RNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和步驟可編輯范本

ＲNＡ的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和步驟關(guān)鍵詞：HYPＥＲLINＫ＂htｔpｓ:/／ｗww.ｂiｏｍart．cｎ／expｅrｉment/s?wd=RNA＂\ｏ”RＮA”\t”_blank”RＮAＨＹPERLＩNK＂httｐs:/／www.biomart.ｃn/exｐerimeｎt/s?wd=％E7%90%BC%E8％8４%82％E7%Ｂ３%９6"\o"瓊脂糖"＼ｔ”＿blaｎk＂瓊脂糖HYPERLＩＮK"https:／/www。bｉomaｒt．cn/expeｒimeｎt/s?ｗｄ＝%E７%94%B5％E6%Ｂ３%B3”\o"電泳＂\ｔ”_blank＂電泳20１2—03—09０0:00來源：互聯(lián)網(wǎng)點(diǎn)擊次數(shù)：3８1４8一、實驗?zāi)康恼莆罩参锟俁ＮＡ非變性膠電泳的原理和方法。二、實驗原理RNＡ電泳可以在變性及非變性兩種條件下進(jìn)行．非變性電泳使用１.０%——１.4％的凝膠，不同的RNA條帶也能分開,但無法判斷其分子量。只有在完全變性的條件下,ＲＮA的泳動率才與分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系。因此要測定ＲNＡ分子量時，一定要用變性凝膠。在需快速檢測所提總RＮA樣品完整性時,配制普通的1％瓊脂糖凝膠即可。?

三、實驗材料、器具及藥品蘑菇的總RNA溶液。電泳儀，電泳槽,電子天平,移液器，槍頭,微波爐，紫外透射檢測儀等.瓊脂糖，1ＸＴＡE電泳緩沖液，0．５μｇ/ｍl溴化乙錠（EＢ)10Ｘ載樣緩沖液。四、實驗步驟(１)用１×TAＥ電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。（２）在超凈工作臺上，用移液器吸取總ＲNＡ樣品4μｌ于封口膜上。在實驗臺上再加入５μl１×ＴAE電泳緩沖液及1μl的１0X載樣緩沖液,混勻后,小心加入點(diǎn)樣孔．（3）打開電源開關(guān),調(diào)節(jié)電壓至1０0V,使RNＡ由負(fù)極向正極電泳,約30miｎ后將凝膠放入EＢ染液中染色5mｉn,用清水稍微漂洗.在紫外透射檢測儀上觀察RNA電泳結(jié)果。?

RNＡ的變性瓊脂糖凝膠檢測試劑:(1）MOPS緩沖液(1０＊）：０。４mol/Ｌ嗎啉代丙烷磺酸(MOPS)（Ph7。0)，0。1mol/LＮaAｃ，10mol/LEＤTA。(2)上樣染料：50%甘油,1mmol/LEDＴA,０．４％溴酚藍(lán)，0．4%二甲苯藍(lán)。（3）甲醛.(４）去離子甲酰胺。v電泳槽清洗:去污劑洗干凈(一般浸泡過夜）—-水沖洗——乙醇干燥——3%H２O２灌滿－—室溫放置10分鐘—-0。1%DＥPC水沖洗。操作:(1)將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍,晾干備用。(2)配制瓊脂糖凝膠.①稱取0。５g瓊脂糖，置干凈的１00ml錐形瓶中，加入40ｍl蒸餾水,微波爐內(nèi)加熱使瓊脂糖徹底溶化均勻。②待膠涼至60－—７０℃,依次向其中加入９ml甲醛、5ml10XMOＰS緩沖液和０。5ul溴化乙錠，混合均勻。③灌制瓊脂糖凝膠。（3)樣品準(zhǔn)備:①

取DEＰC處理過的500ｕl小離心管,依次加入如下試劑：1０xMＯPS緩沖液2ｕl,甲醛３。5ul,甲酰胺(去離子)10ｕl,RＮA樣品4。5uｌ,混勻。②

將離心管置于60℃水浴中保1０分鐘,再置冰上２分鐘。③

向管中加入3uｌ