)如下：1.生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-10b潛在的靶標(biāo)基因：根據(jù)已有的miRNA數(shù)據(jù)信息，利用多種預(yù)測(cè)軟件對(duì)凡納濱對(duì)蝦miR-10b的可能靶向基因進(jìn)行預(yù)測(cè)和篩選，并對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行分類分析。2.提取凡納濱對(duì)蝦肝胰腺RNA，檢測(cè)miR-10b的表達(dá)水平：根據(jù)miR-10b的序列設(shè)計(jì)特異性引物，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR等檢測(cè)方法檢測(cè)miR-10b在凡納濱對(duì)蝦中的表達(dá)量。3.篩選有效的miR-10b靶標(biāo)基因：對(duì)預(yù)測(cè)出的miR-10b靶標(biāo)基因，進(jìn)行取樣、PCR擴(kuò)增及測(cè)序等實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)行篩選，并重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。4.研究Toll3基因和miR-10b間的相互作用：對(duì)Toll3基因及其啟動(dòng)子片段進(jìn)行克隆和定向體外失活等實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)研究miR-10b可能調(diào)控Toll3基因及其相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。任務(wù)成果：1.miR-10b在凡納濱對(duì)蝦中的表達(dá)情況，以及預(yù)測(cè)出來(lái)的miR-10b靶標(biāo)基因。2.獲取可靠的Toll3基因和miR-10b調(diào)控相互作用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和研究成果，并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和解釋。3.研究成果的進(jìn)一步分析、論證與展望：對(duì)任務(wù)完成后的結(jié)果進(jìn)行深入的數(shù)據(jù)分析和解釋，對(duì)任務(wù)完成后的實(shí)驗(yàn)成果做出進(jìn)一步的展望和未來(lái)的研究方向建議。任務(wù)提醒：1.能夠熟練掌握常用的生物信息學(xué)軟件，如BLAST等，對(duì)RNA序列進(jìn)行分析。2.能夠熟練操作RNA的提取、PCR擴(kuò)增、實(shí)時(shí)熒光定